Материал: 7

Занятие №1

Тема. Микробиологическая характеристика дифтерии, туберкулеза, проказы.

Цель занятия. Изучить характеристику возбудителей дифтерии, туберкулеза,

проказы, микробиологическую диагностику вызываемых ими заболеваний. Изучить схему бактериологического метода иссле-

дования при подозрении на дифтерию. Изучить препараты для специфической профилактики дифтерии и туберкулеза и специ-

фического лечения дифтерии.

I.Теоретические знания:

1.Характеристика возбудителя дифтерии, микробиологическая диагностика,

специфическая профилактика и лечение.

2.Характеристика возбудителей туберкулеза, микробиологическая диагности-

ка и специфическая профилактика.

3.Характеристика возбудителя проказы, микробиологическая диагностика проказы.

II.Практические навыки:

1.Изучение схемы бактериологического исследования мазков со слизистой оболочки ротоглотки и носа больного при подозрении на дифтерию. Учет и интерпретация результатов исследования.

2.Световая микроскопия нативного препарата из мокроты больного туберку-

лезом, окрашенного по Цилю-Нильсену.

2

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1.Характеристика возбудителя дифтерии, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика и лечение.

Возбудитель дифтерии – Corynebacterium diphtheriаe.

Морфо-тинкториальные свойства: грамположительные полиморфные палочки, спор, жгутиков не имеют, образуют микрокапсулу. В мазках располагаются в виде «растопыренных пальцев» или латинских букв V, X, Y. Имеют включения, представленные двумя полярно расположенными зернами волютина (полирибитилметафосфаты), которые выявляют окраской по Нейссеру.

Культуральные свойства: требовательны к питательным средам, растут на 5% кровяном и 10% сывороточном агаре. Образуют R-формы колоний: шероховатые, исчерченные, крошковидные, иногда с зонами гемолиза. На кровя-

но-теллуритовом агаре образуют 3 типа колоний: gravis (крупные, сухие,

черные, шероховатые с радиальной исчерченностью и неровными краями), mitis (мелкие, гладкие, блестящие, черные, с ровными краями), intermedius (мелкие, сухие, черные колонии с более прозрачной периферией и неровными краями).

Рост C.diphtheriаe на кровяно-теллуритовом агаре.

3

Биохимические свойства: дифференциация C.diphtheriae от других видов коринебактерий основана на способности ферментировать глюкозу, сахарозу и наличии ферментов уреазы и цистиназы (табл. 1).

Факторы патогенности:

1.Факторы адгезии: микрокапсула и другие липидно-белковые вещества (обеспечивают прикрепление к клеткам эпителия верхних дыхательных путей);

2.Ферменты инвазии: гиалуронидаза, нейраминидаза;

3.Токсинопродукция: гистотоксин, гемолизин, дермонекротоксин (вызывает некроз клеток в месте размножения возбудителя).

Основной фактор патогенности – гистотоксин (экзотоксин). Нетокси-

генные штаммы C.diphtheriae не вызывают развития заболевания.

Гистотоксин состоит из двух белковых фрагментов:

Фрагмент А представляет собой фермент, блокирующий фактор элонгации трансферазу-2, ответственную за удлинение полипептидной цепи на рибосоме, что приводит к подавлению синтеза клеточного белка и гибели клеток.

Фрагмент В взаимодействует с клеточными рецепторами, облегчая проникновение в клетку фрагмента А.

Токсинопродукция возбудителя дифтерии обусловлена одним из видов генетической изменчивости – лизогенной (фаговой) конверсией. Умеренный коринефаг содержит в своем геноме ген tox, кодирующий синтез гистотоксина. При интеграции ДНК умеренного фага с хромосомой дифтерийной палочки она становится токсигенной, то есть продуцирует гистотоксин.

Источники инфекции: больной человек или бактерионоситель.

Пути заражения: воздушно-капельный, реже контактный, алиментарный. Входные ворота инфекции: слизистые оболочки ротоглотки, носа, горта-

ни, глаз, половых органов, поврежденные кожные покровы и др.

Дифтерия, как инфекционный процесс, развивается по интоксикацион-

ному механизму.

Патогенез: в месте внедрения возбудителя происходит его размножение и выделение гистотоксина, который обладает как местным, так и общим действием. На слизистых оболочках формируются пленчатые фибринозные налеты,

4

прочно спаянные с подлежащей тканью. Повышается сосудистая проницаемость и возникает отек ткани ротоглотки и подкожной клетчатки шеи. Экзотоксин поступает в кровь и связывается с мембранами клеток органов-мишеней (миокардиоциты, почечный эпителий, клетки коркового и мозгового вещества надпочечников, периферические нервы). Ингибирование токсином белкового синтеза в клетках миокарда приводит к структурным и функциональным нарушениям тканей, способным вызвать смерть больного. В нервной ткани происходит демиелинизация волокон, приводящая к развитию параличей и парезов. В почечной ткани развивается токсический нефроз.

Клинические формы дифтерии различают по локализации, характеру течения и степени тяжести.

По локализации выделяют следующие клинические формы:

1. Дифтерия ротоглотки (90-95%).

Пленчатые фибринозные налеты при дифтерии ротоглотки.

2.Дифтерия гортани.

3.Дифтерия редких локализаций (носа, глаз, кожи, уха, половых органов и др.).

При поражении нескольких органов выделяют комбинированную форму заболевания.

Микробиологическая диагностика.

Материал на исследование: слизь или отделяемое пораженного органа (ротоглотка, нос и др.) забирают стерильным тампоном не позднее 12 часов с момента обращения больного, до назначения антибиотиков.

1.Бактериологический метод: посев исследуемого материала на 5% кровяной агар, выделение чистой культуры на 10% сывороточном агаре. Идентификацию возбудителя проводят по морфо-тинкториальным, культуральным, биохимическим свойствам и по определению продукции экзотоксина (гистотоксина).

2.ПЦР: определяют ДНК C.diphtheriae и наличие гена tox+.

Для определения гена tox+помимо ПЦР используют ИФА и РНГА.

5