выявление степени сходства различных ДНК Применяется для идентификации микроорганизмов, особенно тех, которые трудно и медленно растут (микоплазмы. хламидии. вирусы )
Материал для исследования:
гной; кровь; отделяемое из уретры: моча, испражнении, биопунктаты тканей и органов: объекты окружающей среды (вода, почта). Методы гибридизации:
- в растворе,
- на фильтре,
- на стекле.
Зонд - это двухцепочечные или одноцепочечные фрагменты ДНК меченые затонной, флюорисцентной или ферментной.
II ПЦР (полимеразная цепная реакция) - что способ быстрого получения множественных копий специфической последовательности ДНК бактерий, грибов, вирусов до количество, достаточного для идентификации другими молекулярно-биологическими методами Назначение:
* индикация микроорганизмов в объектах внешней среды, пищевых продуктов, материале от больных,
* идентификация микроорганизмов.
* генетическое типирование,
* выявление генов вирулентности. Материал для исследования тог же Основные компоненты:
* исследуемая проба ДНК;
* смесь ДНТФ (дезоксинуклеотилтрифосфат),
* достраивание с помощью ДНК - полимеразы:
* праймеры - синтетические фрагменты ДНК;
* специфический буфер;
* минеральное масло;
* мембрана.
27. Учение об инфекции. Условия возникновения инфекционного процесса. Отличительные признаки инфекционных заболеваний. Типы инфекций
Инфекция (лат. infectio-- заражение), или инфекционный процесс, представляет собой совокупность физиологических и патологических адаптационных и репарационных реакций, которые возникают и развиваются в макроорганизме в процессе взаимодействия с патогенными микроорганизмами, вызывающими нарушения его внутренней среды и физиологических функций.
Отличия инфекционных заболеваний от неинфекционных:
1. Причина заболевания - живой агент, при этом каждая болнзнь имеет своего возбудителя.
2. Сложные процессы взаимодействия между патогенными микроорганизмами и продуктами их жизнедеятельности - токсинами, ферментами - с одной стороны, и клетками, тканями и органами организма хозяина с друой.
Условия возникновения:
1. Инфицирующая доза заболевания - минимальное количество микробных клеток, способных вызвать инфекционный процесс.
2. Микроб должен попасть во входные ворота, т.е. орган в котором он может размножаться.
3. Патогенность - способность микроба вызывать инфекционный процесс у хозяина.
4. Степень патогенности - вирулентность - индивидуальный штаммовый признак.
Типы инфекций:
1. В зависимости от хозяина:
а) инф. растений;
б) инф. животных;
в) инфекции людей
2. В зависимости от возбудителя:
а) бактериозы
б) микозы
в) вирусные болезни
г) протозоозы
д) паразитозы
3. В зависимости от тяжести:
а) микробоносительство
б) бессимптомные формы инфекций (латентная)
в) сама инфекция.
4. По длительности течения:
а) острые инфекции - короткий инкубационный период, выражены признаки заболевания, относительно короткое течение (2-3 месяца). Иммунный ответ хорошо выражен. (ангина)
б) первично-хронические инфекции - длительный инкубационный период, медленное начало, нет цикличности, иммунный ответ слабо выражен. (склерома)
в) вторично, или острохронические. 1-я стадия протекает остро, часть больных выздоравливает, а у части болезнь переходит в хроническую форму.
г) меделенные инфукции - вирусной или преонной этиологии. 100% летальность (СПИД).
5. По кратности заражения:
а) инфекция с однократным заражением организма
б) суперинфекция - заражение тем же микробом, но до выздоровления.
в) реинфекция - заражение тем же микроорганизмом, но после выздоровления.
г) рецидив - возврат клинических проявлений болезни без повторного заражения за счет оставшихся в организме возбудителей. (остеомиелит, возвратный тиф).
6. По числу возбудителей:
а) моноинфекции
б) смешанные инфекции
в) вторичная ифекция - вторичное заражение другим микробом на фоне продолжительного заболевания.
7. По пути проникновения:
а) экзогенная
б) эндогенная - активация микроба, содержащегося в организме.
в) аутоинфекция - за счет микробов, составляющих микрофлору.
8. По месту заражения:
а) внебольничные
б) внутрибольничные
9. По источнику заражения:
а) антропонозы (корь, коклюш)
б) зоонозы - истинные инфекции животных.
в) сапронозы - истинные заражения - внешняя среда.
28. Роль микроорганизма в инфекционном процессе. Патогенность и вирулентность Факторы патогенности
Микробы являются причиной инфекции. Возбудителями инфекций, или инфекционных процессов, являются патогенные, или болезнетворные, микроорганизмы, обладающие способностью прикрепляться (адгезироваться) к клеткам определенных органов, размножаться и колонизировать поражаемые участки, что в конечном итоге может привести к инфекционной болезни.
Патогенностыо называется способность определенных видов микроорганизмов вызывать инфекционный процесс у чувствительного к ним человека (животного). Патогенность определяется комплексом признаков, контролируемых многими группами генов. Таким образом, патогенность является полидетерминантным признаком, который обусловливается наличием в структуре микроорганизмов биологически активных веществ -- белков, полисахаридов, липидов и их комплексов, а также их способностью образовывать токсины и некоторые ферменты.
Патогенность характеризуется специфичностью, т. е. способностью вызывать типичные для данного вида возбудителя пато-морфологические и патофизиологические изменения в определенных тканях и органах при естественных для него способах заражения. ). Генотип патогенного микроорганизма фенотипически проявляется в его вирулентных и токсических свойствах. Наряду с патогенными существуют так называемые условно-патогенные микроорганизмы. Они чаще всего является естественными обитателями разных биотопов организма человека и вызывают заболевания только при резком снижении общего и местного иммунитета.
Вирулентность -- это степень патогенности, связанная с живой, активно метаболизирующей клеткой возбудителя, которую суммарно можно выразить в условно принятых единицах -- DLM и LD50. I DLM (лат. которое при определенном способе заражения вызывает гибель 95 % восприимчивых животных определенного вида, веса и возраста в течение заданного времени. LD5o, вызывающая гибель 50% зараженных животных, является более точной дозой. Вирулентность можно рассматривать как фено-типический признак, проявляющийся в организме хозяина в способности инфекционного агента прикрепляться к чувствительным клеткам, колонизировать и вызывать их поражение. Таким образом, различные проявления вирулентности можно назвать факторами вирулентности или патогенности данного микроорганизма.Dosis letalis minima) -- минимальная смертельная доза, равная наименьшему количеству микробных клеток,
К факторам вирулентности относится способность бактери! прикрепляться к эпителиальным клеткам (адгезия), размножаться на их поверхности (колонизация), проникать в эти клетки (пенетрация) ил'и в подлежащие ткани (инвазия), противостоять факторам неспецифической и иммунной защиты организма (агрессия). Их можно рассматривать как различные функциональные проявления вирулентных свойств, характеризующие патогенные микроорганизмы.
29. Роль макроорганизма, физической и социальной среды в инфекционном процессе
ь Восприимчивость:
- состояние нервной системы
- состояние эндокринной системы
- возраст
- особенности питания
- наследственная предрасположенность
- факторы внешней среды естественный фон радиации
ь социальные факторы
условия быта санитарная обстановка материальные возможности
Одним из важных защитных факторов макро организма является "нормальная" микрофлора, не допускающая контакта патогенных микроорганизмов с рецепторами хозяина
30. Биологический метод исследования задачи, оценка этапы
Биологический (экспериментальный) метод исследования: - совокупность способов искусственного воспроизведения клинической картины инфекционных болезней или их синдромов на лабораторных животных. Этот метод преследует также ряд других целей:
Диагностика инфекционных болезней.
2. Выделение и идентификация чистой культуры.
3. Определение вирулентности.
4. Выделение и идентификация экзотоксинов.
5. Культивирование вирусов.
6. Получение иммунопрепаратов.
7. Проверка безвредности и эффективности лечебных препаратов (в т.ч. химиопрепаратов, иммунопрепаратов) и другие.
Этапы метода:
1. Забор материала (виды материала см. Бактериоскопический метод),
2. Обработка материала.
3. Выбор лабораторного животного, исходя из его чувствительности к предполагаемому возбудителю, его стандартизация и маркировка.
4. Заражение животных одним из способов (подкожный, внутрикожный, внутрибрюшинный, внутримышечный, интрацеребральный, внутривенный, в желудок, интраназальный и др.) в зависимости от тропизма микроба.
5. Регистрация признаков болезни зараженного животного или его смерти.
6. Прижизненный забор материала от животного и проведение бактериологического и серологического исследования, постановка аллергической пробы.
7. Вскрытие, изучение патологоанатомической и патоморфологической картины, протокольный посев органов павших или убитых животных (для выявления обсемененности и выделения чистой культуры). Приготовление мазков-отпечатков из внутренних органов.
8. Идентификация выделенной культуры.
9. Заключение по результатам исследования.
Оценка метода:
Метод высокочувствителен, может быть использован на ранних этапах
болезни, но не всегда доступен, дорог, длителен, небезопасен.
31. Химиотерапия и химиопрофилактика. Антибиотики определение классификация
Химиотерепия - лечение инфекционных и паразитарных заболеваний при помощи веществ естественного или синтетическго происхождения, которые оказывают специфический эффект на возбудителя.
Химиопрепараты - это вещества природного или синтетического происхождения, которые в неизменном или после превращения оказывают статическое или цидное действие на м/о во внутренней среде организма хозяина.
Химиопрофилактика - исполтзование химиопрепаратов.
Санация - применение препаратов у бактерионосителей с целью прекращения выделения и носительства патогенного или условнопатогенного возбудителя.
Антибиотики - это химиопрепараты биологического, полусинтетического или синтетического происхождения, которые в малых концентрациях вызывают торможение или гибель чувствительных к ним микробов и опухолевых клеток во внутренней среде животного организма.
Классификация АБ:
1. По спектру действия:
а) супеузкого спектра - на 1 вид
б) узкого - на группу бактерий 1-2 вида
в) широкого (на несколько видов)
г) суперширокого (+ гельминты, грибы и простейших)
2. По происхождению:
а) микробного происхождения (из бактерий - грамецидин, полимиксин; из грибов - пенициллин, из актиномицетов - стрептомицин)
б) из высших растений (фитонциды) - из семян редиса - рафанин, из чеснока
в) из животных организмов (лизоцим, эритрин)
г) синтетические и полусинтетические
3. По типу действия:
а) микробостатическое - когда имеет место угнетение жизнедеятельности, но не гибель м/о
б) микробоцидное действие - когда антибиотики убивают м/о
По химическому составу антибиотики подразделяют на несколько групп.
Бета-лактамные антибиотики, или бета-лактамы, -- азотсодержащие гетероциклические соединения с бета-лактамным кольцом К ним относится группа пенициллина, включающая природный антибиотик бензилпенициллин и полусинтетические пенициллины (мети-циллин, оксациллин, ампициллин, карбенициллин и др.), и группа цефалоспорина (цефалоридин, цефалексин, цефамандо.т, цефурсксим. кефзол, мандал, кефлор и др.).
Тетрациклин и его полусинтетические производные: окситетрациклин, хлортетрациклин, морфоциклин, метациклин, диоксициклин, вибромицин. Они состоят из четырех конденсированных бензольных колец с разными радикалами.
Аминогликозиды, к которым относятся группа стрептомицина (стрептомидина сульфат и его производные, состоящие из трех частей: сгрептидина, стрептозы, N-метилглюкозамина) и аминогликозидные антибиотики, содержащие дезоксистрептамин: неомицин, мономицин, канамицин, амикацин, пентамипин, гобрамицин и др.
Макролиды -- соединения, содержащие макроциклическое лактонное кольцо (эритромицин, олеандомицин).
Левомицетин, представляющий собой синтетическое вещество, идентичное природному антибиотику хлорамфениколу, в состав которого входит нитрофенил, дихлорацетамин и пропандиол
Рифамицины. к которым относятся природный антибиотик рифамицин и его полусинтетическое производное рифампицин. Они имеют своеобразную сложную химическую структуру, в которую входит макроциклическое кольцо.