Автореферат: Фармако-клиническое обоснование применения препарата Геприм для кошек при жировом гепатозе

Сбор анамнеза - при опросе владельцев животных учитывались порода, возраст; данные о вакцинациях, контактах с другими животными, составе рациона, применяемых медикаментах, перенесенных ранее заболеваниях.

Общий клинический осмотр - учитывали общее состояние животного, степень истощения, цвет видимых слизистых оболочек и кожного покрова. Методом пальпации определяли наличие болезненности в области печени, увеличение ее границ.

Взятие крови на морфологические и биохимические исследования - данная процедура во всех случаях сочеталась с введением периферического внутривенного катетера.

Общий клинический анализ крови проводился в лаборатории клиники “Биовет” на автоматическом гематологическом анализаторе Abacus Junior B, 8. При этом определялось количество лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов, содержание гемоглобина.

Биохимический анализ сыворотки крови проводился на анализаторе MINDRAY BA-88A. Исследовались такие показатели, как аланинаминотрансфераза (АЛТ), аспартатаминотрансфераза (АСТ), щелочная фосфатаза, билирубин, глюкоза, креатинин, мочевина и альфа амилаза.

Ультразвуковая диагностика проводилась на аппарате Mindray DP-6900. Оценивали размеры органа, эхогенность, изменение структуры, сосудистый рисунок, желчные протоки, желчный пузырь.

Тонкоигольную аспирационную биопсию проводили иглами типа CHIBA,

Опыты по изучению гепатопротективных свойств препарата “Геприм для кошек” проводили на базе ветеринарной клиники “Биовет” в один этап. Для этого было сформировано 6 групп больных жировым гепатозом кошек.

Первые три группы были контрольными, вторые три группы являлись опытными. Всем животным опытных групп был однократно введен “Геприм для кошек” подкожно в область холки из расчета 0,2 Ед/кг.

Спустя 4 недели после начала лечения у всех животных опытных и контрольных групп были произведены повторные морфологические и биохимические анализы крови.

Математический анализ и статистическую обработку данных проводили с помощью программ Microsoft Excel 2010, Биометрия, Statistica, IBM SPSS Statistics 21.

2.2 Результаты исследований

2.2.1 Изготовление препарата “Геприм для кошек”

В связи с отсутствием специфической единой схемы лечение жирового гепатоза кошек, а так же эффективного специфического препарата нами был изготовлен “Геприм для кошек” и включен в общую схему лечения. Для получения экспериментального препарата было выбрано перспективное и развивающееся направление - использование цитотоксических сывороток. Мы использовали сыворотки из крови животных-доноров, путём гипериммунизации их антигенами, приготовленными из тканей печени и селезенки кошки. Применение препарата оказывает стимулирующее воздействие не только на печеночную ткань, но, что особенно важно, на иммунную систему организма.

Препарат представляет собой прозрачную слегка опалесцирующую жидкость, соломенно-желтого цвета, без ярко выраженного запаха и без посторонних примесей.

Далее была определена оптимальная доза применения препарата, которая составила 0.2 ЕД/кг. Для этого были подобраны три группы кошек с диагнозом жировой гепатоз, от которых была взята кровь для биохимического анализа. Первой группе животных был введен препарат в дозе 0.1 ЕД/кг, второй - 0,2 ЕД/кг, третьей - 0,4 ЕД/кг. Через неделю после введения препарата была взята кровь для повторного биохимического анализа.

У первой группы животных были отмечены следующие снижения показателей: АСТ - на 9,1%, АЛТ - на 11,5%, Щелочной фосфатазы - на 9,5%, билирубина - на 10,7%. У второй группы животных снижение всех показателей было более значительное. Так уровень АСТ упал на 24,7%, уровень АЛТ снизился на 27,5%, щелочной фосфатазы - на 29,6%, и билирубина - на 27,3%. В третьей группе животных снижение показателей было приблизительно такое же как у животных второй группы. Так уровень АСТ в крови снизился на 24,4%, АЛТ - на 25,5%, щелочной фосфатазы - на 27,2, и билирубина - на 25,0%. Таким образом оптимальная доза препарата “Геприм для кошек” составила 0,2 ЕД/кг. Препарат введенный в дозе 0.1 ЕД/кг не показал необходимой эффективности. Эффективность введения препарата в дозе 0,4 ЕД/кг, была практически такой же, как и в дозе 0,2 ЕД/кг, но экономически более затратной.

Исследование токсических свойства препарата “Геприм для кошек” изучали на 10 белых мышах, 10 белых крысах и 10 кошках.

В результате проведенных исследований установлено, что при подкожном введении препарата “Геприм для кошек” в дозе 2 ЕД/кг (доза увеличена в 10 раз от оптимальной) в течение периода наблюдений не вызывала гибели и интоксикации всех видов животных, она не влияла отрицательно на их общее состояние и поведение. Рефлексы у животных оставались сохраненными. Животные были подвижны, с хорошо выраженным аппетитом. При этом нарушений функциональной активности органов пищеварения и мочеотделения у них не наблюдали.

На основании экспериментальных данных установлено, что при подкожном способе введения препарата в дозе 2 ЕД/кг живой массы (доза увеличена в 10 раз) отклонений показателей жизнедеятельности не отмечалось и не регистрировалась гибель животных.

Согласно существующей классификации химических веществ по степени их воздействия на организм, препарат относится к малотоксичным (4 группа) (Плетнева Т. В. и др., 2000 г.).

Хроническую активность препарата “Геприм для кошек” определяли на 10 половозрелых белых мышах и 10 беспородных кошках.

В ходе изучения хронической токсичности, когда препарат вводили подкожно в дозе 2 ЕД/кг (доза увеличена в 10 раз от рекомендуемой) в течение 3 дней (Третьяков А.Д.,1988), отклонений в состоянии подопытных животных не было обнаружено.

В биохимической картине крови кошек показатели колебались в пределах физиологической нормы. Гибели подопытных животных при изучении хронической токсичности отмечено не было.

Таким образом, из представленных выше данных видно, что препарат “Геприм для кошек” не обладает острой и хронической токсичностью, и даже в значительно завышенных дозах (10 раз) не оказывает отрицательных воздействий как на отдельные органы и системы, так и на организм в целом.

Опыты по изучению эмбриотоксических свойств “Геприм для кошек” проводили на беспородных половозрелых крысах-самках, массой тела 150-200г.

В ходе исследования не было отмечено статистически достоверных различий в реакции яичников на введение препарата. Так число желтых тел у животных в опытной и контрольной группах находилось практически на одном уровне - 7,5 и 7,8 соответственно. Предимплантационная смертность в обоих группах была практически одинаковой: в опытной группе она составила 3,3%, в контрольной - 2,2%. Постимплантационная смертность в группах была следующая: в опытной группе она составила 8%, в контрольной - 11%. Общая смертность в обоих группах так же практически не отличалась, так в опытной группе этот показатель составил 11,1%, а в контрольной - 12,9%.

Таким образом, из представленных выше данных, можно сделать вывод, что препарат “Геприм для кошек” в увеличенной дозе не обладает эмбриотоксическими свойствами.

2.2.2 Изучение факторов, влияющих на возникновение жирового гепатоза кошек в городе Магнитогорске

Следующим этапом работы было проведение исследования по изучению заболеваемости кошек жировым гепатозом в частной ветеринарной клинике “Биовет” города Магнитогорска Челябинской области. В первую очередь были изучены факторы, влияющие на возникновение и развитие патологического процесса. Была проанализирована зависимость возникновения жирового гепатоза от возраста, пола обследуемых животных, условий кормления и содержания, а также возможной сезонности заболевания. В ходе анализа полученных данных было выявлено, что все случаи гепатоза были зафиксированы у животных в возрастном диапазоне от 6 до 15 лет при чем 55% случаев приходилось на кошек в возрасте от 6 до 10 лет и 45 % - на кошек от 11 до 15 лет.

В исследовании зависимости заболевания от половой принадлежности были получены следующие результаты - процент котов с диагнозом жировой гепатоз был равен 64%, а кошек - 36%.

В зависимости от типа кормления заболеваемость жировым гепатозом распределилась следующим образом. Наиболее подверженные риску заболевания печеночной патологией оказались животные, находящиеся на натуральном питании - 45,5%. В свою очередь самые низкие риски заболеть патологиями печени имеют животные, находящиеся на кормлении кормами премиум-класса - 18,1%. Животных, рацион которых состоит в основном из кормов эконом-класса, так же находятся в группе риска, и их заболеваемость равна 36,4%.

Кроме того, нами были определены состояния предшествующие возникновению данной патологии: ожирение (излишний вес) - 77,3% всех животных; перенесенные ранее заболевания печени воспалительного генеза (холангиты и холангио-гепатиты) - 18,2%; прочие заболевания желудочно-кишечного тракта - 4,5%

Исследование заболеваемости жировым гепатозом у кошек в зависимости от сезона года показало, что наибольшее число случаев до 81,8% приходится на сентябрь, октябрь (соответственно 40,9% и 40,9%). Вероятнее всего данная статистика связана с особенностями сезонного метаболизма кошек.

2.2.3 Дифференциальная диагностика жирового гепатоза

Препарат “Геприм для кошек” является высоко специфическим и предназначен для лечения исключительно хронических заболеваний печени. Исходя из этого, особое внимание в наших исследованиях, мы уделили точной постановке диагноза жирового гепатоза печени.

У всех животных, поступивших в клинику, с жировым гепатозом, отмечались следующие клинические признаки: частичный или полный отказ от корма, желтушность (иктерус) видимых кожных и слизистых оболочек, рвота, угнетение функции ЦНС, изменение цвета мочи, потеря массы тела. У ряда животных диагностировались все перечисленные симптомы, а у некоторых только отдельные их формы.

В ходе гематологических исследований крови были получены следующие результаты. Количество лейкоцитов находилось в пределах нормы, что означало отсутствии острых воспалительных процессов. Количество эритроцитов в среднем по группе было снижено на 12,1 %. Содержание гемоглобина, находилось на нижней границе физиологической нормы. Данные изменения картины красной крови часто встречаются при хронически протекающих патологических процессах.

При биохимическом исследовании крови у обследуемых животных были отмечены следующие изменения: уровень АЛТ в плазме был превышен в 5,9 раз, что указывало на обширное паренхиматозное поражение печени. Уровень АСТ превысил норму в 6,3 раза. Коэффициент Ритиса составил 0,63, что так же указывало на паренхиматозное поражение печени. Содержание общего билирубина было превышено в 4,7 раз, щелочной фосфатазы - в 4.6 раз, что могло указывать как на паренхиматозные поражения печени, так и состояние холестаза. Уровень альфа-амилазы был превышен в 1,2 раза. Показатели работы почек - количество мочевины и креатинина находились в пределах физиологической нормы.

Исходя из полученных нами данных в ходе ультразвукового исследования были сделаны следующие выводы - у всех обследованных животных присутствовали признаки жирового гепатоза, такие как увеличение границ печени, повышение эхогенности, зернистость структуры, а также снижение визуализации сосудистого рисунка органа.

Нами при изучении мазков, полученных при проведении тонкоигольной аспирационной биопсии, были получены следующие результаты. У 100% животных обнаружена вакуолизация в биоптатах печени, в разной степени. Данные изменения полностью подтвердили предварительно поставленный диагноз-жировой гепатоз. Кроме того, у 23% животных не были обнаружены ядра в более чем 50% гепатоцитах с жировой вакуолизацией. Данный фактор указывал на тяжело протекающие процессы в организме больных кошек, и полностью совпадал с наличием симптомокоплекса у данных животных. Именно у этих животных наблюдалось особо тяжелое течение болезни, отображенных в таблице.

Таблица 1 - морфо-биохимические показатели крови у больных кошек.

2.3 Влияние препарата “Геприм для кошек” на биохимические и гематологические показатели крови больных гепатозом кошек