Дипломная (вкр): Комплексная оценка ресурсов лекарственного растительного сырья тысячелистника обыкновенного, зверобоя продырявленного и черники обыкновенной Новосибирской области

Специфические реакции проводят с индивидуальными алкалоидами или с очищенной суммой алкалоидов.

Алкалоиды извлекают 1-5% раствором соляной кислоты. Кислотное извлечение подщелачивают раствором аммиака, затем алкалоиды извлекают органическим растворителем (хлороформ, дихлорэтан). В качестве специфических реактивов на алкалоиды используют концентрированную серную и азотную кислоты, реактив Марки, Фреде и др.

2.3 Методы количественного содержания БАВ

Определение суммы фенольных соединений методом дифференциальной и прямой спектрофотометрии.

Аналитическую пробу сырья измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещали в колбу вместимостью 150 мл, прибавляли 20 мл воды очищенной. Колбу присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 15 мин, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Охлаждали при комнатной температуре 45 минут. Фильтровали через вату в мерную колбу вместимостью 100 мл так, чтобы частицы сырья не попадали на фильтр (раствор А).

В мерную колбу вместимостью 25 мл помещали 1 мл раствора алюминия хлорида в 95% спирте и доводили объем раствора 95% спиртом до метки. Через 40 мин измеряли оптическую плотность на СФ-56 раствора на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения использовали раствор, состоящий из 1 мл извлечения, 1 капли разведенной уксусной кислоты и доведенный 95% спиртом до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье в % вычисляют по формуле:

X = ,

где

D-оптическая плотность;

V0 - объем полученного извлечения;

K - коэффициент пересчета, рассчитанный по калибровочному графику, построенному по стандартному веществу, равен 248,8;

Vал - объем аликвоты, взятой для анализа;

mc - масса навески сырья;

W - влажность, в %.

В полученном водном извлечении (раствор А) определяли содержание фенольных соединений также методом прямой спектрофотометрии. Определение проводили в трех повторностях.

Количественное содержание флавоноидов определяли спектрофотометрическим методом. Оптическую плотность суммарных извлечений из сырья замеряли на приборе СФ-56 при длине волны 361 нм (в пересчете на рутин).

Количественное содержание оксикоричных кислот определяли спектрофотометрическим методом. Оптическую плотность суммарных извлечений из сырья замеряли на приборе СФ-56 при длине волны 326 нм (в пересчете на хлорогеновую кислоту).

Также из сырья зверобоя получали извлечения спиртом этиловым 50 % и определяли содержание суммы флавоноидов по методике ГФ XI.

Определение количественного содержания дубильных веществ (черника обыкновенная).

Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья, просеянного сквозь сито с диаметром отверстий 3 мм, помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл, заливали 50 мл нагретой до кипения воды и кипятили с обратным холодильником на электрической плитке с закрытой спиралью в течение 30 мин при периодическом перемешивании. Жидкость охлаждали до комнатной температуры и процеживают в коническую колбу вместимостью через вату так, чтобы частицы сырья не попали в колбу. Замеряли объем полученного извлечения. Затем отбирали пипеткой 5 мл полученного извлечения в другую коническую колбу, добавляла 100 мл воды, 5 мл раствора индигосульфокислоты и титровала при постоянном перемешивании раствором перманганата калия (0,02 моль/л) до золотисто-желтого окрашивания.

Содержание дубильных веществ (Х) в процентах в пересчете на абсолютное сухое сырье вычисляла по формуле:

Х = ,

где

V - объем раствора перманганата калия (0,02 моль/л) израсходованного на титрование извлечения, в миллилитрах;

V1 - объем раствора перманганата калия (0,02 моль/л), израсходованного на титрование в контрольном опыте, в миллилитрах;

,004157 - количество дубильных веществ, соответствующее 1 мл раствора перманганата калия (0,02 моль/л) (в пересчете на танин), в граммах;

m - масса сырья в граммах;

W - потеря в массе при высушивании сырья в процентах;

- общий объем извлечения в миллилитрах;

- объем извлечения, взятого для титрования, в миллилитрах;

Определение количественного содержания эфирного масла.

Определение содержания эфирного масла проводят путем его перегонки с водяным паром из растительного сырья с последующим измерением объема. Содержание масла выражают в объемно-весовых процентах в пересчете на абсолютно сухое сырье.

Определение содержание эфирного масла проводили методом гидродистиляции.

Для определения эфирного масла использовали прибор Гизберга. Навеску помещали в круглодонную колбу, добавляли воду. Колбу с содержимым нагревали на асбестовой сетке 50 минут до закипания. Далее еще 2 часа кипятили. После окончания перегонки и охлаждения замеряли объем масла. Масло получили чернильного цвета.

Содержание эфирного масла в объемно-весовых процентах в перечете на абсолютно сухое сырье вычисляли по формуле:

X = ,

где

V - объем эфирного в миллилитрах,

m - масса сырья в граммах,

W - потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

Определение содержания хамазулена в эфирном масле.

После получения эфирного масла замеряли объем. Он составил 0,15 мл. Делали разведение до 10 мл спиртом этиловым 96%. Брали от разведения 1 мл и доводили до отметки 4 мл спиртом этиловым 96%. Измеряли при длине волны 603 нм. Оптическая плотность составила 0,958.

Рассчитывали по формуле:

C % = ,

где

D - оптическая плотность, равная 0,958;

V1 - объем разведения, мл;

V2 - объем эфирного масла , мл;

К - коэффициент равный 18,69;

2.4 Товароведческий анализ

Определение числовых показателей проводили по методикам ГФ.

Точную навеску сырья (1,0), измельченного до частиц размером 3 мм, помещали в предварительно высушенный и взвешенный бюкс и ставили в нагретый до 105°С сушильный шкаф. Первое взвешивание проводили через 2 часа после достижения температурой отметки 105°С, высушивание проводили до постоянной массы. Постоянная масса считается достигнутой, если разница между двумя последующими взвешиваниями после 30 минут высушивания и 30 мин охлаждения в эксикаторе не превышает 0,01 г. Влажность сырья в процентах вычисляли по формуле:

 X = ,

где

m - масса сырья до высушивания в граммах;

m1 - масса сырья после высушивания в граммах.

За окончательный результат определения принимали среднее арифметическое трех параллельных определений.

Точную навеску (1,0) измельченного растительного сырья помещали в предварительно прокаленный и доведенный до постоянной массы фарфоровый тигель. Тигель нагревали для сгорания сырья при 100°С, затем температуру увеличивали до 500°С. По окончании прокаливания тигель охлаждали в эксикаторе и взвешивали, прокаливание вели до постоянной массы.

Зольность (в %) вычисляли по формуле:

X = ,

где

m1 - масса сухого остатка в граммах; m - масса сырья в граммах; W - потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

3.1 Ресурсоведческие исследования

Зверобой продырявленный.

1)      Среднее значение урожайности (Y) = 288,3 ± 27,5 г/м2

Процент ошибки составил 9,5%

Согласно «Методике по определению запасов лекарственных растений», утвержденной от 05.031986 г. процент ошибки не должен превышать 15%, значит урожайность определена достаточно точно.

2)      Величину эксплуатационного запаса определяют умножением площади заросли на нижний предел величины урожайности (М-2m).

Эксплуатационный запас = 1539,78 (кг)

Выход воздушно-сухого сырья составляет - 30% (согласно таблице, приведенной в методическом пособии к производственной практике для студентов фармацевтического факультета: Ресурсоведение лекарственных растений).

Таким образом, эксплуатационный запас заросли равен 461,934 кг воздушно-сухого сырья.

)        Биологический запас определяют умножением площади заросли на верхний предел урожайности (М+2m)

B (биологический запас) = 2265,78 (кг).

4)      Объем ежегодных заготовок (V) рассчитывается путем деления эксплуатационного запаса на сумму периода восстановления заросли +1.

V = 115,5 (кг)

Это значит, что в пределах этого массива ежегодная возможная заготовка зверобоя продырявленного травы (V) не должна превышать 115,5 кг.

Был проанализирован спрос на зверобой продырявленный у заводов, которые занимаются дальнейшей обработкой и созданием лекарственных сборов и препаратов, на основе зверобоя продырявленного. Спрос на сырье зверобоя продырявленного есть, но закупка крупными фармацевтическими заводами происходит более крупными партиями по 500 кг и более. В связи с тем, что возможная ежегодная заготовка не превышает 115,5 кг, то такое количество будет востребовано фармацевтическими предприятиями с меньшим объемом производства.

На рынке о продаже сырья зверобоя продырявленного достаточное количество предложений. Можно сделать вывод, что предложений больше, чем спрос. Возможно, это связано с тем, что крупные поставщики закупают сырье от более мелких посредников.

Например:

Барнаул, Алтайский край, Россия продает зверобой продырявленный дробленый в сухом виде по 120 руб/кг

- ООО «Рослекраспром» г.Краснодар реализует сырье зверобоя продырявленного 3-х сортов качества по цене 90,100,110 руб /кг.

Фармацевтический завод «Гален» г. Барнаул, ул. Зеленая роща,15. Покупает сырье зверобой продырявленный не менее 500 кг по цене 60 рублей/кг.

Тысячелистник обыкновенный.

1)      Среднее значение урожайности (Y) = 80,7 ± 8,6 г/м2.

Процент ошибки составил 10,7 %

Согласно «Методике по определению запасов лекарственных растений», утвержденной от 05.031986 г. процент ошибки не должен превышать 15%, значит урожайность определена достаточно точно.

)        Величина эксплуатационного запаса = 419,1 (кг)

Выход воздушно-сухого сырья составляет - 22% (согласно данным, приведенным в таблице методического пособия к производственной практике для студентов фармацевтического факультета: «Ресурсоведение лекарственных растений»).

Таким образом, эксплуатационный запас заросли равен 92,2 кг воздушно-сухого сырья.

)        Биологический запас (B) = 646,14 (кг).

4)      Объем ежегодных заготовок (V) = 23,05 (кг).

Это значит, что в пределах этого массива ежегодная возможная заготовка тысячелистника обыкновенного травы (V) не должна превышать 23,05 кг.

Спрос на сырье тысячелистника обыкновенного меньше, чем предложение. Многие крупные производители, которые работают с лекарственным растительным сырьем, имеют замкнутый производственный цикл. Например, производитель популярной продукции «Биолит» выращивает сырье тысячелистника обыкновенного самостоятельно, затем обрабатывает и получает биологически активную добавку «Аххилан».

Предложения по закупке сырья тысячелистника имеются. Производители закупают сырье тысячелистника в больших количествах, чем возможная ежегодная заготовка в пределах с. Плотниково.

Например, закупает сырье:

Фармацевтический завод «Гален» г. Барнаул, ул. Зеленая роща,15. Покупает сырье тысячелистника обыкновенного трава не менее 1000 кг по цене 55 рублей/кг.

Черники побеги.

1)      Среднее значение урожайности (Y) = 107,7 ±5,4 г/м2.

Процент ошибки составил 5,01 %.

Согласно «Методике по определению запасов лекарственных растений», утвержденной от 05.031986 г. процент ошибки не должен превышать 15%, значит, урожайность определена достаточно точно.

2)      Величина эксплуатационного запаса = 1712319,9 кг.

Выход воздушно-сухого сырья составляет - 41% (на основе полученных мною данных).

Таким образом, эксплуатационный запас заросли равен 702 051,2 кг воздушно-сухого сырья.

3)      B (биологический запас) = 2 094 013,5 кг.

4)      Объем ежегодных заготовок (V) = 78 005,7 (кг).

Это значит, что в пределах этого массива ежегодная возможная заготовка черники обыкновенной побегов (V) не должна превышать 78 005,7 кг.

Спрос на сырье черники на рынке присутствует. Так как возможная ежегодная заготовка сырья черники побеги составляет 78 005,7 кг - можно заготавливать для крупного фармацевтического завода, который занимается переработкой.

Например:

Фармацевтический завод «Гален» г. Барнаул, ул. Зеленая роща,15. Покупает сырье черники обыкновенной побеги не менее 200 кг по цене 95 рублей/кг.

Выводы по результатам ресурсоведческих исследований.

·        В результате ресурсоведческих исследований было установлено, что биологический запас зверобоя продырявленного травы в пределах с. Плотниково составляет 2265,78 кг; биологический запас тысячелистника обыкновенного травы составляет 646,14 кг.

·        В результате ресурсоведческих исследований было установлено, что биологический запас черники обыкновенной побегов в пределах Кудряшовского бора составляет 2 094 013,5 кг.

·        Было установлено, что в пределах массива с. Плотниково ежегодная возможная заготовка зверобоя продырявленного травы не должна превышать 115,5 кг; ежегодная возможная заготовка тысячелистника обыкновенного травы не должна превышать 23,05 кг.

·        В результате ресурсоведческих исследований было установлено, что в пределах массива Кудряшовский бор ежегодная возможная заготовка черники обыкновенной побегов не должна превышать 78 005,7кг.

3.2 Фармакогностический анализ сырья «Зверобоя продырявленного трава»

Морфологический анализ сырья.

Сырье представляет собой верхние части стеблей с листьями, цветками, бутонами и недозрелыми плодами. Стебли полые, цилиндрические, длиной до 30 см, с двумя продольными ребрами. Листья супротивные, сидячие, продолговатые или продолговато-овальные, цельнокрайние, голые, до 3,5 см, шириной до 1,4 см. Листья с многочисленными просвечивающимися вместилищами в виде светлых точек. Цветки многочисленные около 1 - 1,5 см в диаметре, собраны в щитковидную метелку. Чашечка сростнолистная, глубоко пятираздельная, чашелистики ланцетовидные, тонко заостренные. Венчик раздельнолепестной, в 2 - 3 раза длиннее чашечки, лепестков пять. Тычинки многочисленные сросшиеся у основания нитями в три пучка. Плод - трехгнездная многосемянная коробочка. Цвет стеблей - от зеленовато-желтого до серовато-зеленого; листьев - от серовато-зеленого до темно-зеленого; лепестков - желтый с черными точками; плодов - зеленовато-коричневый. Запах слабый, своеобразный. Вкус горьковатый, слегка вяжущий.

Микроскопический анализ ЛРС.

В результате микроскопического исследования были обнаружены:

·        Устьичный аппарат с 3-4 околоустьичными клетками (аномоцитный тип), расположенными только на нижней стороны листа.

·        эфирно-масличные вместилища двух типов:

- бесцветные округлые, просвечивающиеся, встречающиеся по всей пластинке листа, продольно вытянутые вдоль жилок.

- пигментированные овальной формы, содержащие красновато-фиолетовый пигмент и расположенные в основном по краю листа.

·        клетки эпидермы с извилистыми стенками, с четковидными утолщениями.

Полученные данные соответствуют требованиям ФС на траву зверобоя.

3.3 Исследование качественного состава и количественного содержания БАВ

Исследование качественного состава комплекса БАВ

Общий фитохимический анализ

По результатам проведенного общего фитохимического анализа в сырье зверобоя продырявленного Hypericum perforatum были обнаружены следующие БАВ: флавоноиды (ведущая группа БАВ), антраценпроизводные, дубильные вещества конденсированной природы, оксикоричные кислоты.