Материал: Особенности выращивания рыб в индустриальных рыбоводных хозяйствах, ветеринарные требования к ним

Бактериологические и вирусологические исследования

Бактериологические посевы проводят вначале с пораженных участков кожи, мышц (язвы, абсцессы и др.), жаберной ткани, крови и асцитной жидкости, а после вскрытия полости -- обязательно с печени, почек или селезенки.

Материал для вирусологических исследований отбирают из органов и тканей, где концентрируется вирус, а при малоизученных болезнях -- из наиболее пораженных органов.

Язвы перед отбором патологического материала промывают стерильным физиологическим раствором; содержимое абсцессов, фурункулов, асцитной жидкости набирают пастеровской пипеткой после прижигания места прокола.

Для асептического вскрытия рыбу обездвиживают, фиксируют препаровальными иглами на деревянной или пробковой доске.

Туловище с левой стороны освобождают от слизи и чешуи, удаляют грудной и брюшной плавники, дезинфицируют 70°-ным спиртом или фламбируют спиртовым тампоном.

Брюшную стенку отсекают стерильными ножницами полулунным разрезом от ануса к жаберной крышке.

Патматериал с паренхиматозных органов отбирают стерильно пастеровскими пипетками или бактериологической петлей.

Первичные бактериологические посевы проводят на МПБ, МПА и некоторые дифференциальные среды (например, кровяной агар, Китт--Тароцци).

Патологический материал для вирусологических исследований

Засевают на первичные однослойные или перевиваемые клеточные культуры, полученные из органов и тканей рыб. В нашей стране выращивают в основном две клеточные линии: ЕРС, полученную из эпителия оспенных разростов карпа, и БНМ, полученную из кожно-мышечной ткани рыбы пимефала.

Посевы бактерий и вирусов инкубируют в термостате при температуре 24--26 °С.

Для ускоренной дифференциации псевдомонад и аэромонад от сходных с ними родов бактерий определяют оксидазную активность культур и способность их расщеплять глюкозу на среде Хью-Лейфсона (тест окисления -- ферментации).

Одновременно или после окончания посевов готовят мазки крови и отпечатки из некротических участков, язв, паренхиматозных органов, трассудата или экссудата.

Их окрашивают по Романовскому--Гимза или по Граму общепринятыми способами.

Микологические исследования

При подозрении на грибковые заболевания рыб проводят микологические, а при бранхиомикозе и глубоких микозах -- гистологические исследования.

При большинстве микозов рыб (бранхиомикоз, сапролегниоз и др.) достаточно надежным методом диагностики является микроскопическое исследование патологического материала. Исследуют нативные препараты из пораженных органов с добавлением нескольких капель 50\%-ного водного раствора глицерина, 0,9\%-ного раствора хлорида натрия или водопроводной воды.

При исследовании на бранхиомикоз микроскопируют некроти-зированные участки или подвергнутые гнилостному разложению жабры больных рыб. Соскобы с жабр помещают на предметное стекло, добавляют несколько капель воды или других растворов, раздавливают покровным стеклом и просматривают при малом и среднем увеличении. В поле зрения микроскопа хорошо видны гифы гриба со спорами. В гистологических срезах они располагаются в просвете сосудов и респираторных складках, окрашиваются гематоксилин-эозином в темно-лиловый цвет.

Для обнаружения сапролегниевых грибов исследуют под микроскопом соскобы с кожи, жабр, носовых ямок, а также икру. При этом хорошо видны гифы гриба, заканчивающиеся зооспоран-гиями.

При глубоких микозах (ихтиофонозе, экзофиаламикозе, мико-тическом грануломатозе) исследуют микроскопически нативные раздавленные препараты из пораженных органов (печени, почек, селезенки и др.).

Чистые культуры грибов выделяют на обычных грибных средах--агаре Сабуро, Чапека, МПА. Для выделения возбудителя бранхиомикоза посевы делают из жабр, подвергшихся гнилостному разложению. Возбудителей ихтиофоноза и других глубоких микозов культивируют на МПА с добавлением 1 \% сыворотки крупного рогатого скота, а также на глюкозо-дрожжевом агаре.

Сапролегниевые грибы хорошо растут на стерилизованных кипячением семенах конопли и льна, помещенных в агаровые пластины (1,5\%-ный агар на воде), которые раскладывают в чашках Петри. Грибок растет при комнатной температуре в виде ватообразных колоний. Его также культивируют на МПА, агаре Чапека и Сабуро, для чего вырезают из них небольшие блоки, засевают культурой и раскладывают в чашки Петри.

Постановка биологических проб

В ряде случае для установления окончательного диагноза на инфекционную болезнь, а также при решении вопроса о снятии карантина или карантинных ограничений с хозяйства ставят биологические пробы. При постановке их с целью определения патогенности возбудителей используют чистые культуры бактерий, вирусов, грибов. Кроме того, применяют нативные суспензии и взвеси, приготовленные из различных органов и тканей больных или подозреваемых в заражении рыб.

Биопробы ставят в аквариумах, ваннах или бассейнах, создавая в них оптимальные условия для жизни рыб и размножения возбудителей. Наблюдения ведут ежедневно, учитывают число погибших рыб, клинические признаки болезни и характер патологоанатомических изменений. Продолжительность опытов устанавливают с учетом инкубационного периода и длительности течения заболевания в естественных условиях. В опыты отбирают восприимчивых к данному заболеванию рыб из благополучного хозяйства. В каждой серии для заражения и контроля берут по 10 рыб.

При вирусных болезнях в качестве инфекционного материала берут свежеприготовленную вируссодержащую суспензию культуры клеток или безбактериальные фильтраты суспензий органов больных рыб. Количество вируссодержащего материала и способ заражения подбирают индивидуально для каждого заболевания. Материал вводят внутрибрюшинно, контактным методом, орошением жабр или выдерживанием рыб в воде, содержащей вирус. Параллельно ставят контрольные опыты.

Для подтверждения бактериальной природы болезни испытывают чистые культуры. Здоровых рыб заражают 2-суточными бульонными культурами внутрибрюшинно или внутримышечно в дозах 0,1--0,2 мл . Молодые или старые культуры для биопробы непригодны, так как у них меняются вирулентные свойства. Музейные штаммы перед опытом пассируют через восприимчивых рыб.

Для ускорения исследований предварительно патогенность определяют по ДНК-азной активности выделенных культур.

При постановке биологической пробы для диагностики микозов используют нативный материал, в котором содержится возбудитель на всех стадиях развития, или выращивают патогенные грибы на специальных питательных средах до стадий, пригодных для заражения. Дозу вводимого патологического материала в каждом конкретном случае определяют титрованием на восприимчивых рыбах.

Биологическая проба считается положительной, если у 80 \% зараженных рыб проявляется комплекс клинических признаков и патологоанатомических изменений болезни и погибает не менее 50 \% заболевших рыб при полном сохранении их в контроле, а также при выделении исходных возбудителей.

По окончании опытов воду в аквариумах обеззараживают, создавая в ней 4\%-ную концентрацию формалина или 10\%-ную концентрацию суспензии хлорной извести. Через 1 ч воду спускают в канализационную сеть, а рыб утилизируют. Весь инвентарь и посуду, бывшие в контакте с больной рыбой, дезинфицируют в 4\%-ном растворе формальдегида в течение 1 ч. При завершении биологической пробы в бетонированных бассейнах, земляных садках, карантинных прудах проводят дезинфекцию воды хлорированием, доводя содержание свободного хлора в воде до 4--5 мг/л. Через 24 ч воду пропускают через известковый фильтр (используя только свежую негашеную известь). После этого ложе прудов дезинфицируют негашеной (10 т/га) или хлорной известью (3 т/га) и оставляют без воды в течение 1 мес.

В случае, если ставится вопрос о снятии карантина или других ограничений, биопробу проводят непосредственно в прудах хозяйства согласно инструкции по борьбе с соответствующим заболеванием.

Фосфоорганические соединения, классификация, отравления рыб

Фосфорорганические соединения - это высокомолекулярные эфиры различных кислот фосфора (фосфорной, пирофосфорной, фосфористой, фосфоновой, фосфиновой, фосфинистой) и их сернистых и азотистых производных.

Физико-химические свойства. Фосфорорганические соединения (ФОС) -- это большая группа пестицидов различного назначения (акарицидов, инсектицидов, фунгицидов, нематоцидов, гербицидов, дефолиантов).

Для борьбы с эктопаразитами рыб используют хлорофос и карбофос.

Фосфорорганические соединения, за исключением некоторых (хлорофос), плохо растворимы в воде и хорошо -- в органических растворителях. Концентраты эмульсий переходят в воде в стойкую эмульсию и наиболее опасны для рыбоводства. ФОС относительно малостойки в окружающей среде.

Большая часть их разлагается в растениях, почве и воде в течение одного или нескольких месяцев. Только некоторые инсектоакарициды внутрирастительного действия (метилмеркаптофос, антио, 6 фосфамид, сайфос и др.) сохраняются до года.

С увеличением рН и повышением температуры воды скорость гидролиза этих, соединений возрастает в несколько раз. В рыбохозяйственных водоемах они, как правило, обнаруживаются в незначительных количествах.

Однако при постоянном поступлении со сточными водами, а также в районах массового их применения отмечен довольно высокий уровень ФОС в воде, а также зарегистрированы случаи отравления рыб.

Фосфорорганические соединения (ФОС) широко используют в сельском хозяйстве и быту как средство борьбы с насекомыми, грызунами, сорными растениями. Отравления могут носить сезонный и массовый характер.

Токсические дозы. По классификации Л.И. Медведя выделяют следующие группы токсических веществ:

сильноядовитые (DL₅₀ менее 50мг/кг): тиофос (паратион, парафос), метафос (метилпаратион, метацид), меркаптофос (систокс, деметон, внуран), октаметил (шрадан);

· высокотоксичные (DL₅₀ - 200мг/кг): метилмеркаптофос (метил систокс, метилдеметон), фосфамид (диметоат, дитрол, рогор), дихлорфос (вапона, винилфосфат, ДДВФ), этион, фталофос; ·

средней степени токсичности (DL₅₀ - 200 - 1000 мг/кг): хлорофос (диптерекс, диплокс, трихлорфон), карбофос (малатон, малатион), метилнитрофос (сумитион, фолитион, метилхлортион), сайфос, трибуфос, цианофос; ·

малотоксичные (DL₅₀ выше 1000 мг/кг): бромофос, демуфос, темефос .

В зависимости от пути проникновения в организм ФОСы подразделяются на: