Материал: Уничтожение микробов в окружающей среде

Качество очистки оценивают путем постановки амидопиридиновой (азопирамовой) пробы на остаточные количества крови и фенолфталеиновой пробы на остатки щелочных компонентов моющих средств. При положительном результате той или иной пробы всю группу изделий подвергают повторной очистке

до получения отрицательного результата.

Стерилизация

Стерилизация (sterilis - бесплодный) – это полное удаление микробов (обеспложивание объектов), при котором уничтожаются и вегетативные, и споровые формы микроорганизмов. Цель стерилизации - полное освобождение объекта от всех микробов без изменения свойств самого объекта.

Перед стерилизацией изделия подвергают дезинфекции и предстерилизационной очистке. Подготовленные к стерилизации предметы упаковывают. Для упаковки стерилизуемых изделий применяют специальные виды бумаги, стерилизационные коробки (биксы), двойную мягкую упаковку из бязи и другие средства. Срок хранения стерильного изделия зависит от вида упаковки: в коробках без фильтра и двойной мягкой упаковке - 3 суток, в пергаменте или коробке с фильтром - 20 суток.

Эффективность стерилизации оценивают по отсутствию или снижению содержания живых микробов в стерилизуемых объектах. Содержание живых клеток определяют посредством высева проб жидких объектов или смывов с твердых объектов до и после стерилизации.

В зависимости от применяемого фактора выделяют следующие методы стерилизации:

1. Физические методы:

   1. Тепловая стерилизация (термическая, горячая);

• стерилизация в пламени (прожигание, прокаливание, фламбирование);

• стерилизация жаром (горячим воздухом, сухожаровая стерилизация, воздушная стерилизация);

• стерилизация перегретым паром под давлением (автоклавирование);

• дробная стерилизация (тиндализация).

1. Излучение или холодная стерилизация (СВЧ, ультрафиолетовое излучение, УВЧ, радиационное излучение, инфракрасное излучение).

2. Фильтрование.

1. Химические методы:

   1. Стерилизация с использованием химических веществ в газообразном состоянии - газовый метод (пары раствора формальдегида в этиловом спирте, смесь ОБ – смесь окиси этилена с бромистым метилом);

   2. Стерилизация с использованием растворов химических веществ – стерилянтов (дезоксона, 6% раствора перекиси водорода, 2,5% раствора глутарового альдегида).

Фламбирование (flamme - пламя) - стерилизация объекта посредством обжигания в пламени горелки (спиртовки). Распределение тепловых полей в пламени представлено на рисунке 12.18.

Рисунок 12.18 – Пламя горелки с различными зонами нагрева (цифры – градусы Цельсия) и фламбирование бактериологической петли.

Как следует из рисунка, стерилизация фламбированием осуществляется при температуре 1500°С. В этих условиях микробы сгорают в течение секунд. Этим способом стерилизуют устойчивые к нагреванию объекты: металлические предметы (бактериологические петли, иглы, пинцеты), стеклянные предметы (стекла предметные).

Вблизи от пламени создается стерильная зона диаметром 10-15 см. В этой зоне осуществляют различные манипуляции с микробами, предотвращая загрязнение внешней среды. Мелкий инструментарий (петли, иглы и др.) стерилизуют непосредственно в пламени горелки; более крупный инструментарий (шпатели, пинцеты) - после смачивания спиртом.

Стерилизация горячим воздухом (сухим жаром, воздушная стерилизация). Материалы, которые не устойчивы к фламбированию, стерилизуют горячим воздухом. Стерилизация осуществляют в специальных сухожаровых шкафах (воздушных стерилизаторах) с электронагревом (рисунок 12.19).

Рисунок 12.19 – Сухошаровой шкаф.

Используются следующие режимы воздушной стерилизации: 200^О – 30 минут, 180^О – 40 минут, 160^О – 120-150 минут. Материал должен занимать не более 2/3 объема шкафа. Сухим жаром стерилизуют изделия из стекла, металлические инструменты. Этот метод позволяет уничтожать не только вегетативные клетки, но и споры микроорганизмов. Для предотвращения обсеменения простерилизованных предметов микробами при хранении перед стерилизацией их помешают в контейнеры (пеналы для пипеток, емкости для чашек Петри и т. д.). Для контроля эффективности стерилизации сухим жаром используют биологические индикаторы -

термотесты (рисунок 12.20).

Рисунок 12.20 – Биологический индикатор для воздушной стерилизации.

Автоклавирование – это способ стерилизации с использованием горячего (перегретого) пара под высоким давлением. При автоклавировании термоустойчивые споры микроорганизмов погибают в течение 15 минут. На практике применяют автоклавы с горизонтальной или вертикальной загрузкой разных объемов. Текучий пар нельзя применять для стерилизации сред, содержащих углеводы, молоко и желатин. Автоклавированием стерилизуют стеклянную посуду, перевязочный материал, белье, вату, марлю, водные растворы различных веществ и питательные среды, устойчивые к воздействию горячего пара. Чаще всего используют следующие режимы автоклавирования: 132^О – 2 атм – 20 минут; 120^О – 1,1 атм – 45 минут. При выборе режима автоклавирования учитывают зависимость температуры от избыточного (выше атмосферного) давления пара (таблица 12.1).

Таблица 12.1 - Зависимость температуры от давления пара

Аппарат, предназначенный для стерилизации паром под давлением, называют автоклавом. Он представляет собой цилиндрический толстостенный горизонтальный или вертикальный сосуд, выдерживающий давление. Схема вертикального автоклава представлена на рисунке 12.21.

Рисунок 12.21 – Схема вертикального автоклава; 1 - воронка, через которую автоклав заправляют водой; 2 - предохранительный клапан; 3 - манометр; 4 - крышка автоклава; 5 - водопаровая камера; 6 - кран для выпуска воздуха; 7- отверстие, через которое пар поступает в стерилизационную камеру; 8 - стерилизационная камера; 9 - подставка для размещения стерилизуемых материалов

Автоклав является работающим под давлением аппаратом повышенной опасности, поэтому к работе на нем допускаются лишь лица, сдавшие экзамен, получившие удостоверение, ежегодно подтверждающие право работы на нем. По конструкции различают шкафные автоклавы и цилиндрические (вертикальные и горизонтальные). Внешний вид цилиндрических автоклавов представлен на рисунке 12.22.

а б

Рисунок 12.22 – Автоклавы цилиндрические: а – вертикальный, б – горизонтальный.

Материал, подвергаемый автоклавированию, помещают в крафт-пакеты, или биксы (рисунок 12.23).

а б

Рисунок 12.23 – Биксы без антибактериального фильтра (а) и с антибактериальным фильтром (б).

Режим автоклавирования контролируется по термометру, таймеру и с помощью химического или биологического индикаторов - термотестов (рисунок 12.24).

Рисунок 12.24 - Индикаторы паровой стерилизации: а – химический, б – биологический.

Сроки хранения стерильного материала после автоклавирования:

• бикс простой – 3 суток;

• бикс с бактериальным фильтром – 20 суток;

• крафт-пакет, заклеенный с двух сторон – 20 суток;

• бязевая упаковка – 3 суток.

Стерилизация паром при атмосферном давлении (стерилизация горячим водяным паром, стерилизация текучим паром). Объекты, повреждаемые паром под давлением, стерилизуют при менее жестком режиме - текучим паром при атмосферном давлении (100°С). Для стерилизации текучим паром при атмосферном давлении используют автоклав с открытым краном выпуска пара. При этом внутренняя полость автоклава соединена с внешней средой (крышка не завинчена). При таком режиме стерилизации погибают вегетативные формы микробов и не погибают споровые формы. При таком методе стерилизации процесс можно проводить в течение нескольких дней подряд по 15-30 минут. При первом сеансе погибают вегетативные формы микробов, а оставшиеся споры прорастают при хранении стерилизуемого объекта в условиях комнатной температуры. Последующие сеансы обеспечивают стерилизацию объекта.

Тиндализация - это способ дробной стерилизации, предложенный английским физиком Д. Тиндалем (рисунок 12.25).

Рисунок 12.25 – Джон Тиндаль (John Tyndall, 1820-1893 гг.).

Тиндализация заключается в ежедневном прогревании стерилизуемого продукта при низких температурах (56-58°С) в течение 1 часа от 3 до 5 раз с промежутками между прогревами в 24 часа. Ввегетативные клетки погибают при первичном прогревании, а оставшиеся в живых споры постепенно прорастают и погибают при последующих циклах прогревания. Основной недостаток тиндализации - невозможность полной элиминации микроорганизмов, так как некоторые споры не успевают прорастать по времени между циклами прогревания, а некоторые вегетативные клетки успевают образовать термостабильные споры. Метод тиндализации применяют для стерилизации сыворотки крови, асцитической жидкости и некоторых питательных сред (растворов сахаров).

Основные режимы тепловой стерилизации приведены в таблице 12.2.

Таблица 12.2 – Режимы тепловой стерилизации