Таблица 2
Специфичность пенициллинацилаз в реакциях гидролиза 2-галогенацетамидов
|
Фермент |
Пенициллин- |
Пенициллин- |
|
|
ацилаза |
ацилаза |
||
|
Субстрат |
из E. coli |
из A. faecalis |
|
|
V, мкМ/с |
|||
|
Хлорацетамид (25°C) |
7.5±1 |
63±5 |
|
|
Бромацетамид (4°C) |
10.0±1.3 |
58±3 |
|
|
Йодацетамид (4°C) |
9.3±1.3 |
45±2 |
Примечание. Условия проведения эксперимента: 0.05 M фосфатный буфер pH 7.5, с хлорацетамидом при 25°C, с бром- и йодацетамидом - при 4°C, концентрация пенициллинацилазы 25 мкМ
Рис. 3 Кинетика накопления продуктов реакции (сплошные кривые) и расходования исходных субстратов (пунктирные кривые) при гидролизе 2-гало- генацетамидов под действием пенициллинацилазы из Alcaligenes faecalis. Реакцию с хлорацетамидом проводили при 25°C, с бром- и йодацетамидом - при 4°C. Условия проведения экспериментов указаны в подписи к табл. 2
ВЫВОДЫ
Изучение возможностей использования амидов 2-галоген-замещенных уксусных кислот в качестве ацильных доноров в реакциях, катализируемых пенициллинацилазами, выявило способность соединений этой группы инактивировать фермент в ходе каталитического превращения. Наиболее эффективное инактивирующее действие проявляли йодацетамид и бромацетамид, однако негативное влияние побочной активности можно минимизировать при понижении температуры, когда каталитическая активность пенициллинацилаз к этим ацильным донорам остается достаточно высокой, а вклад инактивации фермента в ходе реакции становится незначительным. *
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Svedas V.K., Margolin A.L., Borisov I.L., Berezin I.V. // Enzyme. Microb. Technol. 1980. V. 2. P. 313-317.
2. Gololobov M.Y., Borisov I.L., Svedas V.K. // J. Theor. Biol. 1989. V. 140. P. 193-104.
3. Юшко М.И., Швядас В.К. // Биохимия. 2000. Т. 65. № 12. С. 1624-1633.
4. Gonзalves L.R.B., Sousa R.Jr., Fernandez-Lafuente R., Guisan J.M., Giordano R.L.C., Giordano R.C. // Biotechnol. Bioeng. 2002. V. 80. № 6. P. 622-631.
5. Youshko M.I., Svedas V.K. // Adv. Synth. Catal. 2002. V. 344. № 8. P. 894-898.
6. Youshko M.I., van Langen L.M., De Vroom E., van Rantwijk , Sheldon R.A., Svedas V.K. // Biotechnol. Bioeng. 2002. V. 78. № 5. P. 589-593.
7. Youshko M.I., Moody H.M., Bukhanov A.L., Boosten W.H.J., Svedas V.K. // Biotechnol. Bioeng. 2004. V. 85. № 3. P. 323-329.
8. Zhang Y.-W., Wei D.-Z. // Preparative Biochem. Biotechnol. 2008. V. 38. P. 129-138.
9. Terreni M., Tchamkam J.G., Sarnataro U., Rocchietti S., Ferna^dez-Lafuente R., Joseґ M., Guisan J.M. // Adv. Synth. Catal. 2005. V. 347. P. 121-128.
10. Feng S.-X., Liang S.-Z., Lou W.-Y. // Biocatal. Biotransform. 2008. V. 26. № 4. P. 321-332.
11. Bernardino S.M., Fernandes P., Fonseca L.P. // Biotechnol. Bioeng. 2010. V. 107. № 5. P. 753-762.
12. Wang H.L., Li L.W. // Chin. J. Mod. Appl. Pharm. 2010. V. 27. № 2. P. 126-127.
13. Zhang X.-L., Zong M.-H., Li N. // Bioresour. Bioprocess. 2016. V. 3. № 49. P. 1-8.
14. Справочник химика. Т. 2. Л.-М.: Химия, 1964. С. 1024-1025.
15. Shcherbakova T.A., Korennykh A.V., van Langen L.M., Sheldon R.A., Svedas V.K. // J. Mol. Catal. B: Enzym. 2004. V. 31. P. 63-65.