Возбудитель (poliovirus hominis) относится к группе пикорнавирусов, к семейству энтеровирусов(кишечным вирусам). Геном вируса полиомиелита представлен однонитевой нефрагментированной РНК, состоящей из 7,5 -8 тыс нуклеотидов, ее молекулярная масса составляет 2,5 МД. Масса вириона составляет 8—9 МД. Вирус имеет сферическую форму. Тип симметрии — кубический. Капсид вириона образован четырьмя белками по 60 копий Каждого. Три из них — VP1, VP2, VP3 — образуют внешнюю поверхность капсида, a VP4 — внутреннюю, поэтому он снаружи не виден.
Устойчив во внешней среде (в воде сохраняется до 100 сут, в испражнениях — до 6 мес), хорошо переносит замораживание, высушивание. Не разрушается пищеварительными соками и антибиотиками. Культивируется на клеточных культурах
Пути и способы заражения полиомиелитом.
Источник инфекции — человек. Возбудитель выделяется через рот (несколько суток), а затем с испражнениями (несколько недель, а иногда и месяцев). Заражение может произойти воздушно-капельным путём, но чаще — при попадании в рот активного вируса (через загрязнённые руки, пищу). Механическим переносчиком вируса могут быть мухи.
Входными воротами инфекции является слизистая оболочка носоглотки или кишечника. Проникнув в организм, вирус размножается в лимфатическом глоточном кольце (миндалины), кишечнике, регионарных лимфатических узлах, проникает в кровь, а в некоторых случаях и в центральную нервную систему, вызывая её поражение. В большинстве случаев полиомиелит протекает бессимптомно и инфекцию можно обнаружить лишь с помощью лабораторных исследований. В других случаях после инкубационного периода (3-35, чаще 9-11 сут) появляются признаки заболевания.
Различают четыре основные клинические формы полиомиелита: 1) абортивная (малая болезнь); 2) непаралитическая (менингеальная), проявляющаяся серозным менингитом; 3) паралитическая и 4) инаппарантная (скрытая). (подробно- стр 347 учебника)
27. Серологическая реакция для определения наличия вируса иммунодефицита человека.
Основным методом диагностики ВИЧ-инфекции и особенно выявления вирусоносительства является использование метода иммуноферментного анализа. Имеющиеся коммерческие тест-системы просты в употреблении, содержат сенсибилизированные антигеном лунки в планшетах, все необходимые ингредиенты и контроли (в методичке указано, что методика опыта описана в занятии 2, но я немного не нашел там этого...)
Может быть использована для определения типа вируса или типа и титра антител. Для определения типа вируса на предметное стекло наносят по одной капле вирусосодержащего материала ( количество капель=количеству сывороток). В приготовленные капли последовательно вносят по одной капле типовых сывороток. Контролем служит физиологический раствор и нормальная сыворотка. Затем в каждую каплю вносят по одной капле 5%-ной взвеси эритроцитов. Результат регистрируют через 5 минут. При соответствии вируса типу сыворотки антитела связывают гемагглютинин вируса и гемагглютинация не наступает (РТГА положительная). Эта реакция может быть поставлена и в пробирках с целью титрования вируса или антител (антигемагглютининов).
Для культивирования вирусов используют следующие методы:
1. Заражение лабораторных животных
2. Заражение куринных эмбрионов
3. Заражение культур тканей
(Не забудьте вспомнить тут про цитопатический эффект, гемадсорбцию, цветные реакции, метод бляшек, метод флюоресцирующих антител, реакцию гемагглютинации и РТГА)
Определения типа вирусов в материале основано на нейтрализации вируса типоспецифическими сыворотками. Конечный результат реакции может быть установлен на основании следующих признаков:
1. Нейтрализация ЦПД
2. Нейтрализация реакции гемадсорбции
3. Цветная проба
4. РТГА
5. Свечение клеток, содержащих вирусы, под влиянием типоспецифических флюоресцирующих сывороток
6. Нейтрализация в опыте на животных.
Вирус имеет шаровидную форму, его диаметр 100 нм. Оболочка имеет форму многогранника, составленного из 12 пятиугольников и 20 шестиугольников. В центре и углах каждого шестиугольника расположены молекулы gp120 (всего 80 молекул на вирион), оболочка содержит двойной слой липидов, над которыми выступает молекула gp120, а через мембрану проходит трансмембранный белок gp41.
Сердцевина вириона имеет форму снаряда, составляющие его молекулы из 3-4 белков образуют поверхность в виде дельта-икосаэдра.
Белок gp120 является рецептором вируса, взаимодействующим с рецептором CD4 чувствительных к нему клеток (Т-лимфоциты, макрофаги, моноциты).
В сердцевине вириона содержится его геном. Он представлен двумя идентичными молекулами РНК, двумя молекулами затравочной РНК, двумя молекулам полимеразы, обладающей пятью активностями. РНК связана с нуклеокапсидным белком.
Метод представляет собой тестирование твердофазным иммунологическим анализом электрофорез чести разделенных белков. Может использоваться в случае сомнения достоверности иммуноферментного метода (диагностика ВИЧ).
P.s. Подробности можно найти в занятии 5
Схема взаимодействия: адсорбция вируса -- окаймленная ямка -- окаймленный пузырек-лизосома -- слияние мембран -- выход нуклеокапсида в цитоплазму -- синтез обратной транскриптазой минус-цепи ДНК -- разрушение РНК-азой Н вирионной РНК -- синтез ДНК-провируса в ядро -- активация вируса -- синтез полноразмерных и субгеномных РНК клеточной РНК-полимеразой -- протеолиз и процессинг env-белков -- синтез других белков -- ассоциация двух молекул геномный РНК с капсидными белками -- включение двух молекул РНК в капсид -- мембрана клетки -- липид нас оболочка -- белки gp41 и gp120 -- отпочкование вирионов -- образование симпластов из Т-лимфоцитов -- их гибель -- иммунодефицит -- нарушение других систем -- присоединение оппортунистических инфекций.
Заражение вирусом - начало вирусоносительства. Активация Т-лимфоцита (и, соответственно, вируса) - начало болезни.
РНК-содержащие: 1 Ортомиксовирусы ( вирусы гриппа А, В, С) 2 Парамиксовирусы( парагриппозные вирусы, вирус эпидемического паротита,вирус ньюкаслской болезни, вирус кори) 3 пикорнавирусы ( более 110 серотипов риновирусов, а также некоторые серотипы вирусов Коксаки ( А и В) и ECHO) 4. Реовирусы (3-й серотип) 5. Коронавирусы ДНК- содержащие: 6. Аденовирусы ( 41 серотип, из них 8 возбудители ОРЗ)
34) Почему лица , пораженные вирусом иммунодефицита, становятся легко восприимчивыми к различным , даже слабо патогенным , микроорганизмам, иначе говоря, почему у них часто развиваются оппортунистические инфекции
Причины иммунодефицита: основная причина массовая гибель Т- хелперов. Наступает вследствие: 1) зараженные вирусом Т- хелперы гибнут вследствие апоптоза. 2) Т- киллеры распознаёт и разрушают Т - клетки, инфицированные вирусом или несущие на себе адсорбированные молекулы gp120, а также вирусинфицированные и не зараженные вирусом Т - хелперы, которые обр симласты. Вследствие нарушения большого кол- ва Т- хелперов происходит снижение экспрессии мембранных рецепторову В- лимфоцитов к интерлейкину-2 , нарушается синтез различных интерлейкинов, в результате чего нарушается функция системы Т- киллеров. Происходит подавление активности систем комплимента и макрофагов. Инфицированные макрофагов и моноциты долго не гибнут, но они не способны удалять вирус из организма. Наконец, из- за структурного и антигенного сходства gp120 с рецепторами некоторых эпителиальных клеток организма происходит синтез антирецепторных антител с широким спектром действия. Такие антитела способны блокировать различные клеточные рецепторы и осложняют течение болезни аутоиммунными расстройствами. Следствием ВИЧ- инфекции явл поражение всех основных звеньев системы иммунитета. Такие больные беззащитны против самых различных микроорганизмов. Это приводит к развитию оппортунистических и опухолевых заболеваний.
35)Какие типы антигенной изменчивости вируса гриппа вы знаете и каково их значение в эпидемиологии этой болезни (из интернета)
Антигенный дрейф - происходит в период между пандемиями у всех типов вирусов (А, В и С). Это незначительные изменения в структуре поверхностных антигенов (гемагглютинина и нейраминидазы), вызываемые точечными мутациями в генах, которые их кодируют. Как правило такие изменения происходят каждый год. В результате возникают эпидемии, так как защита от предыдущих контактов с вирусом сохраняется, хоть она и недостаточна.
Антигенный шифт - Через нерегулярные интервалы времени (10-40 лет) появляются вирусы с сильными отличиями от основной популяции. Эти изменения серьезно затрагивают антигенную структуру гемагглютинина, а реже и нейраминидазы. В настоящее время механизм образования новых штаммов вирусов гриппа окончательно не ясен. Одна из существующих теорий основана на рекомбинации генов вируса гриппа животных (птиц, свиней) и человека, не имеющему к нему готовых факторов защиты- клеточного и гуморального иммунитета. Многие типы животных - это птицы, свиньи, лошади, морские млекопитающие и др. (включая человека), могут быть инфицированы вирусом гриппа А. Некоторые типы вирусов типа А могут инфицировать несколько типов животных. Вирус гриппа содержит 8 молекул РНК. В случае, если в одном организме (например, свиньи) встречаются два разных вируса гриппа, то они могут обмениваться фрагментами нуклеиновой кислоты друг с другом. Другая теория стоит на позициях рецикличного появления вируса в человеческой популяции.
З.Ы.(стр 331 в учебнике)
Профилактика заключается в борьбе с бешенством среди животных и предупреждения развития болезни у людей, подвергшихся укусам или ослюнению больным животным Программа ликвидации : 1. Искоренение городского собачьего бешенства 2. Оздоровление природных очагов рабической инфекции
Перспективным считается оральные антирабические вакцины: живая модифицированная цельновирионная вакцина из аттенуированных вакцинных штаммов ( САД- Берн Внуково-32) и рекомбинантная генно- инженерная оральная вакцина с использованием в качестве вектора вируса осповакцины, экспрессирующего ген G- протеина вируса бешенства При укусах или ослюнении необходимо тщательно промыть рану или кожу в месте попадания слюны мыльной водой, рану прижечь спиртовым р- Ом йода и начать проведение спец профилактики антирабической вакциной и антирабическим гамма- глобулином. Рекомендована антирабическая инактивированная культуральнаявакцина, которая изготовлена на культуре клеток, инфицированных аттенуированным вирусом бешенства ( штамм Внуково-32)
37)По каким признакам можно судить о размножения вирусов в культуре клеток? По цитопатическому эффекту: в результате размножения вируса клетки гибнут, и под микроскопом заметны дегенеративные изменения клеток. Пласты зараженных клеток отслаиваются от стенки пробирки или флакона. Так как рост клеток прекращается , рН среды мало изменяется по сравнению с контролем ( клетки без вируса)
38)какие методы применяют при вирусной диагностики гепатита А Кроме заражения животных - шимпанзе, мармозет, павианов, которых у нас нет Предложены различные иммунологические методы:РСК, иммунофлуоресцентный метод, гемагглютинации иммунного прилипания ( комплекс вирусный антиген + антитело в присутствии комплемента адсорбируется на эритроцитах и вызывает их склеивание) Надежным специфическим метод иммунной электронной микроскопии, однако он трудоемкий. Поэтому единственной приемлемой иммуннологической р- ей явл метод иммуносорбентного анализа твердой фазы в виде ИФМ и РИМ В нашей стране предложена система - ДИАГН-А-ГЕП.
38)Какие методы применяют при вирусной диагностики гепатита А Кроме заражения животных - шимпанзе, мармозет, павианов, которых у нас нет Предложены различные иммунологические методы:РСК, иммунофлуоресцентный метод, гемагглютинации иммунного прилипания ( комплекс вирусный антиген + антитело в присутствии комплемента адсорбируется на эритроцитах и вызывает их склеивание) Надежным специфическим метод иммунной электронной микроскопии, однако он трудоемкий. Поэтому единственной приемлемой иммуннологической р- ей явл метод иммуносорбентного анализа твердой фазы в виде ИФМ и РИМ В нашей стране предложена система - ДИАГН-А-ГЕП.
Распространению способствует:
легкость пути передачи
короткий инкубационный период
всеобщая восприимчивость
существование нескольких типов вируса гриппа
уникальная АГ – изменчивость
Иммунитет штаммо- и вариантоспецифичен.
Патогенез.
Попадает аэрозольным путем в цилиндрический эпителий верхних дыхательных путей, где проходит короткий инкубационный период. Далее он выходит в кровь (продромальный период) → по эндотелию капилляров ВДП в ВДП, повреждает эндотелий → кашель, ринит. В результате повышения проницаемости вируса → отек мозга с летальным исходом. После гриппа присоединяются осложнения чаще бактериальной природы.
Репродукция.
Вирусы прикрепляются к чувствительным клеткам верхних дыхательных путей с помощью гемагглютинина, проникает внутрь клетки, теряет часть оболочки, «-»РНК вириона стремится к ядру, в ядре начинается процесс транскрипции и репликации вируса. Для транскрипции РНК необходим КЭП – участок на 5´конце иРНК, который состоит из метилированного гуанидина и 10-13 прилежащих нуклеотидов. КЭП необходим для иРНК вируса, чтобы она распознала рибосому клетки. Если не будет КЭП – трансляция не будет идти. В ядре с помощью РВ2 фермент откусывает КЭП от клеточной иРНК, а т.к. синтез клеточной иРНК происходит в ядре, вирусная иРНК должна проникнуть в ядро. В ядре синтезируется 3 типа вирусоспецифической РНК: