Материал: Бактериофаги

31

Рисунок 50 – Определение количества фаговых частиц методом агаровых слоев по Грациа.

Бактерии размножаются внутри верхнего слоя агара, образуя сплошной непрозрачный фон, на котором хорошо видны негативные колонии фага в виде стерильных пятен. Считается, что каждая негативная колония образуется за счет размножения одной фаговой частицы. Метод Грациа позволяет рассчитывать концентрацию (титр) фага в исходной суспензии (рисунок 51).

Рисунок 51 – Негативные колонии бактериофага в агаре.

Количества фаговых частиц выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ/мл). Титр фага в исходной суспензии рассчитывают по формуле:

N = y/vx,

где: N - титр фага;

y- количество негативных колоний;

v - объем использованного фильтрата фага; х - разведение суспензии фага.

32

Например, если 0,1 мл фильтрата фага в разведении 10-5 образует 250 негативных колоний, то титр равен 250:0,1 x 10-5 = 2,5 x 108 БОЕ/мл.

При использовании жидкой питательной среды проводят титрование по методу Аппельмана. В этом случае готовят серию десятикратных разведений фильтрата бактериофага и определенное количество разведений вносят в свежезасеянный бульон. Максимальное разведение фильтрата, вызывающее полный лизис бульонной культуры чувствительных бактерий, принимается за титр бактериофага.

Получение фаговой суспензии с высоким титром производится путем инфицирования концентрированной жидкой бактериальной культуры или путем высева смеси фага и бактерий на питательный агар. В последующем фаги освобождают от остатков питательной среды и бактериальных клеток центрифугированием или фильтрованием через бумажные фильтры. Получаемая при этом суспензия фага может содержать до 1011-1012 фаговых частиц в 1 мл.

Большие количества фага получают путем добавления в аппараты с бульонными культурами бактерий суспензии специального производственного фага, выдерживают при температуре 37°С одни сутки, затем фильтруют. Полученный фильтрат проверяют на чистоту, стерильность, безвредность и активность.

Вопросы для контроля усвоения материала

1.Открытие явления бактериофагии и бактериофагов.

2.Классификация бактериофагов на семейства.

3.Распределение фагов на морфологические типы.

4.Распределение фагов на группы по спектру литического действия.

5.Умеренные и вирулентные бактериофаги.

6.Строение бактериофагов.

7.Резистентность фагов.

8.Продуктивный тип взаимодействия фага с клеткой (жизненный цикл вирулентных фагов).

9.Интегративный тип взаимодействия фага с клеткой (жизненный цикл умеренных фагов).

10.Неспецифическая трансдукция.

11.Специфическая трансдукция

12.Абортивная трансдукция.

13.Использование фагов в диагностике инфекционных заболеваний.

14.Применение фагов для профилактики и лечения инфекций.

15.Фаги как объект генной инженерии.

16.Схема выделения и приготовления препаратов фагов.

Тренировочные тесты

1. Явление бактериофагии впервые описал: - А. Левенгук

33

-Р. Кох

-Н.Ф. Гамалея*

-И.И. Мечников

-Ф. д' Эрелль

2.Стекловидное перерождение стафилококков описал: - Ф. Туорт* - Р. Кох - Л. Пастер

- И.И. Мечников - Ф. д' Эрелль

3.Понятия “бактериофагия” и “бактериофаг” предложены: - Ф. Туортом - Р. Кохом - Л. Пастером

- И.И. Мечниковым - Ф. д' Эреллем*

4.Первую электронную фотографию бактериофага сделал: - Ф. Туорт - Н.Ф. Гамалея - Л. Пастер - Г. Руска*

- Ф. д' Эрелль

5. Бактериофаги можно обнаружить в:

-сточных водах*

-консервированных продуктах

-кишечнике человека*

-стерильных материалах

-почве *

6. Бактериофаги:

-проходят через бактериальные фильтры*

-растут на питательных средах

-размножаются внутри клеток*

-содержат оформленное ядро

-имеют аппарат Гольджи

7. Типичные бактериофаги содержат:

-головку*

-капсулу

-эндоспоры

-базальную пластинку*

-отростки*

34

8.Большинство фагов имеют форму: - сперматозоидную* - кубовидную - овоидную

- цилиндрическую - бобовидную

9.Геном большинства фагов представлен: - РНК - ДНК*

- ДНК-азой - протеазой - лизоцимом

10.У ДНК-содержащих фагов молекула ДНК имеет форму: - линейной нити - кольца с разрывом

- фрагментированной нити - отдельных сегментов - кольца*

11.Фаги состоят из:

-нуклеиновой кислоты*

-липополисахарида

-пептидогликана

-липидов*

-белка*

12.Проникновению генома фага в клетку способствует наличие на базальной пластинке:

- цитокина - фибринолизина

- гиалуронидазы - лизоцима* - перфорина

13.Последовательность стадий взаимодействия вирулентного фага с бактериальной клеткой:

- выход фаговых частиц из клетки, биосинтез фаговой нуклеиновой кислоты

ибелков капсида, адсорбция фага на клеточной стенке, проникновение в клетку, сборка фаговых частиц

- биосинтез фаговой нуклеиновой кислоты и белков капсида, выход фаговых частиц из клетки, адсорбция фага на клеточной стенке, сборка фаговых частиц; проникновение в клетку

35

-адсорбция фага на клеточной стенке, проникновение в клетку, сборка фаговых частиц, выход фаговых частиц из клетки, биосинтез фаговой нуклеиновой кислоты и белков капсида

-адсорбция фага на клеточной стенке, проникновение в бактерию, биосинтез фаговой нуклеиновой кислоты и белков капсида, сборка фаговых частиц, выход фаговых частиц из бактериальной клетки*

-выход фаговых частиц из клетки, сборка фаговых частиц, биосинтез фаговой нуклеиновой кислоты и белков капсида, проникновение в клетку, адсорбция фага на клеточной стенке

14. По характеру взаимодействия с бактериальными клетками выделяют:

-нейтральные фаги

-умеренные фаги*

-абортивные фаги

-вирулентные фаги*

-условно-патогенные фаги

15.Типы взаимодействия фага с бактериальной клеткой: - умеренный - продуктивный* - абортивный

- интегративный* - нейтральный

16.Профаг представляет собой:

-ассоциированный с бактериальной хромосомой геном фага*

-отросток фага

-капсид фага

-головку фага

-базальную пластинку фага

17.Неспецифическую трансдукцию впервые описали: - Ф. Туорт - Г. Руска

- Д. Ледерберг и Э. Татум* - Н.Ф. Гамалея - Ф. д' Эрелль

18.Бактериальные клетки, содержащие профаг, называются: - лизогенными* - ауксотрофными

- прототрофными - термофильными - фототрофными

19.Лизогенизация обусловливает: