Материал: Tema_2_mikra

3.Низкое содержание воды. Предохранение белков от денатурации при высоких температурах.

4.Поверхностная структура, начиная с внутренней мембраны механически защищает содержание споры от проникновения агрессивных веществ.

5.Высокая устойчивость спор к различным воздействиям связана с наличием плотной многослойной оболочки, низким содержанием воды в ней и отсутствием ферментативной активности. Одним из важнейших факторов, обусловливающих высокую устойчивость спор, является присутствие

кальциевой соли дипиколиновой кислоты; содержание кальция в спорах значительно выше, чем в вегетативных телах.

19. Как могут располагаться споры в клетке бактерии? Назовите виды бактерий с различным расположением спор.

Расположение в клетке -терминальное, т.е. на конце палочки (у возбудителя столбняка), субтерминальное - ближе к концу палочки (у возбудителей ботулиэма, газовой гангрены) и центральное (у сибиреязвенной бациллы)

ё

20.Латинские названия спорообразующих палочковидных форм бактерий.

Палочковидные бактерии (устаревшее — бациллы от лат. Bacilli —

«палочки») — бактерии палочковидной формы. Сейчас название «бациллы» используют для обозначения представителей рода Bacillus. Морфологически выделяют еще так называемые коккобацилы — округлые клетки, длина которых еще заметно превышает ширину (в частности как в Bacteroides fragilis, Yersinia pestis, Bordetella bronchiseptica, Haemophilus influenzae). Палочковидная форма встречается у большинства видов бактерий, как грамотрицательных, так и грамположительных. Палочковое форма является самой многочисленной и разнообразной группой бактерий.

21.Способ окраски спор.

Для окраски спор применяют способ Ожешки, основанный на их кислотоустойчивости.

Окраска по методу Ожешко для выявления спор

1.На высушенный нефиксированный препарат (мазок готовится толстым и на краю стекла) наливают несколько капель 0,5%-ного раствора соляной кислоты и подогревают 1 – 2 мин. над пламенем горелки до закипания, после чего остатки кислоты сливают.

2.Остывший препарат промывают водой, подсушивают на воздухе и фиксируют на пламени горелки.

3.Окрашивают карболовым фуксином Циля (фуксин наливают на фильтровальную бумажку) с подогреванием до появления паров.

4.Обесцвечивают 5%-ным раствором серной кислоты в течение нескольких секунд.

5.Промывают водой.

6.Докрашивают синькой Леффлера или 1%-ным водным раствором малахитовой зелени в течение 3 – 5 мин.

Споры, окрашенные фуксином, имеют рубиново-красный цвет, вегетативные тела микробных клеток при докрашивании синькой Леффлера – синий цвет, при применении малахитовой зелени – зеленый цвет.

22.Жгутики бактерий - биологическая роль.

На поверхности ряда бактери-ых клеток располагаются жгутики. В их состав входит белок флагелин, кот-ый по своей структуре относится к сократительным белкам типа миозина. Жгутики прикрепляются к базальному телу, состоящему из сис-мы нескольких дисков, вмонтированных в цитоплазматическую мем-ну и КС. Кол-во и расположение жгутиков у разных бактерий неодинаково. Монотрихи имеют на одном из полюсов клетки тлько один жгутик, лофотрихи — пучок жгутиков, у амфитрихов жгутики расположены на обоих полюсах клетки, а у перитрихов — по всей ее поверхности.

Активная подвижность бактерий обусловлена вращательными движениями жгутиков, подобно корабельному винту, либо пропеллеру (монотрихи, лофотрихи). Наряду с беспорядочным движением бактерии могут передвигаться направленно путем хемотаксиса, аэротаксиса, обусловленного разной конц-цией кислорода, и фототаксиса. Скорость движения бактерий связана с расположением жгутиков, составом и св-вами пит-ой среды.Жгутики обладают антигенными св-вами.

Грамположительные бактерии имеют 2 диска, грамотриц-е — 4 диска.

Жгутики выявляются: электронная микроскопия, по Лефлеру.

2.Метод Циля—Нильсена в модификации Мюллера. Мюллер, модифицировав известный метод Циля—Нильсена, применяемый обычно для выявления кислотоустойчивости бактерий (дифференциальной окраски микобактерий и некоторых близких к ним микроорганизмов), снизанной с особенностями химического состава их оболочки, предложил использовать его для окраски спор бактерий.

3.Метод Пешкова. На фиксированный в пламени препарат наливают метиленовый синий Леффлера, доводят его до кипения и кипятят 15—20 с, держа стекло над пламенем. Мазок промывают водой и докрашивают в течение 30 с 0,5%-ным водным раствором нейтрального красного. Еще раз промывают, подсушивают и далее исследуют препарат с масляной иммерсией объектива. Споры окрашиваются в голубой или синий цвета, цитоплазма — в розовый.

Для исследования спор удобными объектами могут служить Bacillus mesentericus или

Bacillus mycoides в возрасте 4 сут.

Реактивы для окрашивания спор бактерий.

1.Карболовый фуксин Циля.

2.Метиленовый синий Леффлера.

3.Насыщенный водный раствор метиленового синего 2 г красителя и 100 мл дистиллированной воды.

4.Хромовая кислота, 5%-ный раствор.

5.Соляная (или серная) кислота, 1%-ный раствор.

23. Как разделяются бактерии по количеству и расположению жгутиков? Почему жгутики не видны в обычных препаратах? Как можно увидеть жгутики бактерий? Как можно косвенным образом судить о наличии жгутиков у бактерий, какие препараты для этого готовят? Можно ли без помощи микроскопа определить наличие жгутиков у бактерий?

Классификация бактерий по числу и расположению жгутиков:

1.Атрихи— жгутики отсутствуют.

2.Монотрихи — один жгутик, расположенный на одном из полюсов клетки (род Vibrio) — монополярное монотрихальное расположение жгутиков, самые подвижные бактерии.

3.Политрихи — много жгутиков.

4.Перитрихи – жгутики по всей поверхности.

5.Лофотрихи – пучок жгутиков на одном конце.

Размеры жгутиков (толщина 10-20 нм, длина 3-15 мкм) не позволяют их увидеть в обычном световом микроскопе без особого метода сверхокраски, например, метод серебрения, при котором жгутики искусственно утолщаются и становятся видимыми в иммерсионном микроскопе.

Изучать подвижность бактерии можно как с помощью микроскопических методов (фазово-контрастная микроскопия препаратов «висячая» или «раздавленная» капля), так и посевном уколом в полужидкий агар.

Выявление жгутиков:

1)Косвенное – по факту подвижности бактерий.

2)Прямое – специальные методы окраски, фазово-контрастная микроскопия (у лофотрихов), электронная микроскопия.

Оналичии жгутиков можно косвенно судить по направленному характеру движения в «висячей» и «раздавленной» капле в темнопольном и фазово-контрастном микроскопах, либо при светлопольной микроскопии при опущенном конденсоре и частично прикрытой диафрагме микроскопа.

Окраска жгутиков методом Леффлера

В основе выявления жгутиков лежит осаждение на них красителя, чем достигается увеличение толщины жгутиков и уменьшение их прозрачности.

1. Препарат готовят из 16-18 часовой культуры, которую вносят в 1-2 мл стерильной водопроводной воды до получения тонкой опалесцирующей взвеси.

2.Через 20 мин капля суспензии наносят на поверхность чистого обезжиренного стекла и высушивают на воздухе.

3.Обрабатывают в течение 15 мин протравой следующего состава: 1 мл насыщенного спиртового раствора основного фуксина, 10 мл 25% водного раствора таннина, 5 мл насыщенного водного раствора сернокислого железа.

4.Препарат промывают водой.

5.Окрашивают карболовым фуксином Циля, разведенным водой в соотношении 1:1, в течение 5 мин при легком подогревании.

6.Промывают водой, высушивают.

При микроскопии готового препарата жгутики видны как тонкие нитевидные структуры.

Рассмотреть жгутики можно только в электронном микроскопе. В световом микроскопе без специальной обработки жгутики не видны.

24. Внутриплазматические включения у бактерий - биологическая роль. Приведите пример, у каких патогенных бактерий встречаются, как называются, каким способом окрашиваются?

Внутрицитоплазматические включения подразделяются на активно функционирующие структуры и продукты клеточного метаболизма,не выделяющиеся наружу, а откладывающиеся внутри клетки.

Кпервой группе внутриплазматических включений относятся газовые вакуоли, или аэросомы, обнаруженные у бактерий, обитающих в воде. Аэросомы снижают удельную массу бактериальной клетки и благодаря этому поддерживают ее во взвешенном состоянии в водоеме. Аэросома представляет собой скопление газовых пузырьков (везикул), Которые имеют веретенообразную форму. Их оболочка состоит только из белка, т. е. устроена не так, как обычная мембрана. Белковые молекулы ориентированы таким образом, что внутренняя сторона оказывается гидрофобной, а наружная – гидрофильной.

Кпервой группе включений относятся также хлоросомы зеленых бактерий и фикобилисомы цианобактерий. В этих структурах локализованы пигменты, поглощающие кванты света и передающие энергию возбуждения на фотореакционные центры, т. е. они принимают непосредственное участие в фотосинтезе. Это эллипсовидные образования, окруженные тонкой белковой оболочкой (толщиной 2,5– 3,0 нм), которая состоит из отдельных глобул.

Карбоксисомы, или полиэдрические тела, содержатся в клетках некоторых автотрофных бактерий. Они имеют форму многогранника диаметром 90–100 нм, окруженного однослойной белковой оболочкой. В карбоксисомах содержится рибулозо-1,5-дифосфаткарбоксилаза – ключевой фермент, катализирующий фиксацию СО2 в цикле Кальвина в процессе фото- и хемосинтеза.

Магнитосомы содержатся в водных бактериях, способных ориентироваться в магнитном поле и перемещаться в направлении линий магнитного поля. В их состав входит 0,4 % железа (по сухому веществу). Магнитосомы располагаются в клетках вблизи мест прикрепления жгутиков.