Московский Государственный Университет имени М.В. Ломоносова Химический факультет
Кафедра аналитической химии
Шаповалова Е.Н., Пирогов А.В.
Хроматографические методы анализа
Методическое пособие для специального курса
Ответственный редактор Чл.-корр. РАН, профессор О.А.Шпигун
Москва, 2007
Настоящее пособие составлено в соответствии с программой практических занятий и лекций специального курса «Хроматографические методы анализа» для студентов 4 – 5 курсов химического факультета Московского государственного университета им. М.В.Ломоносова. Пособие содержит описание практических работ (раздел 6), выполняемых студентами в рамках спецпрактикума по хроматографическим методам. Для лучшего понимания материала и освоения практических навыков в анализе объектов окружающей среды перед описанием практических работ в пособии представлен теоретический материал по отдельным разделам газовой, высокоэффективной жидкостной, планарной хроматографии и капиллярному электрофорезу (разделы 1– 5). Раздел 7 посвящен особенностям эксплуатации хроматографических колонок для ВЭЖХ. Для закрепления полученных знаний в разделе 8 приводятся вопросы по рассмотренным вариантам хроматографии. Авторы благодарят к.х.н. Глазкова И.Н. и м.н.с Бендрышева А.А. за предоставленные материалы при написании пособия.
Все замечания и пожелания студентов и преподавателей будут приняты авторами с глубокой благодарностью.
2
|
Оглавление |
стр |
1. |
Основные положения хроматографии |
4 |
2. |
Газовая хроматография |
11 |
|
2.2. Газо-адсорбционная хроматография |
21 |
|
2.3. Газо-жидкостная хроматография |
30 |
|
2.3. Капиллярная газовая хроматография |
34 |
|
2.4. Реакционная газовая хроматография |
46 |
|
2.5. Хромато-масс-спектрометрия |
51 |
3. |
Высокоэффективная жидкостная хроматография |
57 |
|
3.1. Молекулярная адсорбционная хроматография |
58 |
|
3.1.1. Обращенно-фазовая ВЭЖХ (ОФ ВЭЖХ) |
63 |
|
3.1.2. Использование ОФ ВЭЖХ для решения экологических |
|
|
задач |
74 |
|
3.2. Ионная хроматография |
96 |
4. |
Планарная (тонкослойная) хроматография |
110 |
5. |
Капиллярный электрофорез |
130 |
6. |
Практические работы |
143 |
7. |
Особенности эксплуатации колонок для ВЭЖХ |
177 |
|
7.1. Подготовка растворителя и пробы |
177 |
|
7.2. Типичные неисправности, способы обнаружения и |
|
|
устранения |
180 |
|
7.3. Методические аспекты обеспечения высокой |
|
|
эффективности колонки |
182 |
|
7.4. Проблемы изменения селективности колонок |
189 |
|
7.5. Проблемы воспроизводимости между параллельными |
|
|
вводами пробы |
191 |
|
7.6. Регенерация загрязненных колонок |
194 |
8. |
Вопросы |
197 |
9. |
Литература |
203 |
3
Хроматография в настоящее время является наиболее широко используемым методом исследования объектов окружающей среды.
Хроматографический метод был предложен в 1903 году русским ученым М.С. Цветом. Он писал: «При фильтрации смешанного раствора через столб адсорбента пигменты… расслаиваются в виде отдельных, различно окрашенных зон. Подобно световым лучам в спектре, различные компоненты сложного пигмента закономерно распределяются друг за другом в столбе адсорбента и становятся доступными качественному определению. Такой рассчвеченный препарат я назвал хроматограммой, а соответствующий метод анализа хроматографическим методом. Работы М.С.Цвета послужили фундаментом для развития остальных видов хроматографии для разделения как окрашенных, так и неокрашенных соединений, осуществляемых в любых средах.
Хроматография – это метод разделения и определения веществ, основанный на распределении компонентов между двумя фазами – подвижной и неподвижной. Неподвижной (стационарной) фазой служит твердое пористое вещество (часто его называют сорбентом) или пленка жидкости, нанесенная на твердое вещество. Подвижная фаза представляет собой жидкость или газ, протекающий через неподвижную фазу, иногда под давлением.
Компоненты анализируемой смеси (сорбаты) вместе с подвижной фазой передвигаются вдоль стационарной фазы. Ее обычно помещают в стеклянную или металлическую трубку, называемую колонкой. В зависимости от силы взаимодействия с поверхностью сорбента (за счет адсорбции или по какому-либо другому механизму) компоненты будут
4
перемещаться вдоль колонки с разной скоростью. Одни компоненты останутся в верхнем слое сорбента, другие, в меньшей степени взаимодействующие с сорбентом, окажутся в нижней части колонки, а некоторые и вовсе покинут колонку вместе с подвижной фазой (такие компоненты называются неудерживаемыми, а время их удерживания определяет “мертвое время” колонки).
Таким образом происходит быстрое разделение сложных смесей компонентов. Следует подчеркнуть следующие достоинcтва хроматографических методов:
1.Разделение носит динамический характер, причем акты сорбциидесорбции разделяемых компонентов повторяются многократно. Этим обусловлена значительно большая эффективность хроматографического разделения по сравнению со статическими методами сорбции и экстракции.
2.При разделении используют различные типы взаимодействия сорбатов и неподвижной фазы: от чисто физических до хемосорбционных. Это обуславливает возможность селективного разделения широкого круга веществ.
3.На разделяемые вещества можно накладывать различные дополнительные поля (гравитационное, электрическое, магнитное и др.), которые, изменяя условия разделения, расширяют возможности хроматографии.
4.Хроматография – гибридный метод, сочетающий одновременное разделение и определения нескольких компонентов.
5.Хроматография позволяет решать как аналитические задачи (разделение, идентификация, определение), так и препаративные (очистка, выделение, концентрирование). Решение этих задач можно сочетать, выполняя их в режиме “on line”.
5