Диагностика инфицированных лейкозом крупного рогатого скота животных осуществлялась за счет изучения гематологических показателей крови животных, которые ранее положительно реагировали в РИД.
При лабораторной диагностике проб крови от коров нами был использован автоматический гематологический анализатор URIT-3020, позволяющий кроме количественного изучения содержания лейкоцитарного пула клеток (количество лейкоцитов) детектировать содержание количества гранулоцитов (базофилы, эозинофилы, нейтрофилы), лимфоцитов и моноцитов (рис. 1) [6, 14].
Рис. 1. - Гематологические показатели исследуемых коров
Стандартная методика определения количества лейкоцитов в исследуемых образцах крови не раскрывает глубину развития персистентного лейкоцитоза у инфицированных животных. С этой целью были дополнительно проведены гематологические исследования по выявлению форменных элементов лейкоцитарного пула (гранулоциты, моноциты и лимфоциты) в пробах крови крупного рогатого скота с использованием автоматического гематологического анализатора URIT-3020.
Установлено, что у РИД-отрицательных животных показатели содержания лейкоцитов, в том числе лимфоцитов, моноцитов и гранулоцитов, практически были близки к референтным параметрам геманализатора URIT-3020 (5,0-16,0; 1,5-9,0; 0,3-1,6 и 2,3-9,1 тыс./мкл) и составили соответственно в среднем 9,5; 2,0; 0,5 и 7,5 тыс./мкл (рис.1).
Напротив, у РИД-положительных животных показатели содержания лейкоцитов, в том числе лимфоцитов, моноцитов и гранулоцитов, отличаются от физиологических констант и составили соответственно в среднем 27,76; 7,23; 2,37 и 18,2 тыс./мкл (рис. 1).
Анализ гематологических данных, полученных на автоматическом анализаторе URIT- 3020, указывает на то, что у инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота животных показатели содержания лейкоцитов превышают референтные значения в три раза, в том числе по пулу лимфоцитов - в 4 раза, по моноцитам - в 5 и гранулоцитов - в 2,5 раза.
Данные гематологических показателей по лейкоцитарному пулу указывают на течение развития лейкозного процесса и дают возможность в дополнение к существующим диагностическим тестам охарактеризовать качественные изменения в пулах агранулоцитарного и гранулоцитарного ряда.
Поскольку у РИД-отрицательных животных количество лейкоцитов соответствует физиологической норме, то можно с уверенностью говорить, что данные о количественном соотношении лейкоцитарных элементов (лимфоцитов, моноцитов и гранулоцитов) можно было бы использовать на завершающем этапе проведения оздоровительных противолейкозных мероприятий в животноводческих хозяйствах.
Гематологические показатели содержания лейкоцитов: лимфоцитов, моноцитов и гранулоцитов (базофилов, эозинофилов и нейтрофилов) дают нам дополнительную информацию о качественных изменениях внутри лейкоцитарного пула, позволяя судить о тяжести развития лейкозного процесса у инфицированных особей и дальнейшего перехода в терминальную, гематологическую стадию инфекционного процесса.
В ходе наших исследований также были установлены некоторые отличия в биохимических показателях РИД-положительных на вирус лейкоза коров, но клинически и гематологически здоровых, в отличие от РИД-отрицательных. Результаты биохимических показателей в крови коров определяли на биохимическом анализаторе ClimaMC-15 (табл. 1).
Таблица 1
Результаты биохимического исследования крови коров в начальной стадии инфицирования (М±т; n = 10)
|
Показатель |
Группа животных |
||
|
Интактные (РИД-) |
Инфицированные (РИД+) |
||
|
Общий белок, г/л |
72,34±3,1 |
68,42±2,3 |
|
|
Альбумины, г/л |
33,84±1,2 |
30,04±1,3* |
|
|
Глобулины, г/л |
38,50±2,3 |
38,38±3,6 |
|
|
Альбумины/ |
0,87±0,1 |
0,78±0,05* |
|
|
АсАТ, мкмоль/ч-л |
1,83±0,1 |
2,29±0,2* |
|
|
АлАТ, мкмоль/ч-л |
0,67±0,1 |
0,65±0,1 |
|
|
Коэффициент Де Ритиса |
2,73±0,3 |
3,52±0,2 |
|
|
Щелочная фосфатаза, ед. |
1,48±0,2 |
2,38±0,2* |
|
|
Мочевина, ммоль/л |
2,97±0,3 |
2,00±0,2* |
|
|
Креатинин, мкмоль/л |
111,24±10,3 |
122,13±14,4 |
|
|
Глюкоза, ммоль/л |
3,55±0,3 |
2,17±0,1* |
|
|
Общий холестерин, ммоль/л |
1,84±0,2 |
2,17±0,2 |
|
|
Кальций общий, ммоль/л |
1,97±0,1 |
2,32±0,2* |
|
|
Фосфор неорганический, ммоль/л |
1,79±0,1 |
1,93±0,05 |
|
|
Магний, ммоль/л |
0,89±0,01 |
0,86±0,01 |
*р<0,05 (РИД+ по отношению к РИД-)
Иммунобиологическая реактивность животных в первую очередь зависит от белкового обмена и соотношения белковых фракций в сыворотке крови, поэтому важными диагностическими тестами служат показатели общего белка, альбуминов, глобулинов и соотношение альбуминов к глобулинам. У инфицированных коров были достоверно снижены значения следующих биохимических показателей: концентрация альбуминов - на 11,2%, альбумин-глобулинового соотношения - на 10,4, общий белок - на 5,42% (табл. 1). физический химический кровь молоко корова лейкоз
Из данных таблицы 1 видно, что в группе инфицированных РИД-положительных животных по отношению к интактным РИД-отрицательным была достоверно повышена активность следующих ферментов: АсАТ - на 25,1; ЩФ - на 60,8, креатинина - на 9,79%. Это подтверждает начинающиеся нарушения промежуточного обмена веществ, затрагивающих все функциональные структуры организма животных.
Уровень концентрации мочевины достоверно снижен у инфицированных животных на 32,7% (при р<0,05), по сравнению с интактными, находясь ниже физиологических параметров, что является прогностически неблагоприятным признаком, указывающим на нарушение обменных процессов в печени - мочевино-образовательной функции и белкового обмена - которое идентифицируется снижением содержания белковых показателей крови.
Для оценки углеводного обмена в сыворотке крови определяли содержание глюкозы. Уровень глюкозы был снижен у инфицированных животных на 38,9%, по сравнению с интактными (при р<0,05), находясь ниже физиологической нормы, что свидетельствует о нарушении углеводного обмена и энергетическом дисбалансе в организме, а также о поражении печени.
Уровень жирового обмена, который оценивали по показателю холестерина, был выше у инфицированных животных на 17,93%, по сравнению с интактными. Но в обеих группах исследуемые показатели не выходили за пределы допустимых физиологических значений для коров.
Макроэлементный состав сыворотки крови у сравниваемых групп не показывает еще физиологических отклонений в начальной стадии инфицирования ВЛ КРС, хотя концентрация общего кальция в группе инфицированных животных была увеличена на17,8% (при р<0,05) по сравнению с интактной группой, но в обеих группах они находятся в пределах нормативных констант для крупного рогатого скота.
Полученные биохимические данные могут указывать на большую активность периферической зоны метаболизма и меньшую активность центральной зоны метаболизма у РИД- положительных коров.
Одновременно с биохимическими показателями крови у инфицированных ВЛ КРС животных изменяются и физико-химические показатели молока, отражая функциональные расстройства промежуточного обмена. Результаты исследования физико-химических показателей молока определяли на анализаторе качества молока «Лактан1-4» (табл. 2.)
Таблица 2
Физико-химические показатели молока коров в начальной стадии инфицирования (М±т; n = 10)
|
Показатель |
Группа |
||
|
Интактные (РИД-) |
Инфицированные (РИД+) |
||
|
Кислотность, °Т |
17,25±1,45 |
15,34±1,16 |
|
|
Плотность, г/см3 |
1,028±0,005 |
1,033±0,003 |
|
|
Степень чистоты, класс |
I и II |
I и II |
|
|
Жир, % |
3,56±0,09 |
3,87±0,08* |
|
|
Белок, % |
3,26±0,07 |
2,85±0,03** |
*р<0,05;**р<0,01 (РИД-положительные по отношению к РИД-отрицательным)
Органолептические свойства молока у исследуемых групп животных соответствовали требованиям действующего стандарта по цвету, запаху и консистенции [1, 17].
Результаты физико-химических показателей молока показали, что в молоке инфицированных животных относительно к интактным достоверно увеличилось количество жира - на 0,31% (р<0,05), значительно уменьшилось содержание белка - на 0,41% (р<0,01), находясь при этом в пределах допустимых значений, приведенных в ГОСТ 31449-2013 «Молоко коровье сырое» [1]. Однако, важнейший показатель свежести молока - кислотность - уменьшился у инфицированных животных на 1,91°Т по отношению к интактным, находясь ниже требований ГОСТа. Снижение кислотности молока является одним из показателей, указывающих на заболевание животных, и служит фактором его выбраковки.
Заключение
В результате проведенных исследований определены гематологические и биохимические показатели крови и молока животных, характеризующие начальную стадию развития инкубационного периода лейкоза крупного рогатого скота.
Для характеристики тяжести развития патологического лейкозного процесса у коров мы рекомендуем использовать определение соотношения агранулоцитов к гранулоцитам с применением автоматических гематологических анализаторов, позволяющих судить о степени и глубине поражения иммунных клеток (количество лимфоцитов), фагоцитов (количество моноцитов) и степени развития воспалительных процессов (количество гранулоцитов).
Результаты биохимических исследований крови показали, что у инфицированных вирусом лейкоза животных происходит нарушение обменных процессов, проявляющихся диспротеинемией (уменьшением содержания общего белка, альбуминов, глобулинов, соотношения альбуминов и глобулинов); снижением концентрации мочевины и глюкозы в сыворотке крови; повышением активности ферментов аминотрансферазы, креатинина и щелочной фосфатазы.
В молоке инфицированных коров, по сравнению с молоком, полученным от здоровых животных, снижается содержание белка и уменьшается титруемая кислотность, что является дополнительным лабораторным тестом, указывающим на наличие патологии.
Таким образом, в хозяйствах рекомендуется проводить дополнительные гематологические и биохимические исследования крови, а также определение физико-химических показателей качества молока, которые дополняют лабораторные тестирования крупного рогатого скота, позволяя обнаружить раннее инфицирование животных ВЛКРС.
Библиография
1. ГОСТ 31449-2013. Молоко коровье сырое. Технические условия / подготовлен государственным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности" Российской академии сельскохозяйственных наук. - Москва: Стандартинформ, 2013. - 8 с.
2. Гизатуллин, И.А. Изменения некоторых биохимических показателей крови и молока коров, инфицированных ВЛ КРС / И.А. Гизутуллин, Ф.Г. Гизатуллина // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2011. - С. 138-143.
3. Валихов, А.Ф. Лейкоз крупного рогатого скота: контроль и профилактика болезни [Обзор] // Молочная промышленность. - 2018. - №9. - С. 74-77.
4. Донник, И.М. Профилактика лейкоза крупного рогатого скота в племенных хозяйствах Краснодарского края / И.М. Донник, Г.А Джаилиди, С.В. Тихонов // Ветеринария Кубани. - 2013. - №5. - С. 15-19.
5. Донник, И.М. Результативность комплексных мероприятий борьбы с лейкозом крупного рогатого скота на Среднем Урале / И.М. Донник, И.А. Шкуратова, А.Т. Татарчук [и др.] // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2015. - №2. - С. 42-46.
6. Дронов, В.В. Болезни системы крови: методы диагностики и клиническое толкование результатов исследований / В.В. Дронов, И.Н. Яковлева. - Белгород: Изд. БелГСХА, 2005. - 56 с.
7. Дронов, В.В. Результаты апробации унифицированного метода изготовления мазков крови / В.В. Дронов, И.Н. Сегал // Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения. - 2003. - С. 129.