Материал: ГФ 11-1
--------T------T---T--T------T------T-------T------T-----T----T------
T------T------¬
¦
¦
0
¦
¦
2
¦
0
¦
¦
2
¦
¦
¦
2
¦
¦
¦
2
¦
¦
¦
y
¦
d
¦
d
¦
y
¦
d
¦
d
¦
y1
¦
d
¦
d
¦
y
¦
d
¦
d
¦
¦
¦
1
¦
¦
¦
2
¦
¦
¦
¦
¦
¦
2
¦
¦
¦
+-------+------+---+--+------+------+-------+------+-----+----+------
+------+------+
¦
¦
222
¦
3
¦
9
¦
229
¦
- 1,75
¦
3,0625
¦
222
¦
0,5
¦
0,25
¦
235
¦
2,25
¦
5,0625
¦
¦
¦
217
¦
- 2
¦
4
¦
231
¦
0,25
¦
0,0625
¦
220
¦
- 1,5
¦
2,25
¦
231
¦
- 1,75
¦
3,0626
¦
¦
¦
218
¦
- 1
¦
1
¦
228
¦
- 2,75
¦
7,5625
¦
221
¦
- 0,5
¦
0,25
¦
233
¦
0,25
¦
0,0625
¦
¦
¦
219
¦
0
¦
0
¦
235
¦
4,25
¦
18,0625
¦
233
¦
1,5
¦
2,25
¦
232
¦
- 0,75
¦
0,5625
¦
+-------+------+---+--+------+------+-------+------+-----+----+------
+------+------+
¦
Сумма
¦
876
¦
0
¦
14
¦
923
¦
0
¦
28,75
¦
886
¦
0
¦
5
¦
931
¦
0
¦
8,75
¦
¦
Среднее
¦
219,00
¦
¦
¦
230,75
¦
¦
¦
221,50
¦
¦
¦
232,75
¦
¦
¦
L-------+------+---+--+------+------+-------+------+-----+----+------
+------+-------
II.5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ МЕТОДОМ
ДИФФУЗИИ В АГАР НА ЧАШКАХ ПЕТРИ
Описанная в предыдущем параграфе методика определения активности антибиотиков по схеме
латинского квадрата предполагает использование лотков. Возможен и другой способ определения
этой активности - по диффузии в агар на чашках Петри. Ниже описан трехдозный вариант этого
метода <*>.
--------------------------------
<*> Этот раздел основан на разработке Всесоюзного НИИ антибиотиков и Государственного
НИИ по стандартизации и контролю лекарственных средств Министерства здравоохранения СССР.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
Приладожья, Поморья и Прионежья –
Постоянно действующий третейский суд.
Стандартный (S) и испытуемый (U) образцы растворяют из расчета
1 мг в 1 мл (основной раствор), затем готовят по три концентрации
S S S
рабочих растворов стандарта (D1, D2, D3) и испытуемого образца
U U U
(D1, D2, D3), относящиеся друг к другу как 1:2:4. Все 6
растворов закапывают на одну чашку Петри, причем
последовательность внесения растворов в цилиндры или в лунки
должна быть случайной (возможные последовательности внесения
растворов приведены в табл. II.5.1). Число чашек n должно быть не
меньше 6.
Для уменьшения влияния колебаний во времени между внесением
различных растворов рекомендуется после внесения растворов
выдерживать чашки в течение 1-2 ч при комнатной температуре. После
S U
измерения зон угнетения роста результаты опыта у , и у
i,j i,j
(i = 1, 2, 3 - номера доз, j = 1, 2, ..., n - номера чашек)
записывают в таблицу (как показано в приведенном ниже численном
примере). Там же записывают получаемые расчетом следующие
вспомогательные величины:
S U
Si = SUM у и Ui = SUM у (II.5.1)
j i,j j i,j
- суммы по чашкам для каждой дозы стандарта и испытуемого образца;
S U
Tj = SUM у + SUM у , (II.5.2)
i i,j i i,j
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
- суммы по всем дозам для каждой чашки;
у = SUM у = (S1 + S2 + S3) +(U1 + U2 + U3) = SUM Tj (II.5.3)
i,j i,j j
- суммы всех диаметров зон задержки роста по всем дозам и чашкам.
Далее вычисляют:
S = S1 + S2 + S3 и U = U1 + U2 + U3 (II.5.4)
- суммы всех диаметров зон задержки роста отдельно для стандарта и
для испытуемого образца;
L = S3 - S1 и L = U3 - U1 (II.5.5)
S U
- "линейные контрасты" для стандарта и для испытуемого образца;
Q = S1 - 2S2 + S3 и Q = U1 - 2U2 + U3 (II.5.6)
S U
"квадратичные контрасты" для стандарта и для испытуемого образца.
Для проверки законности дальнейших расчетов следует провести дисперсионный анализ
результатов опыта в соответствии с табл. II.5.2, а именно должно получиться F < F(95%; f, fост) для
строк 2, 3, 4 и F > F (95%) для строки 1.
Выполнение первого условия одновременно означает, что вариации в этих строках 2, 3, 4
должны рассматриваться как случайные, и поэтому их следует включить в остаточную вариацию,
произведя также перерасчет значимости линейной регрессии (кстати, это относится и к вариациям в
строках 5 и 6, если они окажутся незначимыми). Разумеется, при указанном перерасчете степени
свободы вариаций, включаемых в остаточную вариацию, должны прибавляться к числу степеней
свободы последней (fост).
Таблица II.5.1
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
Приладожья, Поморья и Прионежья –
Постоянно действующий третейский суд.