Материал: Practicum_po_microbiologii

Для идентификации возбудителя используют дополнительные методы:

- на гемолитические свойства,

- фаготипирование, реакцию иммунофлюоресценции (РИФ),

- тест «жемчужного ожерелья» (выращивание на МПА с пенициллином); при положительном результате – возбудитель принимает шаровидную форму, расположенную в виде цепочек (рис. 107);

- реакцию преципитации.

Рис. 106. Край колонии (R-форма) возбудителя сибирской язвы. Увеличение х10

Рис. 107. Феномен «ожерелья» у возбудителя сибирской язвы под воздействием пенициллина. Увеличение х1350

Б. Серологический метод:

- реакцию преципитации (РП) используют для исследования кожевенно-мехового сырья, шерсти, мяса, загнившего исследуемого материала, для идентификации выделенных культур.

В. Аллергический метод:

- для выявления свежих случаев и ретроспективной диагностики предложен аллерген ВНИИВиМ (антраксин).

5. Биопрепараты для специфической профилактики:

- живая бескапсульная вакцина-штамм СТИ,

- живая бескапсульная вакцина из штамма 55.

6. Биопрепараты для специфической терапии

- гипериммунная противосибиреязвенная сыворотка,

- противосибиреязвенный гаммаглобулин.

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить культуральные свойства вакцинных штаммов СТИ, Ланге, Ценковского на МПА, МПБ и кровяном агаре.

2. Приготовить препараты-мазки из суточной агаровой культуры вакцинного штамма СТИ, окрасить их по Граму и микроскопировать.

3. Приготовить препараты-отпечатки из печени морской свинки, павшей от вакцины Ценковского, окрасить на капсулу (по Ольту или Михину) и микроскопировать.

4. Провести постановку РП методом наслаивания и оценить ее результаты.

Тема 40. Патогенные анаэробы – возбудители эмфизематозного карбункула (40.1), злокачественного отека (40.2), брадзота овец (40.3), инфекционной анаэробной энтеротоксемии (40.4)

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить особенности морфологических, культурально-биохимических свойств патогенных анаэробов и схему проведения бактериологической диагностики.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходимы таблицы: морфология микробов-анаэробов, формы колоний, схема бактериологической диагностики. Трупы морских свинок, павших после заражения (каждым видом отдельно) культурами, питательные среды – МППБ, глюкозо-кровяной агар, среда Вильеона-Блера, стерильные пастеровские пипетки, наборы инструментов. Окрашенные препараты.

При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:

1. Сущность анаэробного дыхания.

2. Методы создания анаэробиоза.

3. Морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические способности возбудителей анаэробных инфекций.

4. Схема бактериологической диагностики.

5. Биопрепараты для профилактики и терапии анаэробных инфекций.

40.1. Возбудитель эмфизематозного карбункула (эмкара)

1. Классификация возбудителя

Сем.: Bacillaceae

Род: Clostridium

Вид: Cl. Chauvoei (клостридиум Шаво)

2. Общая характеристика болезни:

Эмкар – острая неконтагиозная болезнь, преимущественно крупного рогатого скота, реже овец, характеризующаяся развитием крепитирующих отеков в мышцах, хромотой и быстрой гибелью животных (рис. 108).

Рис. 108. Эмфизематозный карбункул – инфильтрат в межчелюстном пространстве

3. Восприимчивые животные:

- крупный рогатый скот, реже мелкий рогатый скот.

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- заражение происходит при попадании спор с кормом, водой, через раны, укусы кровососущих насекомых. С током крови возбудитель попадает в мышцы, где интенсивно размножается, выделяя экзотоксин, гиалуронидазу, гемолизин. При этом происходит нарушение целостности кровеносных сосудов, что приводит к отеку и некрозу тканей, образовавшиеся газы вызывают образование крепитирующих припухлостей.

Методы диагностики:

А. Бактериологическая диагностика (рис 109):

1. Материал для исследования

- кусочки пораженных мышц, отечный экссудат, печень, селезенка, кровь сердца.

Рис. 109. Схема лабораторной диагностики эмфизематозного карбункула

2. Микроскопия

а) методы окраски: простой метод, по Граму, по Муромцеву,

б) микрокартина: полиморфные толстые, с закругленными концами палочки до 8 мкм (рис. 110).

в) грамположительные,

г) образуют споры,

д) не образуют капсулу,

е) подвижны.

Рис. 110. Возбудитель эмфизематозного карбункула из отечной жидкости погибшей коровы. Увеличение х900

3. Культивирование:

а) посевы на питательные среды: МППБ, сахарный кровяной МПА;

б) особенности выделения чистой культуры:

- облигатный анаэроб,

- оптимальная температура 37°С,

- срок культивирования 18-20 ч.

в) культуральные свойства:

- на МППБ – помутнение, осадок, газообразование незначительное,

- на сахарном кровяном агаре – колонии в виде «перламутровой» пуговицы или виноградного листа (края изрезанные), узкая зона гемолиза.

4. Биопроба:

- заражают внутримышечно морских свинок.

Б. Серологическая диагностика:

- не применяется.

В. Аллергическая диагностика:

- не применяется.

5.Биопрепараты для специфической профилактики: инактивированная ГОА формолвакцина, живая вакцина из штамма №2/14.

6. Биопрепараты для специфической терапии: гипериммунная сыворотка.

40.2. Возбудители злокачественного отека

1. Классификация возбудителей

Сем.: Bacillaceae

Род: Clostridium

Виды: С1. septicum

С1. perfringens

С1. novji (С1. oedematiens)

С1. histoliticum

2. Общая характеристика болезни:

Злокачественный отек – острая неконтагиозная инфекционная болезнь животных, характеризующаяся быстрым появлением газовых отеков, распадом тканей и сепсисом.

3. Восприимчивые животные:

- все виды животных и человек.

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- возникает после ранений, родов, травм, кастрации;

- образует экзотоксины, различные ферменты – протеолитические, сахаролитические, гемолитические и др., которые вызывают в мягких тканях отеки, некроз, скопление газа и интоксикацию организма.

Методы диагностики:

А. Бактериологическая диагностика (рис. 111):

1. Материал для исследования – кусочки пораженных органов, мышц, экссудат.

2. Микроскопия:

а) методы окраски: простой метод, по Граму, по Муромцеву;

б) микрокартина: С1. septicum – изолированные палочки с закругленными концами, в мазках-отпечатках с серозных оболочек – нити (рис. 112);

- С1. perfringens – толстые, короткие палочки, расположенные одиночно (рис. 113);

- С1. novji – крупные палочки, расположенные одиночно

(рис.114),

- С1. histoliticum – тонкие, стройные, с закругленными концами, расположенные одиночно, попарно (рис. 115),

в) все возбудители по Граму окрашиваются положительно;

г) образуют споры;

д) не образуют капсулу;

е) подвижны, за исключением С1. perfringens, который образует капсулу и неподвижен.

Рис. 111. Схема лабораторной диагностики злокачественного отека животных

Рис 112. С1. septicum в препаратах: 1 – из культуры; 2 – с поверхности печени морской свинки

3. Культивирование:

а) посевы на питательные среды: МППБ и сахарный кровяной МПА (КМПА),

б) особенности выделения чистой культуры:

- облигатные анаэробы,

- оптимальная температура 37°С,

- срок культивирования 18-20 ч.

в) культуральные свойства:

- С1. septicum на МППБ – интенсивное помутнение, на КМПА – сплошная нежная пленка, образуется зона гемолиза;

- С1. perfringens на МППБ – обильное помутнение с газообразованием;

- С1. novji на МППБ – обильное помутнение с газообразованием, на КМПА – колонии в виде спутанного клубка, гемолиза нет;

- С1. histoliticum на МППБ растет в виде умеренного помутнения, на КМПА колонии в виде росинок, без гемолиза.

г) биохимические свойства:

- обладают сахаролитическими, протеолитическими и др. свойствами.

4. Биопроба:

- заражают внутримышечно морских свинок, восприимчивы также кролики и белые мыши.

Рис. 113. С1. perfringens в препарате из культуры

Рис. 114. С1 novji. в препарате из культуры

Рис. 115. С1. histoliticum в препарате из культуры

Б. Серологическая диагностика:

- для идентификации выделенных культур проводится реакция нейтрализации.

В. Аллергическая диагностика:

- не применяется.

5. Биопрепараты для специфической профилактики:

- вакцины не нашли практического применения.

6. Биопрепараты для специфической терапии:

- применяют поливалентные антитоксичные сыворотки.