Материал: metodichka_6

Методы микробиологической диагностики.

1.Микроскопия биоптатов желудка.

2.Определение уреазной активности биоптатов желудка.

3.Молекулярно-биологический метод: ПЦР.

4.Бактериологический метод (малоэффективен).

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1.Изучение схемы бактериологического исследования крови больного с клини-

ческим диагнозом «брюшной тиф».

I этап исследования.

От больного с подозрением на брюшной тиф на 1-й неделе заболевания, в

период лихорадки, берут 10 мл крови из локтевой вены и производят посев в

20% желчный бульон в соотношении 1:10. Посевы ставят в термостат на 24 ча-

са при температуре 370С. II этап исследования.

Учет характера роста в желчном бульоне __________________________.

Высев из флакона на среду Эндо. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.

III этап исследования.

Учет характера роста на среде Эндо ______________________________.

Идентификацию выделенной культуры проводят:

а) по антигенным признакам – постановка реакции агглютинации на стекле с диагностическими сальмонеллезными сыворотками О2, О4, О9 (определение серогруппы сальмонелл), а затем с соответствующей Н-сывороткой – установ-

ление серотипа возбудителя – см. табл.1 (классификация Кауфмана-Уайта)

______________________________________________________________;

б) по биохимическим признакам – с помощью энтеротест-систем;

в) с целью определения фаготипа производят посев 4-часовой исследуемой культуры на чашку с МПА сплошным газоном, затем наносят капли типовых брюшнотифозных бактериофагов (Vi, А, В, С, Д, Е, F).

14

г) для выбора эффективной антибиотикотерапии определяют чувствительность выделенной культуры к антибиотикам диско-диффузионным методом.

IV этап исследования.

Учет результатов и выдача заключения о серотипе и фаготипе выделенной культуры, чувствительности ее к антибиотикам.

2.Серологическая диагностика брюшнотифозного носительства: учет РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом (по демонстрации).

Заключение о результатах серодиагностики.

3.Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с клиническим диагнозом «дизентерия».

I этап исследования.

Посев фекалий больного на среду Плоскирева и селенитовую среду. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.

II этап исследования.

Макроскопическое изучение характера роста на средах

_______________________________________________________________.

Отбор лактозонегативных колоний со среды Плоскирева и пересев их на скошенный МПА для накопления чистой культуры. Посевы помещают в термостат на 24 часа при температуре 370С.

III этап исследования.

Отмечают характер роста на скошенном МПА______________________. Затем проводят идентификацию выделенной культуры:

а) по антигенным признакам – постановка реакции агглютинации на стекле со смесями диагностических адсорбированных дизентерийных сывороток (смеси №1, 2, 3), а затем с монорецепторными диагностическими сыворотками (Зонне, Флекснера, Бойда)_____________________________________________;

б) по биохимическим – с помощью энтеротест-систем;

15

в) фаготипирование – проба с поливалентным дизентерийным фагом. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.

IV этап исследования.

Учет полученных результатов и выдача заключения о виде возбудителя.

16

Занятие №23

Тема. Микробиологическая характеристика холеры, псевдотуберкулеза, ки-

шечного иерсиниоза и пищевых отравлений микробной природы.

Цель занятия. Изучить характеристику и микробиологическую диагностику холеры, вибриозов, псевдотуберкулеза, кишечного иерсиниоза и пищевых от-

равлений микробной природы.

I.Теоретические знания:

1.Характеристика возбудителей холеры. Микробиологическая диагностика и специфическая профилактика холеры.

2.Микробиологическая характеристика вибриозов.

3.Характеристика возбудителей псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза.

Микробиологическая диагностика.

4.Этиологическая структура пищевых отравлений. Микробиологическая ди-

агностика пищевых отравлений бактериальной природы.

II. Практические навыки:

1. Световая микроскопия препаратов из чистых культур V.cholerae, окрашен-

ных по Граму.

2.Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с клиническим диагнозом «холера». Учет и интерпретация результатов.

3.Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с

предполагаемым диагнозом пищевая токсикоинфекция. Учет и интерпрета-

ция результатов.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1. Характеристика возбудителей холеры. Микробиологическая диагности-

ка и специфическая профилактика холеры.

Возбудителями холеры являются: Vibrio cholerae, Vibrio El-Tor (основной)

и Vibrio О-139 «Бенгал», относящиеся к семейству Vibrionaceae, роду Vibrio,

виду V.choleraе.

Морфология: грамотрицательные, слегка изогнутые в виде запятой палоч-

ки средних размеров, монотрихи, спор и капсул не образуют.

Культуральные свойства: облигатные аэробы, хорошо растут на щелоч-

ных средах (pH 8,5-9,0). В 1% пептонной воде через 6-8 часов образуют неж-

ную пленку. На щелочном агаре образуют гладкие прозрачные с голубоватым оттенком колонии.

Биохимические свойства: по классификации Хейберга, на основании способности ферментировать сахарозу, маннозу и арабинозу, представители рода Vibrio разделены на 8 групп. Возбудителей холеры относят к 1 группе Хейберга: расщепляют сахарозу и маннозу, не расщепляют арабинозу.

Антигенная структура:

О– соматический антиген (специфический);

Н– жгутиковый антиген (неспецифический).

По различию строения О-антигена представители вида Vibrio cholerae под-

разделяют на 206 серогрупп, среди которых возбудителями холеры являются

2