Диализ
Для отделения низкомолекулярных примесей или замены состава среды используют диализ. Метод основан на том, что молекулы белка из-за своих размеров не могут проходить через полупроницаемые мембраны, в то время как низкомолекулярные вещества равномерно распределяются между объемом, ограниченным мембраной, и окружающим раствором. После многократной замены внешнего раствора состав среды в диализном мешочке (концентрация солей, величина pH и др.) будет тот же, что и в окружающем растворе.
Гель-фильтрация
Гель-проникающая хроматография (гель-фильтрация) позволяет разделять белки по величине и форме молекул. Разделение проводят в хроматографических колонках, заполненных сферическими частицами набухшего геля (размером 10-500 мкм) из полимерных материалов . Частицы геля проницаемы благодаря внутренним каналам, которые характеризуются определенным средним диаметром. Смесь белков вносят в колонку с гелем и элюируют буферным раствором. Белковые молекулы, не способные проникать в гранулы геля, будут перемещаться с высокой скоростью. Средние и небольшие белки будут в той или иной степени удерживаться гранулами геля. На выходе колонки элюат собирают в виде отдельных фракций. Объем выхода того или иного белка зависит в основном от его молекулярной массы.
Электрофорез
В настоящее время электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия электрофорез является общепринятым методом определения гомогенности белковых препаратов. Метод основан на свойстве заряженных частиц (молекул) перемещаться под действием электрического поля. Обычно скорость миграции зависит от трех параметров анализируемых белков: величины молекул, формы молекул и суммарного заряда. Поэтому предварительно белки денатурируют с тем, чтобы скорость миграции зависела только от молекулярной массы. Для полной денатурации в среду добавляют тиолы, которые расщепляют дисульфидные мостики.
Электрофорез проводят в тонком слое полиакриламида. После завершения электрофореза, зоны белков выявляют c помощью красителя.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
1. Гуляев В.Н. Ценный источник белка // Пищ. Промышленность. - 2008. - №12. - С. 31-35.
2. Мак-Мюррей У. Обмен веществ у человека / Под ред. Н.Е. Беляевой. - М.: Мир, 2000. - 366 с.
3. Медников Б.М. Биоорганическая химия / Медников Б.М. - М.: Россия, 2005. - 305с.
4. Мусил Я. Основы биохимии патологических процессов / Под ред. П.Н.Кизириди. - M.: Медицина, 2005. - 430 с.
5. Наумов С.П. Белки и их свойства / Наумов С.П. - М.: Академический проект, 2005. - 298с.
6. Нестурх М.Ф. Методы химии белков / Нестурх М.Ф. - М.: Высшая школа, 2008. - 422с.
7. Огнев С.И. Аминокислоты, пептиды и белки / Огнев С.И. - М.: Высшая школа, 2005. - 365с.
8. Парин В.В. Основы биохимии / Парин В.В., Космолинский В.В., Душков В.В. - М.: Просвещение, 2000. - 365с.
9. Резанов А.Г. Химия белка / Резанов А.Г. - М.: Школа 2000, 2002. - 307с.
10. Робертис Э. Строение и свойства белков / Робертис Э., Новинский В., Саза Ф. - М.: Мир, 2003. - 305с.
11. Родман Л.С. Исследование белков / Родман Л.С. - М.: Колос, 2001. - 340с.
12. Служинская З.А. Функции белков в организме / Служинская З.А., Калынюк П.П. - Львов, 2002. - 278с.