МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФГОУ ВО «КАБАРДИНО-БАЛКАРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ.В.М.КОКОВА
ФАКУЛЬТЕТ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ И БИОТЕХНОЛОГИИ
кафедра ветеринарно-санитарной экспертизы
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
к выполнению лабораторных работ по дисциплине "Иммунология" для студентов специальности 36.05.01 «Ветеринария» всех форм обучения.
Нальчик -2017
Рекомендовано УМС ФГБОУ ВО "Кабардино-Балкарский ГАУ Протокол №__________
Автор: д.б.н., доцент кафедры «Ветеринарно-санитарная экспертиза» Ф.М. Хасаева.
Иммунология: методические указания по выполнению лабораторных работ для студентов специальности 36.05.01 "Ветеринария" / Сост.: Ф.М. Хасаева // ФГБОУ ВО "Кабардино-Балкарский ГАУ". – Нальчик, 2017. – 18 с.
Методические указания по выполнению лабораторных работ "Иммунология" составлены в соответствии с программой дисциплины и предназначены для студентов специальности 36.05.01 "Ветеринария". Методические указания по выполнению лабораторных работ содержат краткое описание лабораторных методов диагностики инфекционных заболеваний при помощи реакций иммунитета. Материал ориентирован на вопросы профессиональной компетенции будущих специалистов.
Ответственный за выпуск:
Кудаев Р.Х., проректор КБГАУ по УВР, профессор
© ФГБОУ ВО "Кабардино-Балкарский ГАУ", 2017
2
ВВЕДЕНИЕ
Дисциплина "Иммунология" является одной из составляющих, необходимых для подготовки высококвалифицированных специалистов по специальности 36.05.01 "Ветеринария".
Задачей лабораторных работ является выработка навыков диагностики у животных инфекционных заболеваний с помощью реакций иммунитета и использования результатов освоения в профессиональной деятельности.
Реакциями иммунитета (серологическими реакциями) называют действие между антигенами и антителами, ведущее к образованию иммунного комплекса (антигенантитело). Они протекают, как правило, в 2 фазы в присутствии дополнительного фактора (электролит, комплемент, фагоцит или др.). Специфическая фаза (невидимая, "химическая") происходит очень быстро и характеризуется соединением детерминантной группы антигена с активным центром антитела, В результате образуется комплекс, утрачивающий растворимость в изотонических растворах: например, в растворе хлорида натрия. Неспецифическая фаза (видимая, "коллоидная") наступает через несколько минут или часов и характеризуется укрупнением комплекса антиген+антитело с изменением его физических свойств. Эта фаза сопровождается видимыми феноменами: выпадением осадка, образованием хлопьев, просветлением взвеси, остановкой движения частиц и др.
Реакции иммунитета высокоспецифичны и их широко применяют на практике для серодиагностики инфекций (по обнаружению антимикробных антител в сыворотке крови), определения вида и варианта микроба по антигенной структуре, определения других антигенов (аллергенов, гормонов, биологических образцов разного происхождения). Области применения реакций иммунитета: диагностика инфекционных и неинфекционных заболеваний, фармация, санитарно-ветеринарная служба, трансплантация органов и тканей (в т.ч. крови), судебная медицина.
По каждой теме предусмотрены: минимум теоретического материала, цель, ход выполнения работы, перечень необходимого оборудования и список литературы.
ТЕМА 1. ОРИЕНТИРОВОЧНАЯ И РАЗВЁРНУТАЯ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ
(ОРА И РА)
Продолжительность – 2 часа (ОФО), |
0,5 часа (ЗФО) |
Цель: техника постановки ориентировочной реакции агглютинации (ОРА)
Задачи, подлежащие исследованию. Реакцию ставят для идентификации выделенной чистой культуры микроорганизмов на стекле. К капле взвеси исследуемой культуры бактерий добавляют каплю коммерческой агглютинирующей гипериммунной сыворотки. Стекло покачивают круговыми движениями в течение 1-2 минут. Результат реакции оценивается в четырѐх крестовой системе по степени агглютинации:
«++++» - в виде большого количества крупных хлопьев и полного просветления жидкости;
«-» - осадка нет, жидкость мутная.
Результат реакции на «++++» и «+++» считают положительным.
Техника постановки развѐрнутой (пробирочной) реакции агглютинации (РА)
Реакцию используют для выявления количества антител в сыворотке крови больного животного.
В ряду используют обычно пять пробирок:
-в 1-й находится 2.4 мл физиологического раствора
-в 3-й, 4-й и 5-й по 0.5 мл физиологического раствора.
В 1-ю пробирку добавляют 0.1 мл сыворотки для получения еѐ исходного разведения 1:25. Остальные пробирки используют для получения последовательных двух кратных разведений сыворотки в титрах с 1:25 до 1:200.
Во 2-5-ю пробирки с 0.5 мл разведѐнной сыворотки добавляют по 0.5 мл корпускулярного антигена в концентрации 109 м.к./мл. Общий объѐм содержимого 2-5-
йпробирок составляет 1 мл с разведениями сыворотки 1:50, 1:100, 1:200, 1:400. Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием и инкубируют при 37◦С в
течение 20 часов.
Параллельно ставят "+" и "-" контроли.
Учѐт результатов начинают с контрольных пробирок. Результат реакции оценивается в четырѐх крестовой системе по степени агглютинации:
«++++» - хорошо выраженный осадок и полное просветление жидкости; «-» - осадка нет, жидкость мутная.
Результат реакции на «++++» и «+++» считают положительным. Максимальное разведение исследуемой сыворотки крови с положительным результатом называют титром сыворотки в РА.
Принцип метода. Склеивание корпускулярного антигена антителами диагностической гипериммунной агглютинирующей сыворотки.
Ход анализа.
1. Каждому студенту провести ОРА с одной диагностической гипериммунной агглютинирующей сывороткой для определения выданной на группу студентов культуры бактерий.
4
2.Результаты ОРА зафиксировать в тетради.
3.Сопоставив результаты всех студентов группы сделать заключение по идентификации культуры бактерий.
Оборудование и биологические объекты
1.Взвесь убитой культуры бактерий.
2.Диагностические гипериммунные агглютинирующие сыворотки.
3.Стѐкла для ОРА.
4.Дозаторы объѐмом 0,1-1 мл.
ЛИТЕРАТУРА
1. Кисленко, В. Н. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии [Текст]: Учеб. пособие / Кисленко, В. Н. – М.: КолосС, 2005. – 232 с.
5