Также из винкамина возможен синтез винпоцетина, который является корректором нарушений мозгового кровообращения. Винпоцетин имеет несколько различных механизмов действий: противовоспалительное, антиоксидантное, сосудорасширяющее, противоэпилептическое и нейропротекторное. С другой стороны, несколько метаанализов существующих исследований острого инсульта, изучающих краткосрочные и долгосрочные показатели летальности с винпоцетином, не смогли оценить эффективность. У пациентов с хроническими цереброваскулярными заболеваниями винпоцетин улучшает нарушенные гемореологических показателей, обладает значительными сосудорасширяющими свойствами, улучшает эндотелиальную функцию, исследования нейровизуализации показывают избирательное увеличение мозгового кровотока и церебрального метаболизма, все из которых потенциально полезны при цереброваскулярных заболеваниях и могут улучшить когнитивные функции.
Винпоцетин входит в российский перечень жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов.
Способ введения перорально и внутривенно.
Торговые названия: Винпоцетин, Бравинтон, Винцетин, Винпотон, Винпотропил, Кавинтон, Телектол.
Барвинок малый также широко используется в народной медицине. Для лечения берут траву барвинка, собранную в период цветения - в мае-июне. Употребляют ее как сосудорасширяющее, вяжущее, кровоостанавливающее, ранозаживляющее и противомикробное средство.
На основе барвинка готовят следующие препараты:
1. Настой, помогающий при гипертонической болезни.
2. Настойка цветущих побегов. Такое средство применяют для лечения злокачественных опухолей.
3. Сбор, помогающий при гипертонии, вегетососудистой дистонии. Для него понадобятся листья барвинка малого, корни валерианы, листья кроваво-красного боярышника, кора калины. Все компоненты берут по 2 столовые ложки. Также добавляют 3 столовые ложки травы омелы белой и столовую ложку плодов тмина.
Необходимо помнить, что трава барвинка содержит сильнодействующие вещества, который могут причинить непоправимый вред здоровью при неправильном использовании, поэтому заниматься самолечением категорически не рекомендуется. Использовать препараты барвинка малого разрешается исключительно по назначению врача -- они ядовиты. Даже после контакта с травой при просушке необходимо тщательно помыть руки. Препараты как официнальной, так и народной медицины противопоказаны при беременности и в период лактации.
1.5 Выводы к Главе 1
В ходе исследования литературных источников было выяснено, что в траве барвинка малого содержится значительное количество индольных алкалоидов, в особенности винкамина, который является эффективным гипотензивным и спазмолитическим препаратом, обладает способностью стимулировать ЦНС. Обнаружение фармакологически ценного гипотензивного алкалоида аймалицина в составе барвинка также усиливает коммерческую значимость исследуемого растительного сырья. Самым эффективным способом этих веществ из сырья является экстрагирование 96% этанолом и 5% уксусной кислотой, при этом выход суммы алкалоидов составляет при экстрагировании этанолом -- 0,52-0,58% в пересчете на сухую массу, выход аймалицина в этанольных экстрактах -- 150-170 нг/г, в уксуснокислых -- 150-200 нг/г. Препараты, получаемые из винкамина, достаточно широко используются в отечественной медицинской практике, и дальнейшее изучение и использование барвинка малого как источника этого и многих других алкалоидов является перспективным направлением.
Глава 2. Экспериментальная часть
2.1 Материал и методики исследования
Материалом для исследования послужило цельное растительное сырье барвинка малого трава (Vincae minoris herba) (рис. 12), собранная в 2019 году в фазу цветения (середина мая) в окрестностях города Майкопа. Представляет собой смесь стеблей, листьев и цветков.
Рисунок 12. Высушенная трава барвинка малого
Сразу после сбора сырье было очищено от примесей и поврежденных частей растения и высушено при 40°C в сушилке в течение суток до оптимальной влажности согласно требованиям ВФС 42-1728-87.
С цельным сырьем был проведен макроскопический и микроскопический анализ (по методикам ГФ РФ 14 изд., ОФС 1.5.1.0002.15 и ОФС 1.5.3.0003.15 соответственно), а затем сырье было измельчено и был проведен качественный анализ на наличие алкалоидов [20].
2.2 Результаты фармакогностического анализа барвинка малого травы
2.2.1 Результаты макроскопического анализа
Согласно существующим требованиям, сырье должно быть представлено надземными стеблями с лилово-синими цветками и без цветков, с кожистыми листьями, сверху темно-зелеными блестящими, снизу более светлыми, с несколько завернутыми вниз краями. Стебли светло-зеленые. Запах отсутствует.
Цветки. Одиночные, диаметром 2--3 см, пазушные, на цветоножках длиной 1--3 см. Чашечка сростнолистная, лопасти длиной 3--4 мм, острые, ланцетно-треугольные, голые. Венчик воронковидный, тёмно-синий или светло-фиолетовый, с длинной цилиндрической тонкой трубкой длиной около 12 мм, в середине немного расширенной, и с плоским пятираздельным отгибом диаметром около 25 мм, со сдвинутыми, тупо срезанными лопастями длиной 10--12 мм.
Листья. Супротивные, эллиптические, кожистые, блестящие, голые, длиной 2--5 см и шириной до 2,5 см, острые, сверху тёмно-зелёные, снизу серо-зелёные, на черешках длиной 2--5 мм.
Стебли. Светло-зеленые, цилиндрические, не опушенные, длиной 30-40 см.
По итогам макроскопического анализа можно заключить, что лекарственное растительное сырье барвинка малого трава соответствует требованиям ВФС 42-1728-87 по разделу «Внешние признаки».
2.2.2 Результаты микроскопического анализа
Микроскопический анализ проведен по методике ГФ РФ 14 изд., ОФС 1.5.3.0003.15, раздел «Травы».
В сырье должны обнаруживаться следующие диагностические признаки:
1) клетки верхнего и нижнего эпидермиса с извилистыми стенками (рис. 13, 14);
2) устьица парацитного типа, расположенные только на нижней стороне листа (рис. 13);
3) на черешке заметны простые волоски (рис. 15).
Рисунок 13. Фрагмент нижнего эпидермиса листа, 1 - устьице парацитного типа, 2 - околоустьичная клетка, 3 - клетка эпидермиса, 4 - извилистая стенка клетки эпидермиса.
Рисунок 14. Фрагмент верхнего эпидермиса листа, клетки с извилистыми стенками, устьиц нет.
Рисунок 15. Фрагмент эпидермиса черешка, 1 - простые волоски.
По итогам микроскопического анализа можно заключить, что лекарственное растительное сырье барвинка малого трава соответствует требованиям ВФС 42-1728-87 по разделу «Микроскопия».
2.2.3 Результаты фитохимического анализа
Для проведения общих качественных реакций на наличие алкалоидов из сырья было получено извлечение, в котором алкалоиды находятся в виде солей. Для получения извлечения была использована следующая методика: 1,0 г сырья, измельченного и просеянного сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм, поместили в колбу на 100 мл со шлифом, залили 25 мл 1%-ного раствора кислоты хлористоводородной и нагревали на кипящей водяной бане в течение 30 минут, периодически помешивая. Охлажденное извлечение отфильтровали через бумажный фильтр и фильтрат использовали для проведения качественных реакций. [20]
Реакции проводили, нанеся каплю фильтрата и каплю реактива на предметное стекло, и смешав их стеклянной палочкой.
Были проведены следующие общие осадочные реакции на алкалоиды:
1. С реактивом Майера (смесь растворов ртути дихлорида и калия йодида). Наблюдали образование белого осадка (рис. 16), что является положительной реакцией на наличие алкалоидов (за исключением кофеина).
2. С реактивом Драгендорфа (раствор нитрата висмута основной, калия йодида и кислоты уксусной). Наблюдали образование оранжевого осадка (рис. 17), что является положительной реакцией на наличие алкалоидов.
3. С реактивом Шейблера (1%-ный водный раствор кислоты фосфорно-вольфрамовой). Наблюдали образование белого осадка (рис. 18), что является положительной реакцией на наличие алкалоидов.
4. С реактивом Зонненштейна (1%-ный водный раствор кислоты фосфорно-молибденовой). Наблюдали образование желтоватого осадка (рис. 19), что является положительной реакцией на наличие алкалоидов.
5. С 1%-ным водным раствором кислоты пикриновой. Наблюдали образование ярко-желтого осадка (рис. 20), что является положительной реакцией на наличие алкалоидов (кроме кофеина, морфина, теобромина). [20]
Рис. 16-20. Извлечение с соответствующим реактивом (слева) и контрольный опыт (справа).
По результатам проведенных общих качественных реакций можно сделать вывод, что в сырье содержатся алкалоиды.
2.2.4 Выводы к Главе 2
В ходе проведения экспериментальной работы мы удостоверились в подлинности сырья и установили наличие в нем алкалоидов с помощью общих осадочных реакций. Во всех проведенных реакциях наблюдался явный аналитический эффект, поэтому можно заключить, что содержание алкалоидов в сырье достаточно велико для обнаружения даже не самыми чувствительными методами.
Заключение
В обществе существует постоянно возрастающая потребность в новых препаратах для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, в особенности артериальной гипертонии. Алкалоиды, винкамин и аймалицин, содержащиеся в лекарственном растительном сырье барвинка малого трава, обладают ценными фармакологическими свойствами сами по себе, а также из них получают вещества, широко применяющиеся в российской медицинской практике. Помимо антигипертензивного действия, они обладают широким спектром дополнительных воздействий на организм, которые комплексно улучшают состояние пациентов. Их наличие в сырье может быть подтверждено и подсчитано с помощью ВЭЖХ-МС, существуют эффективные методики извлечения этих алкалоидов в лабораторных условиях.
Дальнейшее изучение сырья барвинка малого и разработка методик для получения из него действующих веществ в промышленных масштабах имеет потенциал не только с медицинской, но и с коммерческой точки зрения.
Список литературы
1. Чазова И.Е., Жернакова Ю.В. Клинические рекомендации. Диагностика и лечение артериальной гипертонии. Системные гипертензии. 2019.
2. Гусев Н.Ф., Петрова Г.В., Филиппова А.В., Немерешина О.Н. Перспективы использования лекарственных растений в современной России // Известия ОГАУ. №2. 2014.
3. Самбукова Т.В., Овчинников Б.В., Ганапольский В.П., Ятманов А.Н. Перспективы использования фитопрепаратов в современной фармакологии // Обзоры по клинич. фармакол. и лек. терапии. 2017. №2.
4. Manfred Hesse. Alkaloids. Nature's Curse or Blessing. -- Wiley-VCH, 2007.
5. Tadhg P. Begley. Encyclopedia of Chemical Biology: Natural Products in Plants, Chemical Diversity of. 2012.
6. Khanavi, M.; Pourmoslemi, S.; Farahanikia, B.; Hadjiakhoondi, A.; Ostad, S. N. (2010). "Cytotoxicity of Vinca minor". Pharmaceutical Biology. 2008.
7. Neuwinger, Hans Dieter. African Ethnobotany: Poisons and Drugs: Chemistry, Pharmacology, Toxicology. 2004.
8. Vereczkey, L; Tamбs, J; Czira, G; Szporny, L. "Metabolism of vincamine in the rat in vivo and in vitro". Arzneimittelforschung. 2006.
9. Химический анализ лекарственных растений: Учеб, пособие для фармацевтических вузов /Ладыгина Е. Я., Сафронич Л. Н., Отряшенкова В, Э. М.: Высш. школа, 2009.
10. Молчан О.В., Фатыхова С.А., Шабуня П.С., Юрин В.М. Определение содержания винкамина и аймалицина в интродуцированном Барвинке малом методом ВЭЖХ-МС // Химия растительного сырья. №3. 2015.
11. Род Vinca L. (Apocynaceae) во флоре Беларуси. / Джус М.А. // Украинский ботанический журнал. Т. 66, No 6. 2009.
11. Идентификация фармакологически активных веществ в экстрактах листьев барвинка малого (Vinca minor L.) / Молчан О.В. // Труды БГУ. Т. 3, ч. 1. 2008.
12. Содержание винкамина и идентификация серпентин- и аймалицин-подобных соединений в интродуцированном в Беларуси Барвинке малом / С.Н. Ромашко // Труды БГУ. Т. 6. 2011.
13. W.A. Remers. Properties and Reactions of Indoles// The Chemistry of Heterocyclic Compounds: A Series of Monographs, vol. 25. 1972.
14. Кедик С.А., Марахова А.И. Алкалоиды: синтез, методы выделения и анализа. Учебное пособие // Институт фармацевтических технологий (ИФТ). 2010.
15. Verma P., Khan S. A., Mathur A.K., Shanker K., Kalra A. Fungal endophytes enhanced the growth and production kinetics of Vinca minor hairy roots and cell suspensions grown in bioreactor // Plant Cell Tiss. Organ Cult. Vol. 118. Pp. 257-268. 2014.
16. Hirata K., Mukai M., Goda S., Ishio-Kinugasa M., Yoshida K., Sakai A., Miyamoto K. Cryopreservation of hairy root cultures of Vinca minor (L.) by encapsulation-dehydration // Biotechnology Letters. Vol. 24. Pp. 371-376. 2002.
17. Boyadzhiev L. et al. Extraction of vincamine from Periwinkle (Vinca minor L.): obtaining of total extract // Comptes rendus de L'Academie bulgare des Sciences. Vol. 55 (12). Pp. 49-52. 2002.
18. Лешина Л.Г., Булко О.В. Agrobacterium rhisogenes-опосредованная трансформация и регенерация двух видов растений из семейства Apocynaceae // Физиология и биохимия культурных растений. Т. 43, №6. 2011.
19. Loyola-Vargas V.M. et al. Catharanthus biosynthetic enzymes: the road ahead // Phytochemistry Reviews. Vol. 6. Pp. 307-339. 2007.
20. Коренская И.М., Ивановская Н.П. Лекарственные растения и лекарственное растительное сырье, содержащие алкалоиды: учебно-методическое пособие по специальности Фармация (часть I). // Воронежский государственный университет. 2006.