Дипломная (вкр): Особенности искусственного воспроизводства медицинской пиявки (hirudo medicinalis l.) в различных вариантах содержания маток

Внимание! Если размещение файла нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам

Таблица 1 - Исходные данные опыта

Масса пиявки, г	Общая масса 25.05.13 г., г	Баллоны по 4 особи в каждой, шт.	Баллоны по 6 особей в каждой, шт.	Баллоны по 8 особей в каждой, шт.
>10	274	2	1	1
7-8	1684	13	12	11
5-6	18	17	15
3-4	989	11	11	8

Таблица 2 - Количество маток медицинской пиявки разной массы в различных вариантах посадки

Масса пиявки, г	Число особей медицинской пиявки в 1 банке
	4	6	8
7-8	52	68	96
5-6	72	102	120
3-4	44	66	64

После рассаживание маток медицинской пиявки, систематически, с соблюдением четкой периодичности (один раз в 7 дней) производился осмотр маток на появление поясков. Матки, имеющие четкие пояски, готовые к откладке кокона, ссаживались, согласно тому же количественному принципу друг с другом в соответствии с их весовыми категориями, по 4, 6 и 8 в каждую емкость и помещались в затененное место. Затем регулярно производился осмотр пиявок и подсчет количества коконов в каждой банке. Учитывалось общее число коконов для каждой весовой категории маток и количества ссаживаемых вместе особей. По мере созревания коконов производился подсчет потомства (нитчаток) путем вскрытия зрелых коконов. Коконы вскрывали тонкими ножницами и делили на две половины по продольному обводу. Содержимое кокона подводилось подсчету и ссаживалось в одну емкость. Заключительным этапом служил общий подсчет потомства, сопоставление весовой категории маток и количества ссаживаемых особей, с количеством отрожденного потомства. Полученные данные обрабатывались с использованием программы Statistica.

. ОСОБЕННОСТИ ИСКУССТВЕННОГО ВОСПРОИЗВОДСТВА МЕДИЦИНСКОЙ ПИЯВКИ (HIRUDO MEDICINALIS L) В РАЗЛИЧНЫХ ВАРИАНТАХ СОДЕРЖАНИЯ МАТОК

Медицинская пиявка относится к числу немногочисленных гидробионтов среди беспозвоночных животных, которых человечество использует в медицинских целях. При этом применение дикой пиявки, т.е. отловленной в природных водоемах, на сегодняшний день небезопасно и не рационально, кроме того, в ряде стран и регионов противоречит природоохранному законодательству. В связи с этим, оптимальным способом получения медицинской пиявки сегодня для обеспечения нужд гирудотерапии, медицинской и косметической промышленности наиболее оптимальным служит искусственное разведение пиявки на производствах.

Несмотря на длительную историю разведения медицинской пиявки, научно обоснованная база, используемая для целей разведения, является устаревшей: немногочисленные работы, посвященные различным аспектом разведения этого вида, дотируются 40-70 годами XX века. [Синева, 1949, Щеголев, 1948, Шумкина, 1953, Запкувене 1972]. Эти и некоторые другие немногочисленные работы были положены в основу разработки технологических регламентов по разведению медицинской пиявки, которые используются на производствах и в настоящее время без существенных изменений.

В связи с тем, что развитие производства медицинских пиявок сегодня требует оптимизации с целью получения максимально возможного выхода потомства в искусственных условиях, нами были произведены ряд опытов по выявлению оптимальных параметров при закладке маток медицинской пиявки на спаривание откладку коконов. Нами были проанализированы, на наш взгляд, два самых важных параметра, значимых при разведению пиявок: масса используемых маток и плотность их посадки при спаривании и при откладке коконов.

Важным обстоятельством в деле разведения пиявок при анализе их плодовитости служит то, что разные этапы жизненного цикла пиявок реализуются в разных средах: спаривание в водной среде, а откладка коконов - в прибрежной среде. Таким образом, при выращивании в лаборатории спаривание пиявок осуществлялось в воде, а на откладку коконов мы закладывали их в переувлажненный древесный мох. При этом весовые категории и плотность посадки маток на обоих этапах была абсолютно одинаковой. По данным литературы [Синева, 1949] медицинская пиявка откладывает в среднем от 4 до 6 коконов, где по совокупности могут развиваться от 3 до 33 зародышей. Однако данные этого автора получены при изучении 33 маток медицинской пиявки, которые содержались отдельно в аквариумах. Разумеется, такая выборка не позволяет достоверно оценить влияние различных факторов на плодовитость пиявок, а сведения о зависимости количества потомства от веса маток или плотности посадки отсутствует полностью.

В нашем опыте было использовано 815 особей матки различной массы из различных весовых категорий (таблица 2). В процессе реализации опыта все матки были взвешены, разбиты по категориям, как это изложено в главе 2. Следующим этапом стало кормление маток и отсортировкой не питавшихся, не испытывающих голода особей.

В ходе этого от общего числа маток, задействованных в опыте, на голодание были отсажены 84 пиявки, не используемые в дальнейшем в опыте на спаривание. Это было необходимо, т.к. существует опасность повреждения сытых пиявок голодными в случае их содержания в одной емкости.

После кормления, произведенного 25 мая, и рассаживания по категориям, производилось регулярная мойка особей, при которой пиявки внимательно осматривались на предмет образования поясков, результаты заносились в дневник и отражены в таблице 3.

Таблица 3 - Появлению поясков у маток из различных весовых категорий

Дата осмотра пиявок на наличие поясков	Баллоны по 4 особи в каждой	Баллоны по 6 особей в каждой	Баллоны по 8 особей в каждой
4 июля 2013г	0	1	0
11 июля 2013г	10	13	8
18 июля 2013г	7	4	1
25 июля 2013г	16	15	16
20 августа 2013г	11	8	11
не запоясились, шт, %	14, 7,95%	29, 11,71%	41, 14,23
всего	176	246	288

Первые единичные пояски появились спустя 2 недели после кормления и спаривания (рисунок 1). Однако, массовое появление поясков у маток наблюдалось спустя месяц после кормления, начиная с 25 июня и за последующие 2 недели все матки были заложены на откладку коконов. Таким образом, период спаривания у пиявок после кормления завершился полностью через 48 дней, что почти совпадает с данными М. В.Синевой [1949], которая приводит сроки спаривания продолжительностью 1,5-2 месяца.

В ходе опыта часть испытуемых маток медицинской пиявки так и не запоясились. Графически динамика пояшения маток показана на рисунке 1

Рисунок 2 - Динамика образования поясков у маток медицинской пиявки

Откладка коконов пиявками после помещения их в переувлажненный мох, наблюдалось уже через 34 дня после закладки. В дальнейшем, при реализации опыта оценивалось количество и зрелость коконов в каждом варианте. Коконы медицинской пиявки показаны на рисунке 3.

Рисунок 3 - Коконы медицинской пиявки

Зрелые коконы по каждому варианту опыта отбирались, вскрывались, с последующим подсчетом количества нитчаток. Результаты показаны в таблицах 4,5.

Таблица 4 - Общее количество нитчаток, полученных от маток различных весовых категорий в разных вариантах опыта

Масса маток, г.	Количество маток в баллоне, шт.
	4	6	8
7-8	1488	1184	1210
5-6	1003	926	1017
3-4	505	747	473

Таблица 5 - Среднее количество нитчаток, полученное от маток различных весовых категорий

Число маток в емкости, шт.	Масса маток, г
	3-4	5-6	7-8
8	7,39 ±1, 61	8,47±1,35	12,79±2,24
6	11,31±2,02	9,07±1,16	21,88±4,72
4	11,48±1,11	13,93±3,7	22,76±8,67

В соответствии с таблицами 4, 5 наиболее «продуктивным» вариантом опыта оказался вариант, где мы использовали матку массой 7-8 г , при плотности посадки 4 штуки - 22,76 ± 8,67; несколько меньшими значениями показателя среднего числа нитчаток характеризовалась плотность посадки 6 штук в той же весовой категории - 21,88 ± 4,72. Наименьшими значениями характеризовались варианты с высокой плотностью посадки маток (8 штук в 1 баллоне) и наименьшей массой (3-4 г) самих маток - 7,39 ± 1, 61.

Полученные результаты были обработаны статистическими методами путем использования двухфакторного перекрестного дисперсионного анализа. При этом нами была произведена оценка достоверности влияния двух факторов: плотность посадки и масса маток. Результаты анализа приведены в таблице 6.

Таблица 6 - Результаты двухфакторного дисперсионного анализа

Показатель	SS	df	MS	F	p
Свободный член	783416,5	1	783416,5	218,3	0,00
Масса пиявки (до …г)	114379,9	2	57189,9	15,9	0,00
Плотность посадки	6407,5	2	3203,8	0,9	0,41
Взаимодействие факторов «масса пиявки (до …г)» х «плотность посадки»	4	2645,4	0,7	0,57
Ошибка	323030,9	90	3589,2	-	-

Примечания

df - число степеней свободы

SS - сумма квадратов

MS - средний квадрат

F - критерий Фишера

p - уровень значимости

В соответствии с таблицей 6, достоверным влиянием характеризуется только фактор «масса пиявки», в то время как плотность посадки на количество потомства достоверно не влияет. Для того, чтобы оценить, за счет какой весовой категории формируются достоверные отличия по массе маток, нами был произведен анализ средних по фактору «масса», результаты которой показаны в таблице 7.

Таблица 7 - Достоверность отличий по фактору «масса».

№	Масса пиявки (до …г)	Кол-во нитчаток Среднее	1	2
1	4	57,5000	****	-
2	6	73,7317	****	-
3	8	138,6429	-	****

Установлены достоверные отличия маток медицинской пиявки в весовой категории 7-8 г от маток весовых категорий 3-4 и 5-6 г, которые между собой достоверно не отличаются.

График поверхностей, отражающий зависимость среднего числа нитчаток, полученных от маток разной массы и разной плотности содержания, показан на рисунке 4.

Рисунок 4 - Зависимость среднего числа нитчаток от массы и плотности содержания маток медицинской пиявки

Анализируя данные произведенных расчетов и результаты оценки их достоверности, можно утверждать, что наиболее оптимальным вариантом при искусственном производстве медицинской пиявки является использование маток медицинской пиявки массой 7-8 г, при плотности содержания 6 штук в 1 баллоне. Не смотря на то, что в целом достоверные различия нами были получены только для показателя «масса» пиявки, наблюдаемые различия по плотностям содержания, пусть и не оказавшиеся достоверными, весьма существенны. Количество полученных нитчаток от маток, содержавшихся по 4 и 6 штук, примерно одинаковы и составляют 22,76 ± 8,67 и 21,88 ± 4,72 соответственно, в то время как матки этой весовой категории, содержавшиеся по 8 штук показали приплод 12,79 ± 2,24. В условиях производства, в целях экономии производственных площадей, используемых баллонов и рабочего времени сотрудников, является целесообразным использование посадки по 6 пиявок в баллоне. Тем самым экономиться 50 % ресурсных и временных ресурсов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенная работа по оценке влияния факторов «масса матки» и «плотность посадки матки» медицинской пиявки на количество отрождаемого потомства позволили сформулировать следующие выводы и рекомендации к процессу искусственного производства медицинской пиявки:

. Образование поясков у маток медицинских пиявок после произведенного кормления при температуре 26 °С начинается через 40 дней. Наиболее интенсивно пояски образуются в период с 47 по 61 день после кормления. Завершение пояшения наблюдается через 86 дней.

. Достоверным влиянием на число производимого потомства характеризуется фактор «масса пиявки». Установлены достоверные отличия маток медицинской пиявки в весовой категории 7-8 г от маток весовых категорий 3-4 и 5-6 г, которые между собой достоверно не отличаются. Максимальные значения числа полученных нитчаток от маток, содержавшихся по 4 и 6 штук, примерно одинаковы, и составляют 22,76 ± 8,67 и 21,88 ± 4,72 соответственно, минимальные значения характеризуют маток массой до 4 г: от 7,39 ± 1, 61 до 11,48 ± 1,11 нитчаток соответственно.

. Фактор «плотность посадки» для маток медицинской пиявки достоверного влияния на количество получаемого потомства не показал, однако средние значения числа нитчаток от маток, содержащихся по 4 и 6 штук выше.

. В условиях производства, в целях экономии производственных площадей, баллонов для содержания пиявок и рабочего времени сотрудников, является целесообразным использование маток медицинской пиявки массой 7-8 г при плотности посадки по 6 пиявок в баллоне. Тем самым экономиться 50 % ресурсных и временных ресурсов.

БИБЛИГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

Багдасарова А. В. О механизме действия пиявок // Актуальные вопросы офтальмологии. Ташкент, 1973. 45 c.

Баскова И. П. Пути совершенствования метода гирудотерапии. // Матер. VIII конф. Ассоц. гирудологов России и стран СНГ. М., 2003. 5 c.

Баскова И. П., Бородин В.Г., Селезнев К.Г. и др. Гирудотерапия. Методические рекомендации для практикующих врачей. М, 1990. 23 с

Воскресенский А. Е. Монография врачебных пиявок, содержащая естественную историю этих животных, анатомо-физиологическое описание их и полное руководство к практическому пиявочному хозяйству, с подробным изложением: месторождений и способов ловли пиявок, особенно в России, искусственного разведения, их воспитания, содержания, сохранения от болезней, лечения, торговли, перевозки, употребления свежих, так и припускных, а так же устройство пиявочных болот, прудов, сажалок, резервуаров и разных приборов в большом и малом виде. СПб, 1859, С. 25-45

Забкувене Д. В., Синявичене Д. П. Гистофизиологический анализ развития слюнных желез. В кн.: Актуальные вопросы обмена веществ. Матер, конференции по вопросам физиологии, обмена веществ в организме человека и животных. Вильнюс, 1976, С. 77-98.

Запкувене Д. В. Разведение и выращивание медицинских пиявок в лабораторных условиях // Тр. АН Литовской ССР. 1972. Т. 3. С. 71-84.

Зеленский В. Д. 1915 Исследования по морфологии и систематике пиявок. Петроград, 256 с.

Каменев О. Ю., Барановский А. Ю. Лечение пиявками. Теория и практика гирудотерапии. Москва, 2008. 261 с.

Каменев Ю. Я., Каменев О. Ю. Вам поможет пиявка (практическое руководство по гирудотерапии). СПб, 2000. 252 с.

Кустов С. Ю., Горбунова Ю. К., Жарова Л. Э. Современные проблемы и перспективы выращивания медицинской пиявки в искусственных условиях// Сборник материалов Международной научно-практической конференции. - Майкоп, 2013. С 19.

Кустов С. Ю., Нагалевский М. В. Внедрение искусственного воспроизводства медицинской пиявки (Hirudo medicinalis L.) как способ сохранения вида в акваториях Краснодарского края // Материалы научно-практической конференции, посвященной 20-летию природоохранной службы краснодарского края. Краснодар, 2008. С.67-68.

Лукин Е. И. К вопросу о распространении медицинской пиявки в СССР // Зоол. Журн. 1957. Т. 36, С. 658-669

Лукин Е. И. Географическое распространение пресноводных пиявок на территории СССР // Проблемы зоогеографии суши. Львов, 1958. С. 144-149.

Лукин Е. И. К фауне пиявок Северного Кавказа. Итоги северо-кавказской гидробиологической экспедиции // Труды ЗИН АН СССР. 1959. Т. 26. С. 355-359.

Михайлов С. В., Ярошенко В. А. Особенности биологии, экологии и распространения кубанской медицинской пиявки // Актуальные вопросы экологии и охраны природы экосистем южных регионов России и сопредельных территорий. Материалы ХХ межреспубликанской научно-практической конференции. Краснодар, 2005. С. 136-138

Михайлов С. В., Кустов С. Ю., Ярошенко В. А. Сезонная и суточная динамика активности медицинской пиявки (Hirudo medicinalis L.) в водоемах Краснодарского края // Фундаментальные исследования. 2006. № 3. С. 21-25.

Никонов Г. И. Медицинская пиявка. Основы гирудотерапии. СПб., 1998. 294 с.

Синева М. В. Наблюдения над выращиванием медицинских пиявок // Зоол. журн. 1944. Т. 23. С. 293-303.

Синева М. В. Биологические наблюдения над размножением медицинской пиявки // Зоол. журн. 1949. Т. 28. С. 213-224

Синева М.В. 1949. Биологические наблюдения над размножением медицинской пиявки. // Зоолог.журн., Т. 28, №3. С. 213-224

Синева М.В. Зависимость роста медицинской пиявки от приемов пищи // Бюллетень московского общества испытателей природы, отд. биол. 1950. Т. 55. 6. С. 55-56.

Устинова З.Г. Лечение больных с сердечно-сосудистой недостаточностью пиявками // Сборник науч. трудов клинической больницы неотложной помощи (МЗ УзССР). Ташкент, 1969. Т 3. С. 43-47.

Щеголев Г.Г. О величине, достигаемой медицинскими пиявками. К вопросу о частоте кормлений // Зоол. журн. 1945. Т. 24, С. 273-276

Щеголев Г.Г. Наблюдения над многократной откладкой коконов медицинскими пиявками // Зоол. журн. 1948. Т 27. С. 13-16.

Щеголев Г.Г. Пиявки (Hirudinea) // Жизнь пресных вод СССР. М.,Л., 1949, Т. 2. С. 131-145.

Щеголев Г.Г. Наблюдения над подвижностью медицинских пиявок в водоемах // Зоол. журн. 1951. Т. 30. С. 430-439.

Источник: https://www.bibliofond.ru/detail.aspx?id=791572

Смотрите также:







Изложение содержания дела, по которому приняты судебные постановления
_-___-~1
_1-тема-СтрМетал
_10_Эмиль Золя для эл версии