* стерилизационные — стерилизация питательных сред, растворов, посуды;* «заразные» стерилизационные — служат для обеззараживания патологического материала; посевная — производится первичный посев материала на питательные среды;* лабораторные комнаты — служат для исследований на капельную, кишечную группы бактерий, для санитар-но-бактериологических исследований. Лабораторное помещение оборудуется столами лабораторного типа, шкафами и полками для хранения необходимой при работе аппаратуры, посуды, красок и реактивов.Приложение 7.1 (обязательное)Санитарные правила СП 1.2.731-99Классификация патогенных для человека микроорганизмовIII и IV групп патогенности (извлечение из приложения 5.1 кСП 1.2.011-94)Бактерии III группа1. Bordetella pertussis2. Borrelia recurrentis3. Campylobacter fetys4. Campylobacter jejuni5. Clostridium botulinium6. Clostridium tetani7. Corynebacterium diphteriae8. Erysipelothrix rhusiopathiae9. Helicobacter pylori10. Leptospira interrogans11. Listeria monocytogenes12. Mycobacterium leprae13. Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium bovis Mycobacterium avium коклюша возвратного тифа абсцессов, септецимий энтерита, холецистита ботулизма столбняка дифтерии эризепелоида гастрита, язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки лептоспироза листериоза проказы туберкулеза14. Neisseria gonorrhoeae15. Neisseria meningitidis16. Nocarolia asteroides17. Proactinomyces israelii18. Salmonella paratyphi A19. Salmonella paratyphi В20. Salmonella typhi21. Shigellaspp.22. Treponema pallidum23. Yercinia pseudotuberculosis24. Vibrio cholerae 01IV группа1. Aerobacter aerogenes2. Bacillus cereus3. Bacteroides spp.4. Borrelia spp.5. Bordetella bronchisepticaBordetella parapertussis6. Campylobacter spp.7. Citrobacter8. Clostridium perfringens Clostridium novyi Clostridium septicum Clostridium histolyticum Clostridium bifermentans9. E. coli10. Eubacterium endocarditidis11. Eubacterium lentum Eubacterium ventricosum гонореи менингита нокардиоза актиномикоза паратифа А паратифа В брюшного тифа дизентерии сифилиса псевдотуберкулеза нетоксигенной диареи энтерита пищевой токсикоин-фекции абсцессов легких, бактериемии клещевого спирохетоза бронхосептикоза паракоклюша гастроэнтерита, гингивита, периодонтита местных воспалительных процессов, пищевой токсикоинфекции газовой гангрены энтерита септического эндокардита вторичных септеце-мий, абсцессов12. Flavobacterium meningoseptium13. Haemophilus influenza14. Hafnia alvei15. Klebsiella ozaenae16. Klebsiella pneumoniae17. Klebsiella rhinoscleromatis18. Mycobacterium spp. Photochromogens Scotochromogens Nonphotochromogens Rapid growers19. Micoplasma hominis 1Micoplasma hominis 2 Micoplasma pneumoniae20. Propionibacterium avidum21. Proteus spp.22. Pseudomonas aeruginosa23. Salmonella spp.24. Serratia marcescens25. Staphilococcus spp.26. Streptococcus spp.
менингита, септецемий менингита, пневмонии, ларингита холецистита, цистита озены пневмонии риносклеромы микробактериозов местных воспалительных процессов, пневмонии сепсиса, абсцессов пищевой токсикоинфекции, местных воспалительных процессов местных воспалительных процессов, сепсиса сальмонеллезов местных воспалительных процессов, сепсиса пищевой токсикоинфекции, септецемий, пневмонии пневмонии, тонзиллита, полиартрита, септецемий энтерита, колита актиномикоза27. Yersinia enterocolitica28. Actinomyces albusДля того чтобы увидеть микроорганизмы, их необходимо окрасить. Существуют простые и сложные способы окра- шивания микроорганизмов. При простом способе окрашивания на мазок наносится один краситель, при сложном способе окрашивания — 2 или более красителей. К таким способам окрашивания относится окраска по Граму. Соответственно выделяют формы бактерий грамположительные (окрашиваются в фиолетовый цвет) и грамотрицательные (окрашиваются в красный цвет). Грамположительные бактерии имеют несложно организованную, но мощную клеточную стенку, состоящую из множественных слоев пептидоглика-на, включающих уникальные полимеры тейхоевых кислот. Грамотрицательные бактерии имеют более тонкую клеточную стенку, включающую бимолекулярный слой пептидо-гликана и не содержащую тейхоевой кислоты.Грам +Грам -МембранаМукопептиды (муреины)МембранаЛишшолисахариды и белкиРис. 2. Схема строения клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных микроорганизмовПриготовление мазка из зубного налета1. Небольшое количество зубного налета снять острым концом спички.2. Растереть на предметном стекле размером с пятикопеечную монету.3. Мазок зафиксировать путем трехкратного проведения над пламенем горелки.4. Мазок окрасить по Граму.5. Промыть водой.6. Высушить фильтровальной бумагой и на воздухе.7. Микроскопировать.Окраска препарата по Граму1. Небольшое количество генцианвиолета напить на препарат; время окраски — 2 мин.2. Избыток краски слить в лоток, на препарат нанести пипеткой несколько капель раствора Люголя на 1 минуту.3. На препарат налить несколько капель спирта, обесцвечивание проводить до отхождения фиолетовых капель — струи краски, но не более 30 с.4. Мазок тщательно промыть водой.
5. Мазок докрасить разведенным фуксином — 2 мин.Микроскопирование препарата1. Установить освещение: конденсор должен быть поднят до упора, настройку производить с объективом малого увеличения 8-х — необходимо белое освещенное поле.2. Препарат поместить на предметный столик.3. Макровинтом опустить объектив на расстояние 0,5 см от препарата.4. Глядя в окуляр, получить изображение препарата, вращая макровинт против часовой стрелки (на себя).5. Произвести точную фокусировку с помощью микровинта.6. Переместить револьвер на большое увеличение (объектив 40-х) и провести дефокусировку только микровинтом.7. После просмотра препарата перевести револьвер на увеличение 8-х (малое) и только после этого снять препарат с предметного столика.Кроме окраски по Граму к сложным дифференциальным методам окраски относятся:1. Окраска кислотоустойчивых бактерий по Цилю— Нильсену фиксированный на пламени горелки мазок окрашивают 3—5 мин раствором карболового фуксина Циля или окрашенной фуксином бумажкой с подогреванием до появления паров, но не доводя краску до кипения;* дают препарату остыть, бумажку снимают, сливают избыток краски, препарат промывают водой;* окрашенный препарат обесцвечивают 5% H2SO4 (серной кислотой) в течение 3—5 с или 96° этиловым спиртом, содержащим 3% по объему соляной кислоты, несколько раз погружая в стаканчик с раствором;* после обесцвечивания остаток кислоты сливают, препарат промывают водой;* докрашивают дополнительно метиленовой синью Леф-флера 3—5 мин, промывают водой, подсушивают и микроскопируют.Результаты окраски: при окраске препаратов по методу Циля—Нильсена кислотоустойчивые бактерии окрашиваются фуксином в красный цвет.2. Окраска по Романовскому—ГимзеКраска Романовского—Гимзы состоит из смеси азура, эозина и метиленовой сини. Перед употреблением к 10 мл дистиллированной воды прибавляют 10 капель краски Романовского—Гимзы. Приготовленный раствор краски наносят на фиксированный мазок и оставляют на 1 ч. Затем краску сливают, препарат промывают водой и высушивают на воздухе. Краска Романовского—Гимзе окрашивает микробы в фиолетово-красный цвет.
10% сухого остатка. У бактерий, откладывающих жир в виде особых включений, количество липидов доходит до 40% (микобактерии туберкулеза).
Липиды — это запасные вещества, повышающие устойчивость бактерий во внешней среде. Связываясь с белками и углеводами, липиды составляют сложный комплекс, определяющий токсические свойства микроорганизмов.Жизненные функции микроорганизмов: питание, дыхание, рост и размножение — изучает физиология. В основе физиологических функций лежит непрерывный обмен веществ (метаболизм). Сущность обмена веществ составляют два противоположных, но взаимосвязанных процесса: ассимиляция (анаболизм) и диссимиляция (катаболизм).Ассимиляция — это усвоение питательных веществ и использование их для синтеза клеточных структур.При процессах диссимиляции питательные вещества разлагаются и окисляются, при этом выделяется энергия, необходимая для жизни микробной клетки. Все процессы синтеза и распада питательных веществ совершаются с участием ферментов. В микроорганизмах происходит интенсивный обмен веществ, за сутки 1 микробная клетка может переработать питательных веществ, которые в 30—40 раз больше ее массы.Микробная клетка использует питательные субстраты для синтеза составных частей своего тела, ферментов, пигментов роста.§ 1. Питание бактерийТипы питания бактерий определяются по характеру усвоения углерода и азота.По усвоению углерода бактерии делят на 2 типа:аутотрофы, или литотрофы, — бактерии, использующие в качестве источника углерода СО2 воздуха.гетеротрофы, или органотрофы, — бактерии, которые нуждаются для своего питания в органическом углероде (углеводы, жирные кислоты).По способности усваивать азот микроорганизмы делятся на 2 группы: аминоавтотрофы и амоногетеротрофы.Аминоавтотрофы — для синтеза белка клетки используют молекулярный азот воздуха или усваивают его из аммонийных солей.Аминогетеротрофы — получают азот из органических соединений — аминокислот, сложных белков. Сюда относятся все патогенные микроорганизмы и большинство сапро-фитов.По характеру источника использования энергии микроорганизмы делятся на фототрофы, использующие для биосинтетических реакций энергию солнечного света, и хемо-трофы.Хемотрофы получают энергию за счет окисления неорганических веществ (нитрифицирующие бактерии и др.) и органических соединений (большинство бактерий, в том числе и патогенного для человека вида).Графологическая структура «Питание бактерий» по характеру усвоения углерода по характеру усвоения азота по характеру использования источника энергии аутотрофы гетеротрофы амино- амино- фото- хемо-