(эритроциты, комплемент, лабораторные животные). К непрямым серологическим
реакциям относятся реакция связывания комплемента, реакция непрямой
гемагглютинации, реакция нейтрализации токсина антитоксической сывороткой, и
др.
Реакцией преципитации называется осаждение из раствора АГ
(преципитиногена) при воздействии на него иммунной сыворотки (преципитина) в
растворе электролита. Осадок представляет собой макромолекулярный иммунный
комплекс (преципитат). Выпадение нерастворимого комплекса антиген-антитело в
виде осадка наблюдается лишь при эквивалентных соотношениях ингредиентов – в
зоне эквивалентности. Зоной эквивалентности называется область, в которой все
антитела количественно связаны с антигеном. В реакции преципитации принимаютучастие только растворимые антигены (экстракты из микроорганизмов, органов и тканей, продукты распада клеток микроорганизмов).Преципитирующие сыворотки изготавливают путем гипериммунизации животных (кроликов).
Реакция кольцепреципитации. В пробирку наливают 1,0 мл неразведенной
преципитирующей сыворотки. Пипеткой медленно наслаивают по стенке пробирки
(пробирку держат в наклонном положении) антиген в таком же объеме. Затем
пробирку осторожно, чтобы не смешать жидкости, ставят вертикально. При
правильном наслоении антигена на сыворотку четко видна граница между двумя
слоями жидкости. Результаты реакции учитывают через 1-2 минуты.
В случае положительной реакции в опытной пробирке на границе между сывороткой и
исследуемым экстрактом появляется преципитат в виде белого кольца.
С помощью РП можно выявить не только видовую, но и групповую
специфичность белка.В судебной медицине РП используется для определения
видовой принадлежности белка (сыворотки крови). Применение РП для санитарно-
гигиенического контроля пищевых продуктов позволяет выявить фальсификацию
мясных, рыбных, мучных изделий, примеси в молоке и т.д.
Реакция встречной иммунодиффузии по Оухтерлони.
Метод иммунодиффузии основан на встречной диффузии антигена и антител в агаровом
геле. Для постановки реакции расплавленный агаровый гель тонким слоем
выливают на стеклянную пластинку, после затвердевания в нем вырезают лунки
диаметром 2-3 мм, которые заполняют антигеном или сывороткой. Антиген и
антитела диффундируют навстречу друг другу и в месте контакта в эквивалентных
соотношениях образуют линии преципитации в виде белой полосы.
Реакция радиальной иммунодиффузии по Манчини. При постановке
реакции радиальной иммунодиффузии по Манчини в расплавленный агар вносят
иммунную сыворотку. После застывания геля в нем делают лунки, в которые
помещают антиген. Антиген, диффундируя в гель, взаимодействует с антителами,
присутствующими в агаре. В результате образуется радиальная зона преципитации,
диаметр которой пропорционален концентрации антигена. Реакцию используют для
количественного определения содержания в крови иммуноглобулинов различных
классов.
Реакция флоккуляции
Реакцией флоккуляции называется появление опалесценции или
хлопьевидной массы при добавлении в пробирку с токсином (анатоксином)
антитоксической сыворотки. Ее применяют для определения активности
антитоксической сыворотки или анатоксина.
Реакции антиген-антитело, происходящие in vivo – это важнейший защитный
механизм устранения чужеродных антигенов из организма путем образования
иммунных комплексов. Серологическими реакциями называются реакции
антиген-антитело, происходящие in vitro (в пробирке). Они используются для
количественного и качественного определения антигенов и антител в исследуемом
материале.
При постановке серологических реакций учитывают следующие условия:
наличие изотонического раствора (электролита), реакция рН (близкая к
нейтральной) и температура среды (от 20 до 37°С).
Серологические реакции применяются с целью решения следующих задач:
- для выявления неизвестного антигена (микроорганизма, белка и т.д.);
при этом используют диагностические иммунные антисыворотки, которые
получают путем многократной иммунизации лабораторных животных
соответствующими антигенами;
- для определения наличия и титра антител в сыворотке крови;
обнаружение антител проводят с использованием специальных антигенных диагностикумов (взвеси эталонных инактивированных микроорганизмов).
Таким образом, в серологических реакциях один из двух основных
компонентов (антигены или антитела) всегда должен быть известным.
В прямых серологических реакциях результат взаимодействия антигенов с
антителами наблюдается непосредственно по изменению оптических свойств
раствора (образование хлопьев, помутнение, опалесценция). К прямым
серологическим реакциям относятся реакции агглютинации, преципитации и
флоккуляции.
В непрямых серологических реакциях для визуализации результата
взаимодействия антигенов и антител используются индикаторные системы
(эритроциты, комплемент, лабораторные животные). К непрямым серологическим
реакциям относятся реакция связывания комплемента, реакция непрямой
гемагглютинации, реакция нейтрализации токсина антитоксической сывороткой, и
др.
В некоторых случаях комплекс антигенов с антителами не виден
невооруженным глазом.
В таких случаях антигены адсорбируют на более крупных
частицах-носителях (эритроцитах, частицах латекса), получая антигенный
эритроцитарный диагностикум.
Последующая агглютинация специфическими антителами таких частиц позволяет видеть агглютинат невооруженным глазом.
Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА) выявляет антитела
сыворотки крови с помощью антигенного эритроцитарного диагностикума, который
представляет собой эритроциты с адсорбированными на них антигенами.
Эритроциты с адсорбированными на них антигенами взаимодействуют с
соответствующими антителами сыворотки крови, что вызывает склеивание и
выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка.
При отрицательной реакции эритроциты оседают в виде пуговки.
РНГА ставят в пластиковых планшетах или в пробирках с разведениями
сыворотки крови, к которым добавляют эритроцитарный диагностикум.
Иногда применяют антительный эритроцитарный диагностикум – эритроциты,
на которых адсорбированы антитела.
Такую реакцию называют РОНГА – реакцией обратной непрямой гемагглютинации.
Реакции антиген-антитело, происходящие in vivo – это важнейший защитный
механизм устранения чужеродных антигенов из организма путем образования
иммунных комплексов. Серологическими реакциями называются реакции
антиген-антитело, происходящие in vitro (в пробирке). Они используются для
количественного и качественного определения антигенов и антител в исследуемом
материале.
При постановке серологических реакций учитывают следующие условия:
наличие изотонического раствора (электролита), реакция рН (близкая к
нейтральной) и температура среды (от 20 до 37°С).
Серологические реакции применяются с целью решения следующих задач:
- для выявления неизвестного антигена (микроорганизма, белка и т.д.);
при этом используют диагностические иммунные антисыворотки, которые
получают путем многократной иммунизации лабораторных животных
соответствующими антигенами;
- для определения наличия и титра антител в сыворотке крови;
обнаружение антител проводят с использованием специальных антигенных диагностикумов (взвеси эталонных инактивированных микроорганизмов).
Таким образом, в серологических реакциях один из двух основных
компонентов (антигены или антитела) всегда должен быть известным.
В прямых серологических реакциях результат взаимодействия антигенов с
антителами наблюдается непосредственно по изменению оптических свойств
раствора (образование хлопьев, помутнение, опалесценция). К прямым
серологическим реакциям относятся реакции агглютинации, преципитации и
флоккуляции.
В непрямых серологических реакциях для визуализации результата
взаимодействия антигенов и антител используются индикаторные системы5
(эритроциты, комплемент, лабораторные животные). К непрямым серологическим
реакциям относятся реакция связывания комплемента, реакция непрямой
гемагглютинации, реакция нейтрализации токсина антитоксической сывороткой, и
др.
Реакция связывания комплемента заключается в том, что при соединении
антигена с антителом образуется иммунный комплекс, к которому через Fc-
фрагмент антител присоединяется комплемент.
Если комплекс антигена с антителом не образуется, то комплемент остается свободным. Свободный комплемент выявляется добавлением к смеси гемолитической системы, состоящей из
эритроцитов барана и антител против них.
Положительная реакция – отсутствие гемолиза в результате связывания комплемента с комплексом антиген+антитело.
Отрицательная реакция – наличие гемолиза в результате связывания комплемента с
комплексом эритроцит+антиэритроцитарное антитело.
Компоненты реакции:
- сыворотка крови здорового донора;
- сыворотка крови больного гонореей (в разведении 1:5);
- лизат гонококков (антигенный компонент реакции - инактивированный
возбудитель гонореи);
- комплемент в разведении, соответствующем рабочей дозе. Комплемент
получают из сыворотки крови морской свинки. Титром комплемента является его
минимальная доза, которая в присутствии гемолитической сыворотки вызывает4
полный гемолиз эритроцитов. Рабочая доза комплемента, используемая при
постановке РСК, на 30% больше его титра;
- гемолитическая система - взвесь эритроцитов барана, обработанных
кроличьими антителами к эритроцитам барана.
- промывочный раствор.
РСК ставят в двух пробирках – опытной и контрольной. В опытную пробирку
внести 0,5 мл сыворотки крови больного гонореей, в контрольную внести 0,5 мл
сыворотки крови здорового донора, в обе пробирки внести по 0,5 мл лизата
гонококков, а также по 0,5 мл комплемента. После каждой операции необходимо
промывать пипетку в промывочном растворе. Пробирки поместить в термостат при
температуре 37°С на 30 минут. После инкубации в обе пробирки внести по 1,0 мл
гемолитической системы. Пробирки встряхнуть и поместить в термостат при
температуре 37°С на 30 минут.
При положительной реакции в опытной пробирке
отмечают задержку гемолиза (жидкость бесцветная и осадок эритроцитов), в
контрольной пробирке – гемолиз эритроцитов.
Реакции антиген-антитело, происходящие in vivo – это важнейший защитный
механизм устранения чужеродных антигенов из организма путем образования
иммунных комплексов. Серологическими реакциями называются реакции
антиген-антитело, происходящие in vitro (в пробирке). Они используются для
количественного и качественного определения антигенов и антител в исследуемом
материале.
При постановке серологических реакций учитывают следующие условия:
наличие изотонического раствора (электролита), реакция рН (близкая к
нейтральной) и температура среды (от 20 до 37°С).
Серологические реакции применяются с целью решения следующих задач:
- для выявления неизвестного антигена (микроорганизма, белка и т.д.);
при этом используют диагностические иммунные антисыворотки, которые
получают путем многократной иммунизации лабораторных животных
соответствующими антигенами;
- для определения наличия и титра антител в сыворотке крови;
обнаружение антител проводят с использованием специальных антигенных диагностикумов (взвеси эталонных инактивированных микроорганизмов).
Таким образом, в серологических реакциях один из двух основных
компонентов (антигены или антитела) всегда должен быть известным.
В прямых серологических реакциях результат взаимодействия антигенов с
антителами наблюдается непосредственно по изменению оптических свойств
раствора (образование хлопьев, помутнение, опалесценция). К прямым
серологическим реакциям относятся реакции агглютинации, преципитации и
флоккуляции.
В непрямых серологических реакциях для визуализации результата