Материал: Моноклональные антитела Учебно-методическое пособие для аспирантов и студентов высших учебных заведений

Учебно-методическое пособие по курсу иммунология «Моноклональные антитела» для аспирантов и студентов высших учебных заведений составлены ассистентом кафедры микробиологии Э.А. Магдеевой и профессором А.К. Галиуллиным.

Печатается по решению Ученого совета факультета ветеринарной медицины Казанской ГАВМ имени Н.Э. Баумана от ___________________ 2018 г., протокол №

Рецензенты: профессор А.М. Алимов ведущий научный сотрудник В.Г. Гумеров

ВВЕДЕНИЕ

Моноклональные антитела - антитела, вырабатываемые иммунными

клетками, принадлежащими к одному клеточному клону, то есть произошедшими из одной плазматической клетки-предшественницы.

Моноклональные антитела могут быть выработаны против почти любого природного антигена (в основном белки и полисахариды), который антитело будет специфически связывать.

Получение антител для нужд человека начинается с иммунизации животных. После нескольких инъекций антигена в присутствии стимуляторов иммунного ответа в сыворотке крови накапливаются

специфические антитела. Такие сыворотки называются иммунные.

Иммунные сыворотки находят широкое применение в научных исследованиях в биологии, медицине и в ветеринарии. Такие сыворотки,

даже максимально очищенные, гетерогенны, так как содержат антитела к

различным антигенным детерминантам комплексного антигена,

использованного для иммунизации.

Антитела выделяют из сыворотки в виде иммуноглобулиновой фракции, осаждая их из сыворотки крови сульфатом аммония, спиртом,

полиэтиленгликолем (ПЭГ) и другими веществами. В итоге, полученные антитела содержат много антител с различной специфичностью, ко многим

антигенным детерминантам.

Получение активных иммунных сывороток путем гипериммунизации животных сопряжено с определенными трудностями. Во-первых, у разных животных даже одной и той же линии, может быть различный уровень иммунного ответа на один и тот же антиген. Во-вторых, даже при использовании очищенных антигенов при иммунизации может возникнуть большое количество антител на остаточные количества примесных веществ.

В-третьих, даже если получена специфическая сыворотка с высоким титром антител, последние могут оказаться гетерогенными как по принадлежности к определенному классу иммуноглобулинов, так и по способности участвовать в различных серологических реакциях. Не каждое животное – продуцент

способно при гипериммунизации вырабатывать моноспецифические

сыворотки. Сыворотки таких животных необходимо адсорбировать с целью удаления перекрестно реагирующих антител.

При проведении иммунохимических исследований, используются антитела, взаимодействующие узко специфично по принципу "антиген -

антитело". Для проведения такого анализа необходимы абсолютно идентичные антитела, синтез которых обычными способами не приемлем.

ПОЛУЧЕНИЕ ГИБРИДОМ

Решение проблемы было предложено в 1975 году учеными Георгом Кѐлером и Цезарем Мильштейном. Они разработали методику получения клеточных гибридов - гибридом. Гибридомы (гибридные опухолевые клетки)

образуются в результате слияния лимфоцитов, взятых от иммунизированных животных, с клетками миеломы костного мозга, культивируемыми in vitro.

Для исследования надо было изолировать клон антителообразующих клеток (АОК) - плазматических клеток (производных от В-лимфоцитов).

Необходимо отметить, что В-лимфоциты могут жить только в организме хозяина, и в искусственной питательной среде они быстро гибнут. Их длительное культивирование вне организма невозможно. Наоборот, клетки опухоли из плазматических клеток, называющиеся плазмоцитомами или

миеломами, хорошо культивируются и размножаются in vitro и их называют

―бессмертными». При введении их сингенным животным (животные,

принадлежащие к одной генетически чистой линии) они вновь образовывали опухоли. Гибриды, полученные при слиянии клеток мышиной миеломы с клетками селезенки, были названы гибридомами и соответственно сама техника – гибридомной.

ПОЛУЧЕНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ

Мышей интенсивно иммунизируют определенным антигеном - белком,

бактериальными клетками или клетками животного происхождения. Когда в их крови появляются антитела, у них берут селезенку (рис.1), и из неѐ готовят взвесь клеток (с большим содержанием В-лимфоцитов).