Материал: Practicum_po_microbiologii

Тема 44. Возбудитель сапа

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства возбудителя и методы микробиологической диагностики сапа.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации нужны таблица-схема микробиологической диагностики сапа, готовые препараты для микроскопии. Маллеин.

При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:

1. Морфологические, тинкториальные и культуральные особенности возбудителя.

2. Методы микробиологической диагностики сапа.

1. Классификация возбудителя

Сем.: Pseudomonadaceae

Род:. Pseudomonas

Вид: Ps. mallei

2. Общая характеристика болезни:

Сап – преимущественно хроническая инфекционная болезнь, характеризующаяся образованием специфических сапных узелков во внутренних органах и на слизистых и кожных покровах, при распаде которых образуются язвы.

3. Восприимчивые животные:

- в первую очередь, однокопытные животные (лошади, ослы, мулы), могут болеть верблюды, кошачьи (львы, пантеры, тигры, леопарды), болеет и человек

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- возбудитель, попав в организм, гематогенным и лимфогенным путем проникает в легкие и другие органы;

- в местах локализации возбудителя формируется гранулема, на коже и слизистых оболочках образуются язвы с изрытыми краями и саловидным дном;

- основным фактором вирулентности являются эндотоксины.

Антигены возбудителя вызывают гиперчувствительность замедленного типа. Аллергическая диагностика проводится в хозяйствах.

Методы диагностики (рис. 131):

Рис. 131. Схема лабораторной диагностики сапа

А. Бактериологический метод:

1. Материал для исследования:

- пораженные органы, лимфоузлы, гнойное отделяемое язв.

2. Микроскопия:

а) методы окраски: простой метод (метиленовая синь), по Романовскому-Гимзе;

б) микрокартина: полиморфные палочки прямые или слегка изогнутые, длиною до 5 мкм (рис. 132);

в) грамотрицательные;

г) спор не образуют;

д) капсул не образуют:

е) неподвижны.

3. Культивирование

а) посев на питательные среды: среды с глицерином МПА, МПБ, картофель;

б) особенности выделения чистой культуры:

-аэробы;

-оптимальная температура 37°С;

-срок культивирования 18-20 ч.

в) культуральные свойства:

- на жидких средах: равномерное помутнение среды, образование пристеночного кольца и пленки;

- на плотных средах: слизистый серовато-белый налет, который приобретает коричневый цвет на глицериновом картофеле – вначале мелкие полупрозрачные с желтоватым оттенком колонии, затем они сливаются, образуя медообразный налет.

г) биохимические свойства:

- расщепляют многие углеводы с образованием кислоты;

- индола не образуют, желатину разжижают.

Рис. 132. Возбудитель сапа в гное из яичек самца морской свинки. Увеличение х900

4. Биопроба:

- заражают 2-3 золотистых хомячков или самца морской свинки, вводя материал подкожно, развивается орхит – феномен Штрауса (рис. 133).

Рис. 133. Орхит у самца морской свинки при сапе (феномен Штрауса)

Б. Серологическая диагностика:

- является основным методом и осуществляется путем постановки РСК.

В. Аллергическая диагностика:

- нашла широкое применение в виде маллеинизации: маллеин закапывают в конъюнктивальный мешок (глазной метод).

Положительная реакция характеризуется воспалением конъюнктивы и истечением гнойного секрета из внутреннего угла глаза.

5, 6. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии:

- не разработаны.

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические свойства возбудителя.

2. Изучить схему микробиологической диагностики сапа.

3. Провести микроскопию демонстрационных препаратов возбудителя сапа.

4. Ознакомиться с аллергическим методом диагностики сапа.

Тема 45. Возбудитель лептоспироза

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства возбудителя и методы микробиологической диагностики лептоспироза.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходимы таблицы, пробирки с культурой лептоспир (сапрофиты), готовые препараты-мазки, окрашенные методом Романовского-Гимзе, и мазок, обработанный для люминесцентной микроскопии, МЛ-2, нефлюоресцирующее масло, биопрепараты, микроскоп и осветители ОИ-17, лептоспирозные агглютинирующие сыворотки, антигены для диагностики лептоспироза.

При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:

1. Основные типы лептоспир, их названия и патогенность.

2. Морфологические, тинкториальные и культуральные особенности лептоспир на жидких питательных средах.

3. Особенности бактериологической диагностики лептоспироза.

4. Серологическая диагностика лептоспироза и методика постановки микроагглютинации (РМА).

1. Классификация возбудителя

Сем.: Leptospiraceae

Род: Leptospira

Вид: L. interrogans (патогенные),

L. biflexa (непатогенные).

Имеется 18 серологических групп, в которые входят 170 различных серовариантов (серовары). Например, основными возбудителями у свиней являются лептоспиры Pomona, Tarassovi; у крупного рогатого скота Hebdomatiens, Pomona, Gripotyphosa, Tarassovi.

2. Общая характеристика болезни:

Лептоспироз – инфекционная природно-очаговая болезнь животных и человека, характеризующаяся у животных преимущественно бессимптомным течением, в типичных случаях – кратковременной лихорадкой, желтухой, гемоглобинурией, абортами и др. Зарегистрирована во многих странах, в т. ч. и в нашей стране. Летальность при клинически выраженной форме 20-25 %.

3. Восприимчивые животные:

- многие виды домашних и диких животных. Болеет и человек. Особая роль в распространении болезни принадлежит грызунам.

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- основной фактор передачи болезни – инфицированная вода, в которую возбудитель попадает от больных и переболевших животных, а также лептоспироносителей,

- входные ворота – поврежденные слизистые оболочки,

- лизис лептоспир сопровождается выходом эндотоксинов, под действием которых повышается проницаемость сосудов и лизис эритроцитов, происходят кровоизлияния, развивается гематурия и желтуха, поражается нервная система. Токсикоз может привести к гибели животного.

Методы диагностики (рис. 134):

А. Бактериологический метод:

1. Материал для исследования

- при жизни – моча, кровь (в период лихорадки);

- посмертно: моча, кровь, паренхиматозные органы.

Рис. 134. Схема лабораторной диагностики лептоспироза

2. Микроскопия:

а) готовят препарат «раздавленная капля» и микроскопируют с использованием конденсора «темное поле». На темном фоне выявляются тонкие серебристо-белые извитые нити длиною от 6 до 30 мкм с утолщениями и загнутыми в виде крючков концами (рис. 135), плохо окрашиваются анилиновыми красками, по Романовскому-Гимзе – красные, используют также метод «серебрение» по Левадити;

б) грамотрицательные;

в) спор не образуют;

г) капсул не образуют:

д) активно подвижны.

Рис. 135. Возбудитель лептоспироза в темном поле микроскопа из крови больного теленка. Увеличение х400

Рис. 136. Агглютинация лептоспир (образование «паучков» в РМА). Увеличение х400

3. Культивирование:

а) посев на питательные среды, в состав которых входит дистиллированная вода или водопроводная, или буферный раствор с 5-10 % сыворотки кролика;

б) особенности выделения чистой культуры:

- факультативные анаэробы;

- оптимальная температура 28-30°С;

- срок культивирования от 7 дней до 1-2 мес;

в) кулътуральные свойства:

на жидких средах – незначительное помутнение;

- рост определяют путем микроскопии в «темном поле».

г) биохимические свойства:

- изучены недостаточно.

4. Биопроба:

- заражают внутрибрюшинно золотистых хомячков (20-30-дневного возраста) или крольчат-сосунов (10-20-дневного возраста).

Б. Серологическая диагностика:

- используют РМА (реакцию микроагглютинации) и РА.

РМА ставят в лунках агглютинационных пластинок, компоненты:

1) сыворотка в разведении 1:100, 1:500, 1:2500 в объеме 0,1 мл;

2) антиген – живые культуры лептоспир различных серогрупп в объеме 0,1 мл. Реакция происходит в течение 1 часа при 30°С.

Положительная реакция проявляется в склеивании лептоспир с образованием «паучков» (рис. 136).

- РА: компоненты 1) исследуемая сыворотка в разведении 1:100; 2) лептоспирозные антигены шести серогрупп.

В. Аллергическая диагностика:

- не применяется.

5. Биопрепараты для специфической профилактики:

- депонированная поливалентная вакцина ВГНКИ (в двух вариантах из различных серогрупп).

6. Биопрепараты для специфической терапии:

- иммунная сыворотка против лептоспироза с.-х. и промысловых животных.

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить культуральные особенности лептоспир на жидких средах.

2. Приготовить препараты «раздавленная капля» из культуры лептоспир, микроскопировать их с использованием конденсора «темное поле».

3. Ознакомиться с методикой постановки реакции микроагглютинации при лептоспирозе.