Статья: Определение амлодипина в субстанциях и готовых лекарственных препаратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Полная исследовательская публикация _______ Сафронова И.А., Шафигулин Р.В., Васильева М.В.,

Иванова Т.В. и Буланова А.В.

68 _______________ http://butlerov.com/ ______________ ©--Butlerov Communications. 2012. Vol.30. No.5. P.64-67.

Полная исследовательская публикация Тематический раздел: Физико-химические исследования.

Регистрационный код публикации: 12-30-5-64 Подраздел: Хроматография.

64 __________ ©--Бутлеровские сообщения. 2012. Т.30. №5. _________ г. Казань. Республика Татарстан. Россия.

Определение амлодипина в субстанциях и готовых лекарственных препаратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Сафронова Ирина Анатольевна,⁺ Шафигулин Роман Владимирович,

Васильева Мария Владимировна, Иванова Татьяна Викторовна

и Буланова Анджела Владимировна*

Кафедра общей химии и хроматографии. Самарский государственный университет. Ул. Академика Павлова, 1. г. Самара, 443011. Россия. Тел.: (846) 334-54-47. E-mail: irinasa2007@yandex.ru

Аннотация

Разработана методика качественного и количественного анализа амлодипина с использованием метода обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Определены оптималь-ные хроматографические условия проведения анализа. Методика позволяет осуществлять определение подлинности препарата “Амлодипин”.

Ключевые слова: амлодипин, высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), качественный и количественный анализ.

Введение

Одной их основных практических задач современной фармакологии и фармации явля-ется создание высокоэффективных лекарственных препаратов, поэтому так важна проблема контроля, связанная с точной оценкой качественного и количественного состава препарата.

В настоящее время большинство фармацевтических фирм для контроля качества своей продукции предпочитают использовать высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ), так как она идеально подходит для проверки чистоты и качества лекарственных препаратов, большинство которых являются термически неустойчивыми или обладают низкой летучестью, что затрудняет использование газожидкостной хроматографии [1]. ВЭЖХ включена в отечественную фармакопею [2] и ряд зарубежных фармакопей [3, 4].

Однако в литературе практически нет упоминаний о применении метода ВЭЖХ для анализа лекарственных препаратов, используемых для лечения таких часто встречающихся заболеваний сердечно-сосудистой системы, как артериальная гипертензия и ишемическая болезнь сердца.

К лекарственным препаратам, используемым для лечения таких заболеваний, относится амлодипин [5].

Амлодипин - лекарственный препарат, отно-сящийся к группе веществ, оказывающих антиан-гинальное, антигипертензивное действие. При сте-нокардии уменьшает выраженность ишемии мио-карда, снижает общее периферические сосудистое сопротивление, уменьшает преднагрузку на сердце, снижает потребность миокарда в кислороде[5].

Структурная формула амлодипина (2-[(2-амино-этокси)метил]-4-(2-хлорфенил)-1,4-дигидро-6-метил-3,5-пиридин дикарбоновой кислоты 3-этил 5-метило-вый эфир в виде безилата и малеата) представлена на рис. 1.

Целью настоящей работы являлось разработка ВЭЖХ-методики определения амлоди-пина в субстанциях и готовых лекарственных препаратах.

Экспериментальная часть

Анализы проводили на жидкостном хроматографе Милихром-1, модифицированном системой подачи подвижной фазы с помощью шприцевого насоса. Детектирование осуществляли УФ-спект-рофотометрическим детектором при длине волны 236 нм. Использовали колонку Ultrasep ES 100RP18 (120х4мм), заполненную обращенно-фазовым сорбентом С18 с размером частиц 4 мкм. В качестве элюентов использовали смесь буферного раствора с рН 2.5 и ацетонитрила различного состава. Ско-рость потока элюента составляла 100 мкл/мин.

Объем вводимой пробы - 40 мкл. В работе использовали ацетонитрил для хроматографии ос.ч. фирмы Криохром (Россия). Исследовали амлопидин, содержащийся в лекарственных препаратах, выпускающихся фирмами “Канонфарм” и “Реплекфарм”. Используемые для анализа реактивы имели чистоту не ниже “ч.д.а”. Для приготовления всех рабочих растворов и элюента использовали дистил-лированную и дегазированную воду с удельным сопротивлением 18 мОм/см. В качестве образца сравнения определяемого лекарственного препарата использовали фармацевтическую субстанцию, проверенную отделом контроля предприятия-изготовителя и соответствующую всем требованиям нормативной документации (НД).

В качестве буферных растворов использовали фосфатный буфер (растворы фосфата калия двузамещенного и ортофосфорной кислоты). Для его приготовления 0.136 г фосфата калия двузаме-щенного помещали в колбу 1000 мл, прибавляли 800 мл воды и доводили рН раствора ортофосфорной кислотой до 2±0.1 (потенциометрическим методом). Объем раствора доводили водой до метки и перемешивали.

Для приготовления испытуемых растворов готовых лекарственных препаратов таблетки растирали в порошок. Порошок “Амлодипина” массой 0.4 г растворяли в 60 мл дистиллированной воды и раствор обрабатывали ультразвуком до полного диспергирования порошка. Объем полу-ченного раствора доводили до 100 мл дистиллированной воды, перемешивали и фильтровали через бумажный фильтр. Раствор использовали свежеприготовленным.

Растворы стандартных образцов (РСО) готовили аналогично растворам исследуемых лекарст-венных препаратов.

Обработку результатов хроматографического эксперимента проводили с применением системы сбора и обработки данных “МультиХром” 1.52v (Ampersand Ltd). Расчет количественного содержания определяемых компонентов находили по формуле:

S_и и S_ст - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и РСО соответственно; т_ст, т_с и т_н - соответственно массы стандарта определяемого вещества в растворе РСО, средняя масса в граммах таблетки и масса растертых таблеток, взятых для приготовления испытуемого раствора соответственно.

амплодипин хроматография фазовый жидкостный

Результаты и их обсуждение

В ходе работы исследовано влияние состава подвижной фазы на хроматографические характеристики удерживания исследуемых соединений.

Для этого проводили хроматографирование растворов стандартного образца вещества - амлодипина (табл. 1).

Как видно из таблицы, состав подвижной фазы сильно влияет на времена удерживания анализируемого соединения и в целом на эффективность хроматографирующей системы. С увеличением объемного содержания ацетонитрила в элюенте уменьшается время выхода амлодипина, но разделяющая способность системы улучшается. Использование в качестве элюента смеси вода - ацетонитрил ухудшает разделение вследствие диссоциации молекул амлодипина и на хроматограмме фиксируются 2 пика с практически одинаковой интен-сивностью.

Оптимальные соотношения смеси буферного раствора и аце-тонитрила для исследуемых веществ составили - 68:32 по объему.

Количественный хроматогра-фический анализ РСО амлопидина и препаратов “Амлодипина” про-водили с использованием элюента: фосфатный буфер/ацетонитрил-68 32 (об. %) По формуле определили количественное содержание амлодипина в препарате “Амлодипина”. Методом внутренней нормализации находили общее содержание примеси в таблетках.

Рис. 2. Хроматограмма образца лекарственного препарата “Амлодипин” фирмы “Канонфарм”. Аналитическая длина волны 236 нм. Состав подвижной фазы - фосфатный буфер/ацетонитрил

68/32 об.%. Пики по времени удерживания: 1 - примесь, 2 - амлодипин.

Рис. 3. Хроматограмма образца лекарственного препарата “Амлодипин” фирмы “Реплекфарм”. Аналитическая длина волны 236 нм. Состав подвижной фазы - фосфатный буфер/ацетонитрил

68/32 об.%. Пики по времени удерживания: 1 - примесь, 2 - амлодипин.

Хроматограммы образцов препарата “Амлодипин” производителей “Канонфарм” и “Реп-лекфарм” представлены на рис. 2-3.

В табл. 2 представлены значения величин, характеризующих эффективность хроматогра-фического разделения для образцов лекарственного препарата “Амлодипин”.

Табл. 2. Результаты хроматографического анализа образца лекарственных препаратов

* - среднее из 5 независимых определений.

Результаты количественного анализа лекарственных препаратов представлены в табл. 3.

Табл. 3. Результаты количественного анализа лекарственного препарата

Выводы

Предложена методика качественного и количественного анализа амлопидина с исполь-зованием метода обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Пока-зано, что содержание действующих веществ в исследуемых лекарственных препаратах соот-ветствует требованиям нормативных документов по показателю “Количественное опреде-ление”.

Предложенную методику можно использовать для судебно-химического и химико-ток-сикологического исследования, а также для определения подлинности препарата при фарма-цевтическом контроле.

Благодарности

Работа выполнена в рамках государственного задания по гранту №3.3209.2011.

Литература

[1] Костарной А.В., Голубицкий Г.Б., Басова Е.М., Будко Е.В., Иванов В.М. Журнал аналитической химии. 2008. Т.63. №6. С.566-580.

[2] Государственная Фармакопея Российской Федерации. 12 изд., ч. 1. М.: Изд-во “Научный центр экспертизы средств медицинского применения”. 2008. 704с.

[3] British Pharmacopeia. CD 1998 v. 2.0, System Simulation Ltd. 1998.

[4] The United States Pharmacopeia. 23-rd Ed., Rockville. 1995.

[5] Чазов Е.И., Беленков Ю.Н. Рациональная фармакотерапия сердечно-сосудистых заболеваний: Рук-во для практ. врачей. М.: Литтерра. 2005. 972с.