Необходимо обратить внимание на то что грызуны являются переносчиками опасных инфекций таких как: чума, лептоспироз, трихофития, микоспория, ГЛПС, псевдотуберкулез, туляремия и т.д.
Поэтому первоначально необходимо провести вскрытие грызунов и произвести забор проб и мазков с различных органов и тканей, заражение которых характерно для определенного заболевания. После чего пробы доставляют в лабораторию, где они подвергаются микроскопическому, бактериологическому и биологическому методу исследования. Далее выносится заключение о наличии или отсутствии патогенных микроорганизмов в пробах. Трупы животных после забора материала необходимо уничтожить
Также целесообразно провести противоэпидемические мероприятия, направленные на обследование экипажа на предмет заражения инфекцией. Имеет смысл провести дератизацию и дезинфекцию судна.
Необходимо произвести исследование, направленное на обнаружение обсеменённости почвы в раневой поверхности патогенными и условно патогенными микроорганизмами, с целью установления диагноза, прогрессирования болезни и назначения адекватного лечения.
Поскольку в почве могут обитать, как и аэробные микроорганизмы (стафилококки, стрептококки, и др), так и анаэробные (в основном различные виды клостридий: Cl. perfringens, Сl. novyi, Сl. septicum). То целесообразно микробиологическое исследование начинать с отделения культур аэробов от культур анаэробов для дальнейшего исследования с последующей идентификацией возбудителей, определения их чувствительности к антибиотикам и другим факторам. При этом органический материал из раны помещают на питательные среды, где за короткий срок в благоприятных условиях микроорганизмы образуют обширные колонии.
По размеру и форме колонии, ее цветовому оттенку, характеру поверхности и другим особенностям можно идентифицировать возбудителя. А используя дисково-диффузионный метод, или внедрение в колонии специальных дисков, содержащих расширенный спектр антибиотиков или бактериофагов, можно определить чувствительность флоры к лекарственным препаратам. Питательные среды и диски стандартизированы, и результаты выдаются лабораторией строго по форме.
Так посредством почвы раневая поверхность может инфицироваться спорами возбудителя Clostridium tetani с развитием столбняка, которая также является анаэробной инфекцией. Профилактика анаэробной инфекции заключается в своевременной первичной обработке раны. С профилактической целью при загрязненных ранах нижних конечностей вводят 30 000 АЕ противогангренозной сыворотки.
Профилактика столбняка заключается в плановой вакцинации: АКДС, АДСм, АСм. Экстренная проводится следующим образом: ранее привитым вводят столбнячный анатоксин (0.5 мл), не привитым – 1 мл анатоксина совместно с донорским иммуноглобулином. Все вводится дробно, по методу Безредко. лечение столбняка направлено на введение лошадиной противостолбнячной сыворотки, либо донорского противостолбнячного иммуноглобулина.
Другие микроорганизмы в ране уничтожаются в соответствии с их особенностями.
В стационар поступил пациент с клиникой ботулизма. В лабораторию доставлены рвотные массы, остатки консервов (предполагаемый источник заражения). Составить алгоритм микробиологического исследования материала.
Ботулизм – это острая инфекционная болезнь, развивающаяся после употребления пациентом продуктов, содержащих токсин ботулизма.
Токсин воздействует на синаптическую передачу в нервной системе, блокируя ее. Избирательно поражаются альфа-мотонейроны передних рогов спинного мозга, что обусловливает появление характерных параличей мышц. После установления достоверного диагноза, подтвержденном микробиологическими методами исследования, проводят мероприятия направленные на профилактику и лечение данного заболевания.
Материалом для микробиологического исследования являются рвотные массы, промывные воды желудка, кал, кровь, моча, остатки пищевых продуктов. При летальном исходе исследуют содержимое желудка, кишечника, лимфатические узлы, головной и спинной мозг.
Используют методы микробиологической диагностики: бактериологический, биологический (для выявления ботулотоксина в исследуемом материале). С целью выявления ботулотоксина можно использовать также РОПГА с антительным диагностикумом и определение активности фагоцитов.
Лабораторное исследование: необходимо провести исследование рвотных масс, и пищевых продуктов, а также другие материалы исследования: кровь, моча, фекалии. Исследование направлены одновременно на обнаружение в материале ботулотоксина и выделение возбудителя. Ботулотоксин определяют в биопробе на животных или в РНГА и ИФА. Животным вводят смеси материала с антитоксической сывороткой типов А, В, Е и др. Кровь исследуют только на наличие токсина на морских свинках. Испражнения исследуют путем посева на среды в анаэробных условиях. Содержимое консервов аналогично исследуются для определения токсина и возбудителей.
АЛГОРИТМ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА. Исследуемый материал растирают в стерильной ступке с физиологическим раствором хлорида натрия. Посев материала выполняют на специальные питательные среды, например, среду Китта-Тароцци. Одну пробу засевают в 4 пробирки, две из которых прогревают при температуре 60°С 15 мин. (для селекции C. botulinum типа Е), а остальные - при температуре 80°С 20 мин. Накопление культур клостридий типа Е и F происходит при температуре 28°С, типа А, В, С - при 35°С в течение 48 часов. Через 24-48 часов выдержки посевов в термостате отмечают характер роста на среде Китта-Тароцци: помутнение, газообразование. Готовят мазки, окрашивают по Граму. В случае выявления типичных клостридий с терминально расположенными спорами овальной формы в виде «теннисной ракетки» делают, пересев на кровяной сахарный агар для получения отдельных колоний и выделения чистой культуры. Для идентификации чистой культуры возбудителя определяют сахаролитические и протеолитические свойства. Антигенные свойства изучают в реакции агглютинации с типовыми сыворотками. Одновременно с изучением ферментативных свойств возбудителя выявляют ботулотоксин в фильтрате бульонной культуры и определяют его тип в реакции нейтрализации.
АЛГОРИТМ БИОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА. Выявление ботулотоксина и определение его типа с помощью реакции нейтрализации имеет важное значение для назначения специфической терапии. Для проведения реакции нейтрализации используют сухие диагностические антитоксические сыворотки типов А, В, С, Е, F, которые разводят физиологическим раствором до 100-200 МЕ / мл, что обеспечивает нейтрализацию гомологичного токсина в исследуемой пробе. Реакцию нейтрализации проводят либо со смесью сывороток (предварительная реакция), либо с моновалентными сыворотками для определения типа токсина.
Профилактика: уничтожение всей партии пищевых продуктов, потенциально содержащей ботулотоксин и его продуцентов с целью предотвращения массовой заболеваемости; Для специфической профилактики используют ботулинический полианатоксин, содержащий анатоксины А, В и Е. Для экстренной профилактики используют поливалентную (типов А, В, Е) лошадиную сыворотку, выпускаемую в сухом и жидком виде.
Экспресс диагностика: иммунофлюресцентный метод, ИФА.
Метод иммунофлюоресценции: больному в носовой ход вводится шлифованное стекло и делается легкий соскоб. Потом стекла обрабатывают люминесцирующими сыворотками и, если в клетке есть вирусный антиген, антитела будут с ним реагировать, и мы увидит свечение.
Второй способ - для получения клинического материала поочередно в обе полости носа на глубину 2–3 см вводят тампон легким движением по наружной стенке носа. Затем тампон слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход, прижимают наружную стенку носа и вращательными движениями тщательно снимают слущенный эпителий. Тампоны погружают в пробирку с 2 мл фосфатно-буферного раствора (ФБР). Взятый биоматериал быстро (в течение 1–4 часов) доставляют в лабораторию.
Иммуноферментный метод обнаружения вирусных антигенов используется для ранней дифференциальной диагностики гриппа типа А или В путем выявления вирусных антигенов в носоглоточных секретах (аспираты, смывы) от больных с симптомами ОРВИ.
Метод может быть использован для мониторинга инфекционного и вакцинального процесса, для изучения острых и хронических форм вирусных инфекций, расшифровки природы эпидемических вспышек и индивидуальной диагностики.
Вирусологический. Берут смыв из носоглотки больного, заражают куриный эмбрион, после инкубации проверяют наличие вируса по реакции гемагглютинации, титр вируса определяют в реакции торможения гемагглютинации.
Серодиагностика. Диагностическим критерием является нарастание титра антител. Это ретроспективный метод.
Исследуемый материал – слизь из зева, носа, пленки с миндалин, раневое отделяемое, кровь.
При наличии псевдомембран (ложных пленок) или дифтерийной пленки, по возможности, следует взять мазок из-под ложной пленки или взять на анализ небольшой участок пленки. Мазки на посев следует брать даже если антибактериальная терапия к этому моменту уже началась.
При отправке образцов врачи должны известить местную лабораторию о подозрении на дифтерию.
Бактериоскопический метод – микроскопия мазков из исследуемого материала (окраска по Граму, Нейссеру, Леффлеру).
Бактериологический метод – выделение чистой культуры возбудителя и ее идентификация. Необходимо не только выделить из исследуемого материала дифтерийную палочку, но и определить ее токсигенность.
Определение токсигенности С. dphtheriae:
Биологическая проба на животных – внутрикожное заражение морских свинок фильтратом культуры дифтерийных бактерий – вызывает некроз в месте введения. Минимальная смертельная доза (20-30 нг) убивает морскую свинку на 4-5 день;
Заражение куриных эмбрионов (наблюдается гибель под действием токсина);
Внесение в культуру клеток (выявление ЦПД);
Метод твердофазного ИФА с меченными пероксидазой антителами;
Использование ДНК-зонда для обнаружения tox-оперона в геноме;
Тест Элека и Оухтерлони (1948 г.) – основу составляет способность токсина и антитоксина диффундировать в агар и образовывать преципитаты (усы, стрелы) по ходу диффузии – метод двойной преципитации в геле, предварительный ответ может быть выдан через 48 часов, через 72 часа – заключение о наличии токсигенных коринебактерий, через 96 часов – окончательный ответ.
3. Серодиагностика – РПГА, ИФА, РИА, реакция ко-агглютинации, реакция Шика.
4. Экспресс – диагностика – РИФ, ИФА, РПГА, реакция ко-агглютинации.
Биохимический и молекулярно-биологический метод – ПЦР (обнаружение tox-гена). При получении положительного результата ПЦР на tox-ген следует действовать незамедлительно, не дожидаясь результатов теста Элека. Отрицательный результат ПЦР на ген дифтерийного токсина является окончательным, и по этим изолятам не требуется проводить дальнейшие тесты на токсигенность.
12. В природном очаге отмечено несколько случаев заболевания людей с подозрением на бубонную форму чумы. У одного из заболевших проведены бактериоскопия содержимого бубона и посев на мясо-пептонный агар для выделения чистой культуры. В мазке, окрашенным метиленовым синим, обнаружены мелкие овоидные, биполярно окрашенные палочки. После суточного инкубирования посева рост на питательной среде не отмечался. Для подтверждения диагноза была взята кровь больного и проведена биологическая проба, сделан мазок-отпечаток из органов животного. Результат микроскопии при окраске метиленовым синим: синего цвета овоидные, биполярно окрашенные мелкие палочки на фоне клеток ткани животного. Перечислите микробиологические методы, подтверждающие этиологию заболевания.
1. Для начала стоит сказать, что микробиологическая диагностика проводится, в специализированных противочумных лабораториях, обученным и заранее привитым против чумы персоналом, так как чума по степени опасности относятся к особо-опасным инфекциям. Сотрудники работают в противочумных костюмах.
2. При микроскопии мазка видны биполярно окрашенные грамотрицательные палочки, что позволяет поставить предварительный диагноз.
3. Методы:
Биопроба проводится путем накожного или внутрибрюшного заражения морских свинок. При вскрытии – гемморагическая септицелия. Микроскопированием мазков-отпечатков устанавливают наличие возбудителя.
Бактериоскопическое исследование. Из исследуемого материала готовят мазки, окрашивают по Граму и водным раствором метиленового синего. Бактерии чумы представляют собой грамотрицательные палочки овоидной формы.
Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на чашки с питательным агаром. Посевы инкубируют при 25С. Первичное изучение посевов производят через 10ч. К этому сроку появляются колонии, которые образованы вирулентными R-формами. Мало- и авирулентные бактерии формируют S-формы колоний. Идентификацию чистой культуры проводят по морфологии бактериальных клеток, характеру роста, антигенным и биохимическим свойствам, чувствительности к специфическому фагу и биопробе.
На бульоне бактерии образуют пленку; ферментируют многие сахара до кислоты, индола не образуют, желатин не разжижают. Содержат групповой термостабильный соматический антиген и специфический термолабильный капсульный антиген.
Экспресс-методы лабораторной диагностики:
1.Иммунофлюоресцентный метод позволяет обнаружить присутствие возбудителя как в патологическом материале, так и в объектах окружающей среды (вода, воздух), а также в пищевых продуктах и эктопаразитах. С этой целью используют люминесцентную видоспецифическую противочумную сыворотку, люминесцентные противокапсульную и противосоматическую сыворотку.
2.РПГА - для обнаружения антигенов бактерий в материале с помощью стандартной противочумной сыворотки, антитела которой нагружены на эритроциты.
При поступлении пациента в приемное отделение врач отметил у больного сухой кашель, увеличение печени и подмышечных узлов, которые были малоболезненны и имели четкие контуры. Был поставлен предварительный диагноз туляремия (?). Однако при посеве содержимого бубона на желточную среду Мак-Коя чистую культуру Francisella tularensis выделить не удалось. Можно ли исключить туляремию? Составить алгоритм микробиологического исследования материала.
В большинстве случаев F. tularensis выделить из клинического материала с помощью бактериологического метода невозможно. Поэтому исследуемым материалом сначала заражают гвинейских свинок (лучше) или белых мышей, а потом от них выделяют и идентифицируют чистую культуру.
Предпочтение отдается серологическим реакциям и аллергическим пробам (в обычных клинических условиях для диагностики туляремии проводят только серологические реакции и аллергическую пробу с тулярином. Начиная с 10-12 дня болезни ставят объемную реакцию агглютинации, которая по методике не отличается от реакции Райта. У больного берут 2-3 мл крови из локтевой вены или пальца, получают сыворотку, которая должна быть абсолютно прозрачной. Реакцию ставят с разведенными сыворотки от 1:50 до 1:800, сопровождая ее соответствующими контролями. Антигеном в реакции агглютинации служит туляремийный диагностику). Поэтому, исключить туляремию нельзя.
В клинику поступил больной с предварительным диагнозом сибирской язвы, кожная форма (?). В отделяемом карбункула обнаружены грамположительные палочки, расположенные единично, попарно или короткими цепочками, напоминающими бамбуковую трость. На чашке с МПА из отделяемого карбункула выросли колонии, край которых напоминает львиную голову. В мазке-отпечатке органа белой мыши на красном фоне видны крупные, расположенные цепочкой палочки, окруженные бесцветной капсулой, общей для всей цепочки (окраска фуксином). Перечислите микробиологические методы, подтверждающие этиологию заболевания.
Для микробиологической диагностики сибирской язвы берут содержимое пустулы, гнойное отделяемое из карбункула, кровь, мочу, мокроту, испражнения и рвотные массы.
Микробиологические методы, подтверждающие этиологию заболевания:
Бактериоскопический метод - мазке из патологического материала окрашивают по Граму и для выявления капсул - по Романовскому- Гимзе или раствором метиленового синего (синька Мансона).
Бактериологический метод с выделением чистой культуры на МПА и МПБ, кровяном агаре. Ставят тесты «жемчужного ожерелья», чувствительность к фагу.
Биологическая проба на морских свинках и мышах.
Кожно-аллергичекая проба с антраксином. Реакция термопреципитации по Асколи при определении сибереязвенного гаптена в загнившем материале.