Окончание приложения 2
Материал |
Техника забора |
Примечание |
Плевральная, перитонеальная, синовиальная, перикардиальная жидкости |
После тщательной обработки кожи в месте предполагаемой пункции (см. кровь) с помощью стерильной иглы и шприца получают пробы жидкости в количестве 5 мл. При немедленной транспортировке в лабораторию пробы жидкости доставляют непосредственно в шприце, предварительно удалив иглу и надев на наконечник шприца стерильный колпачок из резины или иного материала. При невозможности немедленной транспортировки используют специальные герметичные транспортные контейнеры |
Избегать охлаждения проб до использования |
Поверхностные раны |
Первоначально следует удалить отделяемое раны в поверхностных слоях. Затем забирают материал из глубоких участков, а также из краев раны с помощью стерильного тампона, который помещают в транспортную среду, а при отсутствии последней — в стерильный контейнер, который маркируется. Гной следует аспирировать в шприц |
Не доставлять тампоны с исследуемым материалом в лабораторию в открытом виде, без контейнера. При подозрении на анаэробную инфекцию следует также произвести биопсию тканей; материал для анализа следует транспортировать в герметичных контейнерах |
Закрытые абсцессы |
После дезинфекции кожи (см. кровь) жидкость или гной аспирируют путем пункции полости абсцесса стерильной иглой. При немедленной транспортировке в лабораторию аспират может быть оставлен в шприце после тщательного удаления из него воздуха; иглу при этом следует снять, наконечник шприца закрыть стерильным колпачком. При отсроченной транспортировке материал для анализа помещают в герметичный контейнер |
При отсроченной транспортировке следует избегать охлаждения полученного материала |
Рвотные массы и промывные воды желудка (50—100 мл) отбирают в стерильные баночки, добавляя в них стерильный 10% раствор соды до нейтральной реакции пробы (контроль pH осуществляют полосками индикаторной бумаги).
Желчь (дуоденальное содержимое) берут с помощью стерильного дуоденального зонда, который вводят натощак в двенадцатиперстную кишку. При правильном введении выделяется желчь золотисто-желтого цвета (порция А). Затем в зонд вводят 30 мл 30% стерильного раствора магния сульфата, подогретого до температуры 37Q С, и через 15-20 мин извлекают пузырную желчь темного цвета (порция В). В последующем желчь будет выделяться из желчных протоков (порция С). Каждую порцию желчи собирают в отдельную пробирку. Нативный материал без промедления отправляют в лабораторию.
Кровь дня выделения сальмонелл берут шприцем из локтевой вены в первую неделю заболевания в количестве 10 мл (в более поздние сроки — 15-20 мл) и засевают у постели больного в соотношении Г. 10 в среду Раппопорта или желчный бульон. При отсутствии возможности посева кровь отбирают в стерильную пробирку, закрывают пробкой и направляют в лабораторию. Для серологических исследований кровь берут из локтевой вены дважды по 5—10 мл в первые дни болезни и через 7—10 сут.
В случае смерти больного с диарейным кишечным заболеванием органы трупа должны подвергаться бактериологическому исследованию в ближайшее время. Исследованию подлежат:
« содержимое тонкой и толстой кишки;
отрезки тонкой и толстой кишки, желчный пузырь с желчью;
кусочки печени и селезенки;
кровь;
мезентериальные лимфатические узлы, костный мозг.
Взятые пробы различных органов трупа укладывают отдельно в стерильные банки.
Пробы для бактериологического исследования отбирают в стерильную посуду без следов дезинфицирующих растворов. Стерилизацию посуды проводят автоклавированием, сухим жаром или кипячением в 1% растворе соды. Допускается дезинфекция суден и тарелок осветленным раствором хлорной извести (нельзя использовать лизол и карболовую кислоту) с последующим промыванием горячей водой до полного удаления дезинфектанта. Банки, пробирки с материалом должны закрываться непромокаемыми пробками и пергаментной бу
магой, укладываться в специально подготовленную для транспортирования металлическую тару. Все материалы должны направляться в лабораторию с сопровождающим не позднее чем через 2 ч после их отбора (при использовании транспортных сред и сред обогащения — в течение 1—7 суток в зависимости от среды).
Правила забора материала для бактериологического исследования
Материалы для бактериологического исследования забирает от больных медицинский персонал лечебного учреждения.
При исследовании на бактерионосительство сбор материала проводит специально проинструктированный медицинский работник под руководством врача. Ответственность за организацию отбора проб и их доставку в лабораторию возлагается на начальника лечебного учреждения.
Основным материалом для исследования являются испражнения. При заболеваниях, протекающих по типу острого гастроэнтерита, дополнительно исследуют рвотные массы и промывные воды желудка. Кровь используют для выделения сальмонелл и серологических исследований. Желчь (дуоденальное содержимое) исследуют улиц, переболевших сальмонеллезом или холерой, при диспансерном наблюдении.
Испражнения отбирают после дефекации больного из судна, горшка, эмалированных или картонных тарелок (стерильных, без следов дезинфектанта) стерильным шпателем, ложкой или петлей из алюминиевой проволоки. Отбирают 2—3 г испражнений, обязательно включая патологические примеси (слизь, кровь, гной). Собранные порции испражнений помещают в стерильные баночки (пробирки) и сохраняют на холоде, если срок доставки в лабораторию не превышает 2 ч. В противном случае используют транспортные среды — консерванты (глицериновая смесь, тиогликолевая среда) или среды обогащения (на сальмонеллы — селенитовый бульон, среда Мюллера, магниевая). Объем испражнений при этом должен составлять 1/3 объема консерванта (среды обогащения). У больных с тяжелой формой гастроэнтерита (подозрение на холеру) испражнения обязательно направляют в лабораторию в нативном виде и в 1% щелочной пептонной воде.
Испражнения можно забирать путем введения в прямую кишку на 6-~ 10 см стерильной петли из алюминиевой проволоки или стерильного ватного тампона. Конец тампона (петли) непосредственно перед употреблением смачивают стерильным 0,9% раствором натрия хлорида или консерванта. Сразу же проводят посев на питательные среды или помещают тампон в пробирку (флакон) с консервантом или средой обогащения (на сальмонеллы — в селенитовую среду).
Для целенаправленного исследования на возбудителей кампило- бактериоза испражнения берут из судна стерильной деревянной палочкой немедленно после дефекации или из прямой кишки тампоном.
При условии незамедлительной доставки материала в лабораторию образцы фекалий, отобранные шпателем в количестве 0,8—1,0 г в стерильные стеклянные флаконы, транспортируются в нативном состоянии; допускается хранение нативных фекалий при 4° С не более 1 ч. При необходимости транспортировки материала в течение времени, превышающего 1 ч с момента его забора, следует применять пробирочные транспортные среды: 0,9% раствор натрия хлорида (срок хранения фекалий при комнатной температуре 3—5 ч), 0,1% пептонную воду (3—48 ч), тиогликолевую среду для контроля стерильности КС (до 3 сут). В любую из этих транспортных сред, разлитую в пробирки по 3—5 мл, исследуемый материал помещают в соотношении 1:3-1:5 (об:об). Охлаждение до 4* С позволяет значительно удлиннить сроки транспортировки образцов на транспортных средах: на 0,9% растворе натрия хлорида — до 24 ч, на 0,1% пептонной воде — до 72 ч, на среде КС — до 5—7 сут.
Ректальные мазки транспортируются только на транспортных средах: наилучшей является агаризованная среда КС, на которой кампилобактер сохраняет жизнеспособность от одних суток (без охлаждения) и до 3 сут (с охлаждением).
Вирусологические исследования при диарейных заболеваниях
Материалом для выделения возбудителей вирусных диарей служат фекалии больных, взятые в первые дни заболевания. Для сбора фекалий используют стерильные флаконы с резиновой или пластмассовой пробкой. Для этой цели удобны флаконы из-под пенициллина. Фека
лии собирают стерильной лопаточкой, заполняя 1/3—1/4 пенициллинового флакона, резиновую пробку закрепляют лейкопластырем. Пробы транспортируют в контейнерах, заполненных сухим льдом или другим хладагентом, при температуре не выше 0е С. Время доставки не должно превышать 4—6 ч. При отсутствии хладагента материал можно транспортировать в 50% забуференном растворе глицерина (50% стерильного химически чистого глицерина, 50% стерильного изотонического раствора натрия хлорида, pH 7,4) в течение 1-2 сут.
В связи с тем, что ротавирусы, вирусы группы Norwalk, коронавирусы, калицивирусы и астровирусы плохо репродуцируются в культурах клеток, для их обнаружения используют электронную и иммуноэ- лектронную микроскопию. Выделение энтеровирусов и аденовирусов осуществляется на различных линиях первичных или перевиваемых культур клеток в зависимости от вида вируса. Диагностику ротавирусных диарей проводят по выявлению ротавирусных антигенов в фекалиях, используя «тест-систему диагностическую иммуноферментную для обнаружения ротавирусных антигенов» отечественного производства (предприятие «Аквапаст», Санкт-Петербург).
Для выявления иммунологических сдвигов, обусловленных вирусами-возбудителями острых гастроэнтеритов, исследуют две пробы крови — раннюю, взятую в первые 2—3 дня болезни, и позднюю, взятую спустя 2—3 недели от начала заболевания. Можно исследовать и одну пробу сыворотки, однако диагностическая трактовка результатов при этом затруднена. Для серологической диагностики используют реакции: нейтрализации, связывания комплемента, торможения гемагглютинации, иммунолюминесценции, радиоиммунологический и иммуноферментный методы. На этиологическую роль вируса указывает четырехкратное и большее увеличение титра антител к нему.
Приложение 3
Заболевания, состояния |
Показания |
Методы выбора |
Критерии эффективности |
Вирусный гепатит |
Острая печеночная недостаточность (лрекома, кома). Тяжелое течение. Тяжелые холестатические формы. Среднетяжелые формы с угрозой развития критических состояний |
ПО ПФ+ПС+ГО ПФ же ГС эс |
Снижение клинических признаков интоксикации, уровня билирубина, олиюпептидов, ЦИК |
Тифо- паратифозные заболевания |
Тяжелое течение. Неэффективность традиционной терапии |
ГС ПФ+ПС эс |
Снижение клинических признаков интоксикации, температуры тела, уровня олигопептидов и ЦИК |
Хронические вирусные гепатиты |
Тяжелое течение. Резистентность к лечению |
по ПФ+ПС эс |
Клинико-биохимическая ремиссия |
Дифтерия |
Токсические формы Тяжелое течение |
ГС ПФ+ПС эс |
Уменьшение интоксикации, местных проявлений, частоты осложнений |
Лептоспироз |
Тяжелые формы. Острая почечная недостаточность |
ПФ+ПС ГС ГД ГФ УФ+ГС пд эс |
Улучшение клинических и лабораторных показателей интоксикации, состояния пигментного обмена. Снижение азотемии, гиперкалиемии, увеличение диуреза |
Ботулизм |
Тяжелые формы |
гс+го ГС эс |
Улучшение состояния гемодинамики, дыхания, неврологического статуса |
Менингококковая инфекция |
Тяжелое течение менингита, менингококкемия |
ПФ+ПС* ГС лкс |
Улучшение сознания, уменьшение неврологических нарушений, снижение признаков интоксикации |
Окончание приложения 3
Заболевания, состояния |
Показания |
Методы выбора |
Критерии эффективности |
Острый сепсис (пневмококковый, чумной и т. д.) |
Тяжелое течение |
ПО1 ПФ+ПС ГС |
Уменьшение клинических и лабораторных признаков интоксикации, улучшение показателей гемодинамики |
Другие вирусные и бактериальные генерализованные инфекции |
Тяжелое течение. Неэффективность традиционной терапии |
по ПФ+ПС+ГО ПФ+ПС ГС ЭС |
Уменьшение лихорадки, интоксикации, стабилизация гемодинамики. Предупреждение полиорганной недостаточности |
Острые кишечные диарейные инфекции с синдромами гастрита, энтероколита |
Легкое, среднетяжелое и тяжелое течение |
ЭС |
Уменьшение лихорадки, интоксикации, колитических проявлений |
Приложение 4