Курсовая работа (т): Диагностика и лечение стафилококковых инфекций

Для определения этиологической роли стафилококков в различных патологических процессах при жизни животных исследуют раневой экссудат, гной абсцессов, ран, молоко при маститах, выделения из половых органов при эндометрите, кровь из яремной вены при, септицемии. Из патологического материала готовят мазки, окрашивают фуксином Пфейфера, по Граму и микроскопируют. Одновременно делают посевы на кровяной и молочно-солевой агар в чашки Петри. Из выросших колоний производят отсев на МПА в пробирках для выделения чистой культуры и ее идентификации, ставят реакцию плазмокоагуляции с чистой культурой, для чего кровь кролика смешивают с 5%-ным раствором лимоннокислого натра. Полученную плазму разводят 1:4 физраствором, разливают по 0,5 мл в стерильные пробирки, засевают исследуемой культурой и ставят в термостат (37°С) на 3 ч. Реакцию учитывают через 1-2-3-18 ч. Свойство свертывать цитратную плазму крови кролика является характерной особенностью патогенных стафилококков.

Наличие гемолитического токсина стафилококков определяют по следующей методике: выделенную культуру выращивают на казеиновом бульоне в течение 5 суток в эксикаторе с содержанием в атмосфере выращивания 20 % СО₂. Затем культуру центрифугируют, верхний слой отсасывают, разводят физраствором 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1:320, разливают в пробирки по 1 мл и добавляют по одной капле эритроцитов кролика, трижды отмытых физраствором и разведенных 1: 2. Пробирки выдерживают в термостате при 37°С 1 ч и такое же время при комнатной температуре и учитывают наличие гемолиза.

Потенциальную гемолитическую способность стафилококков выявляют на кровяном агаре подобно КАМП - тесту.

Дермонекротические свойства определяют на кроликах, для чего готовят взвесь стафилококков в физрастворе с содержанием в 1 мл 2 и 4 млрд. микробов и вводят внутрикожно кролику в выбритую кожу в дозе 0,1 мл. Наличие некроза в местах инъекции учитывают на четвертые сутки.

Фаготипирование стафилококков проводят набором 22 типовых стафилококковых бактериофагов, которые по литическому родству составляют четыре группы. Размножают каждый тип фага на соответствующем штамме стафилококка. Для типирования выделенной культуры ее выращивают на глюкозном бульоне, затем высевают на глюкозный агар в чашку Петри, разделенную на четыре квадрата, в каждый из них наносят петлю бактериофага, принадлежащего к одной из указанных выше групп. С помощью фаготипирования можно идентифицировать стафилококки, выделенные из различных источников. Дифференциальные признаки стафилококков приведены в Таблице 1.

Таблица 1. Дифференциация стафилококков

В настоящее время для идентификации стафилококков разработаны диагностические тест-системы, выпускаемые у нас в стране и за рубежом: ПБДС - пластины биохимические, дифференцирующие стафилококки, «STAPHYtest» («Lachema», Чехия), «API STAPH BioMerieux» (Франция), «Automicrobic VITEK» (США) и др.

Система «STAPHYtest» представляет собой полистироловую пластину с 96 лунками. В них внесены высушенные реактивы, позволяющие с помощью восьми тестов идентифицировать все стафилококки и некоторые микрококки. При этом изучают способность утилизировать глюкозу, сахарозу, трегалозу, манит, наличие уреазы, фосфатазы, нитратредуктазы, образования ацетилметилкарбинола. На одной пластине идентифицируют 12 штаммов стафилококков.

В ячейки планшета вносят по 0,1 мл бактериальной суспензии в физиологическом растворе, приготовленной из одной изолированной суточной колонии с d = 2-3 мм с плотной питательной среды (МПА, АГВ, кровяного агара). После инокуляции планшеты накрывают предохранительной плёнкой и инкубируют в течении 18-24 часов при температуре 37 °С.

Видовую принадлежность стафилококков определяют в соответствии с таблицей для идентификации прилагаемой к инструкции.

С помощью международного набора диагностических стафилококковых бактериофагов проведено фаготипирование коагулазоположительных штаммов стафилококков.

Таким образом, полученные результаты позволили установить, что выделенные от больных коагулазоположительные стафилококки относятся ко всем трём видам, имеющим значение в патологии. Наибольшую часть (80,9 %) составляют штаммы S. аureus.

Среди коагулазоотрицательных стафилококков преобладает S. epidermidis, который встречается почти в половине случаев, и примерно с одинаковой частотой - S. hominis, S. caseoliticus и S. auricularis. Они выделяются почти равномерно из разных видов патологического материала. (см таблицу)

Система «STAPHYtest» может быть использована в практической работе лаборатории клинической микробиологии, однако для точной дифференциации некоторых видов коагулазоотрицательных стафилококков необходимо использовать дополнительные тесты.

. Обсеменение окружающей среды

Изучение особенности распространения S. аureus в внешней среде позволило установить, что интенсивность обсеменения зависит, как правило, от концентрации стафилококков в полости носа и происходит, если она составляет 10³ микробных клеток (МК) и выше на тампон. Выделение стафилококка во внешнюю среду зависит от локализации носительства и более интенсивно при носительстве стафилококков в полости носа, чем в горле.

Наибольшее заражение воздуха отмечалось от больных, которые являлись носителями стафилококков одновременно в полости носа и в области промежности.

Интенсивность выделения зависит и от интенсивности дыхания. Если говорить об объектах окружающей среды, подвергшихся обсеменению, то наиболее часто стафилококки обнаруживали на поверхности пола, значительно реже на стенах и мебели и ещё реже в воздухе. В воздухе стафилококки обнаруживали только в тех случаях, когда массивность носительства в полости носа была 10³ МК и выше.

Выводы:

)        Обсеменение окружающей среды Staphylococcus aureus обнаруживается уже после 30 - минутного пребывания «резидентного» (постоянного) носителя в помещении и не связанного с разговором, кашлем, чиханием.

)        Экспираторные акты (разговор, кашель, чихание) усиливают обсеменение окружающей среды.

)        После удаления источника инфекции из помещения зараженность окружающей среды снижается, но сохраняется в течении 14 часов (срок наблюдения). При подметании пола стафилококки появляются в воздухе.

)        Интенсивность обсеменения внешней среды находится в зависимости от концентрации Staphylococcus aureus в полости носа у носителя.

Заключение

Стафилококк был и остаётся коварной инфекцией. Стафилококковые инфекции являются одной из наиболее актуальных проблем современного животноводства. Вопросы профилактики и лечения данного заболевания, несмотря на несомненные успехи, достигнутые в других отраслях ветеринарной науки и практики, остаются открытыми. В связи с его постоянной изменчивостью, следует уделять больше внимания изучению свойств возбудителя. Необходимы новые среды для выделения штаммов, резистентных к антибиотикам. Следует уделять больше внимания: морфологии, биохимическим и культуральным свойствам возбудителя. Необходимо тщательнее изучать изменчивость возбудителя и искать новые методы борьбы с ним. Принципиальное значение имеет профилактика инфекций, вызванных стафилококами. Следует соблюдать общеклинические мероприятия, контроль за средой и персоналом.