Материал: Занятие1

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования

«КИРОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ»

Министерства здравоохранения Российской Федерации

Кафедра микробиологии и вирусологии

Методические указания для ординаторов Специальности 31.08.73 Стоматология терапевтическая

к практическому (семинарскому) занятию

по дисциплине Микробиология

Темы раздела дисциплины: «Формирование факторов вирулентности условно-патогенной микрофлоры» (семинарское занятие, продолжительность 2 часа; практическое занятие, продолжительность 2 часа).

Цель: способствовать формированию у ординаторов умений и навыков по изучению биологических свойств возбудителей оппортунистических инфекций желудочно-кишечного тракта, органов дыхания, слуха, особенностей их микробиологической диагностики, принципы профилактики и лечения.

Задачи:

• Рассмотреть классификацию возбудителей оппортунистических инфекций;

• Выявить отличия биологических свойств условно-патогенных микроорганизмов и патогенных бактерий;

• Подчеркнуть особенности систематики, строения, жизнедеятельности, биологические свойства микроорганизмов – возбудителей оппортунистических инфекций желудочно-кишечного тракта, органов дыхания, слуха.

Ординатор должен знать:

1. до изучения темы (базисные знания):

• функции и состав представителей нормальной микрофлоры органов пищеварения, дыхания, слуха организма человека;

• определение понятий оппортунистическая болезнь, реинфекция, суперинфекция, микст-инфекция, ремиссия и рецидив, бактерионосительство;

• механизмы и пути передачи возбудителей микробных заболеваний;

• роль микроорганизма и макроорганизма в развитии инфекционного процесса;

• значение факторов внешней среды: климато-географические, экологические, социально-экономические в возникновении инфекционного процесса;

• морфологию условно-патогенных микробов, ультраструктуру и химический состав бактерий;

• организацию микробиологической лаборатории.

2) после изучения темы:

• классификацию условно-патогенных микроорганизмов;

• понятие «оппортунистические инфекции», их медицинское и социальное значение;

• принципы и методы микробиологической диагностики неинфекционных микробных заболеваний;

• биологические свойства микроорганизмов - возбудителей оппортунистических инфекций, желудочно-кишечного тракта, органов дыхания, слуха;

• методы санитарно-профилактических мероприятий по предупреждению развития оппортунистических инфекций ЖКТ, респираторной системы, органов слуха;

• особенности течения заболеваний, вызванных условно-патогенными микроорганизмами;

• критерии этиологической роли условно-патогенных микроорганизмов, выделенных из патологических очагов;

• принципы диагностики, лечения оппортунистических инфекций органов пищеварения, дыхания, слуха;

• особенности отбора, хранения и транспортировки материала из стерильных в норме локусов для микробиологического исследования.

Ординатор должен уметь:

• исследовать состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта, органов дыхания, слуха;

• проводить лабораторную диагностику инфекционных заболеваний, идентифицировать патогенные и условно-патогенные микроорганизмы по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим, антигенным свойствам;

• определять чувствительность патогенных и условно-патогенных бактерий к антибиотикам различными способами;

• проводить оценку количественного и качественного состава индигенной микрофлоры макроорганизма с учетом возраста и пола;

• осуществлять микробиологические методы диагностики неинфекционных микробных заболеваний: микроскопический, бактериологический, вирусологический, биологический, серологический, аллергологический, молекулярно-биологический;

• интерпретировать результаты методов лабораторной диагностики;

• оценивать уровень поражения тканей и органов пищеварительной, дыхательной систем при микробных гнойно-воспалительных процессах.

Ординатор должен владеть:

• методами взятия и лабораторного исследования патогенного материала от больного для выявления оппортунистических инфекций;

• техникой микроскопии, методами посевов на питательные среды, культивирования аэробных и анаэробных бактерий, учета характера роста микроорганизмов;

• навыками определения этиологии микробных неинфекционных болезней;

• дифференциально-диагностическими методами выявления инфекционных и неинфекционных болезней.

Содержание занятия:

1. Вводный контроль.

• входной тестовый контроль знаний у студентов.

Контрольные вопросы для теоретического обсуждения:

• Имеются ли различия в составе микрофлоры различных биотопов?

• Охарактеризуйте микробиоценозы органов пищеварительной системы. Какие факторы могут привести к качественным и количественным изменениям его состава?

• Перечислите условия, влияющие на развитие оппортунистических инфекционных болезней.

• Укажите особенности течения заболеваний органов дыхания, вызванных условно-патогенными микроорганизмами.

• Приведите примеры методов изучения факторов патогенности условно-патогенных

микроорганизмов;

• Назовите особенности бактериологического метода диагностики оппортунистических инфекций.

• Опишите правила забора исследуемого материала от больных. Какое значение имеет данный метод диагностики в постановке правильного диагноза?

• Какие правила необходимо соблюдать при транспортировке исследуемого материала в бактериологическую лабораторию?

2. Беседа по теме занятия.

Вопросы для собеседования:

1. Классификация условно-патогенных микроорганизмов.

2. Отличия биологических свойств условно-патогенных микроорганизмов и патогенных бактерий (токсины, ферменты патогенности, структурные и химические компоненты, генетический контроль патогенности).

3. Особенности течения бактериальных оппортунистических инфекций.

4. Микробиология бактериальных поражений желудочно-кишечного тракта, органов дыхания, слуха.

5. Этапы бактериологического метода диагностики (методы определения токсинов, методы определения ферментов патогенности, методы определения структурных и химических компонентов, определение маркеров генетического контроля патогенности).

6. Принципы профилактики и лечения.

Формы проведения занятия: круглый стол по проблемам эволюции условно-патогенных микробов.

3. Практическая работа

Выполнение заданий.

Лабораторная работа № 1 Бактериологическое исследование микрофлоры слизистых оболочек носа

1. Сделать лабораторную работу «Бактериологическое исследование микрофлоры слизистых оболочек носа».

2. Цель работы: изучение морфологических, тинкториальных, культуральных свойств микроорганизмов, выделенных из смывов.

3. Методика проведения работы:

- взять смыв стерильным тампоном, поместить в солевой бульон

I этап:

- сделать мазок, окрасить по Граму, микроскопировать, результат микроскопии зарисовать в протоколе;

- сделать посев на питательные среды: кровяной агар, ЖСА;

- поместить в термостат при 37 градусах на 24 часа.

II этап:

- просмотреть посевы, оценить выросшие колонии качественно и количественно, оценить наличие лецитиназы и гемолиза;

- сделать мазки, окрасить по Граму, микроскопировать;

- выделение чистой культуры, посев на скошенный МПА;

- поместить в термостат при 37 градусах на 24 часа.

III этап:

- идентификация выделенной культуры;

- посев на среды пестрого ряда;

- поставить реакцию плазмокоагуляции;

- определение чувствительности к антибиотикам методом бумажных дисков.

IV этап:

- учет результатов.

4) Результаты: внесение данных в протокол.

5) Выводы: на основании изучения морфологических, тинкториальных, культуральных свойств выявлен возбудитель (указать род, вид).

Лабораторная работа № 2 Изучение патогенных свойств представителей нормальной микрофлоры организма человека Оценка гемолитических свойств по наличию гемолиза на кровяном агаре с человеческими эритроцитами, на который высевают чистую культуру исследуемых лактобацилл со среды MRS. Учет результатов проводится после культивирования 2 сут в анаэробных условиях в термостате.

Лабораторная работа № 3 Исследование антииммуноглобулиновой активности лактобактерий.

Выращенные на MRS лактобактерии выдерживают сутки при 4^о С, отобирают надосадочную жидкость и смешивают в равных объемах с человеческой сывороткой, приготовленной в рабочем разведении по методу Манчини, инкубируют 1ч при 37^оС. Далее проводится исследование наличия иммуноглобулинов методом Манчини (встречный иммуноэлектрофорез), учитывют результаты по снижению количества иммуноглобулинов в исходной сыворотке по сравнению с контрольной.

4. Ситуационные задачи для разбора на занятии.

1) Алгоритм разбора задач

- прочитать внимательно условие задачи;

- ознакомиться с заданиями;

- дать ответ на поставленные вопросы;

- сделать выводы;

- составить план диагностики и терапии.

2) Пример задачи с разбором по алгоритму:

Задача №1. В бактериологическую лабораторию поступила мокрота из хирургического отделения от пациента с диагнозом: муковисцидоз, период обострения.

Задание.

1. Как влияет наличие системного хронического заболевания на состояние защитных сил организма?

2. Какие микроорганизмы могли вызвать поражение дыхательных путей у больных муковисцидозом?

3. Предложите план бактериологической диагностики. Как провести посев материала и идентификацию выделенных микроорганизмов.

4. Какие препараты целесообразно назначить в качестве антибиотикотерапии?

1. Муковисцидо́з (МВ) — системное наследственное заболевание, обусловленное мутацией гена трансмембранного регулятора белка и характеризующееся поражением желез внешней секреции, выраженными нарушениями

функций органов дыхания и желудочно-кишечного тракта, имеющее тяжелое течение и неблагоприятный прогноз.

2. Наиболее частыми микробными агентами у больных МВ являются Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae и Pseudomonas aeruginosa. Есть данные об увеличении частоты выделения Burkholderia cepacia (B. cepacia), для которой характерна полирезистентность к антибиотикам, E. coli, Stenotrophomonas maltophilia, Acinetobacter anitratus, Alcaligenes spp.

3. Бактериологическая диагностика:

 Нативная бактериоскопия.

 Среды для первичного посева мокроты: кровяной агар, шоколадный агар, среда Эндо, желточно-солевой агар Чистовича, агар Сабуро, стретококковая жидкая среда.

 Бактериоскопия.

 Идентификация Staphylococcus aureus (характерный рост на Среде Чистовича, гр+ кокки, каталаза +, реакция плазмокоагуляции +, сбраживание маннита+).

 Идентификация Pseudomonas aeruginosa (рост на кровяном агаре, Эндо; гр- палочки, высев на среду Олькеницкого: зеленый пигмент, оксидаза+), при необходимости определение биохимических свойств ( Например, NEFERMtest24).

 Идентификация Haemophilus influenzae (характерный рост на шоколадном агаре – сероватые, сочные колонии, гр- коккобациллы, каталаза + , оксидаза -, уреаза +, β галактозидаза -, гемолиз -, редукция нитратов+, рост на простых средах -.

4. Антибактериальные препараты для постановки чувствительности при данном заболевании: парэнтеральные (цефтазидим, цефтриаксон, цефепим, гентамицин, тобрамицин, пероральные (ципрофлоксоцин, котримоксозол, азитромицин, амоксиклав)

3) Задачи для самостоятельного разбора на занятии:

Задача 2. В клинико-диагностическую микробиологическую лабораторию доставлен патологический материал. Какие условия должны быть соблюдены при транспортировке материала? Каким образом должна быть обработана тара (бокс, пенал и т.д.) и руки курьера после транспортировки? Как должны уничтожаться остатки патологического материала?

Методика решения задачи: Ординатор должен продемонстрировать понимание опасности контакта с патологическим материалом и возможности распространения возбудителей при нарушении правил работы с ним.

Задача 3. В хирургическом отделении у пациента с диагнозом хронический энтероколит при микробиологическом исследовании испражнений получены следующие результаты: обнаружены возбудитель рода Citrobacter - массивный рост; грибы рода Candida. Какова Ваша оценка данного микробиологического исследования. Определите доминирующий вид возбудителя? Какова тактика антибактериального лечения?

Методика решения задачи: Ординаторы должны выявить знания об особенностях микробиологической диагностики, правилах соблюдения эпид. режима, принципах антибактериальной терапии при оппортунистических инфекциях.

Задача 4. В отоларингологическом отделении при микробиологическом исследовании материала из уха у больного с диагнозом «хронический отит среднего уха» выделены следующие возбудители: Strept. pyogenes - массивный рост; Staf. epidermidis, грибы рода Candida. Как Вы охарактеризуете результаты данного исследования? Какова природа возбудителей (патогенные или УПМ)? Какова тактика противомикробного лечения?

Методика решения задачи: Ординаторы должны продемонстрировать знания об особенностях подхода к диагностике, в т.ч. и микробиологической, а также к тактике антимикробного лечения оппортунистических инфекций, вызванных микробными ассоциациями.

Самостоятельное заполнение таблиц.

1. Сравнительная характеристика возбудителей оппортунистических инфекций.

Рекомендуемая литература:

Основная

• Медицинская микробиология, вирусология и иммунология /Под ред. А.А. Воробьева. – М.: ООО «МИА», 2012. – 768 с.

• Практикум лабораторных работ с иллюстрированными ситуационными заданиями по микробиологии, вирусологии и иммунологии / Под ред. А. А. Воробьёва, В. Н. Царёва. – М.: ООО «МИА», 2013.-320 с.: ил.

Дополнительная:

• Донецкая Э.Г.- А. Клиническая микробиология. - М.: «ГЭОТАР – Медиа», 2011.- 351 с.

• Руководство по медицинской микробиологии. Оппортунистические инфекции и методы их этиологической диагностики. Книга 3. Том первый./Колл. авторов//Под ред. Лабинской А.С., Костюковой Н.Н. – М.: Издательство БИНОМ, 2013. – 752 с.

• Руководство по медицинской микробиологии. Книга III. Том второй. Оппортунистические инфекции: клинико-эпидемиологические аспекты/Колл. авторов//Под ред. А.С. Лабинской, Е.Г.Волиной, Е.П. Ковалевой. – М.: Издательство БИНОМ, 2014. – 880 с.