Материал: Ответы к итоговой МБ №4 ООИ (КубГМУ Live)

Ферменты агрессии проявляют различное действие: катализа защищает бактерии от действия О2-зависимых микробицидных механизмов фагоцитов; β-лактамаза разрушает молекулы β-лактамовых антибиотиков; липазы облегчают адгезию и проникновение в ткани. Коагулаза, существующая в трех антигенных формах, вызывает свертывание сыворотки; сам фермент не взаимодействует с фибриногеном, а образует тромбиноподобное вещество, предположительно взаимодействующее с протромбином.

Выделяют четыре антигенных типа гемолитов, вызывающих полный гемолиз кровяных сред; золотистые стафилококки способны одновременно синтезировать несколько подобных продуктов.

α-гемолизин (α-токсин) наиболее часто выявляют у бактерий, выделенных из клинических образцов; не активен в отношении эритроцитов человека, но быстро лизирует эритроциты барана. При введении подопытным животным вызывает кожные некротические реакции и гибель животных после внутривенного введения.

β-гемолизин (сфингомиелиназа) оказывает умеренное действие на эритроциты человека; выявляют у 20 % изолятов. Проявляет выраженные свойства холодового гемолизина (максимальная активность проявляется при низких температурах).

γ-гемолизин — двухкомпонентный гемолизин с умеренной активностью в отношении эритроцитов человека; поскольку один из компонентов инактивируют содержащие серу полимеры, присутствующие в агаре, то эффект этого гемолизина на кровяных средах обычно не проявляется.

δ-гемолизин — агрегат низкомолекулярных соединений, проявляющих детергентные свойства; последние обусловливают цитотоксичность широкого спектра.

Среди токсинов наибольшее значение имеют: эксфолиатины А и В, обуславливающие развитие синдрома «ошпаренной кожи»; токсин синдрома токсического шока (TSST-1), ответственный за развитие специфического симптомокомплекса; δ-токсин (лейкоцидин), ингибируюший всасывание воды и активирующий образование цАМФ (что имеет значение при стафилококковых диареях), а так же оказывающий цитотоксическое действие на полиморфно-ядерные лейкоциты; энтеротоксины A -F , ответственные за развитие пищевых интоксикаций (энтеротоксины В и С также приводят к развитию синдрома токсического шока в случаях, не связанных с менструациями).

57. Методы микробиологической диагностики стафилококковой инфекции.

Условнопатогенный характер возбудителя, широкое распространение стафилококков в нормофлоре человека и в окружающей среде затрудня ют оценку этиологической значимости ста филококков, выделенных из патологическо-го материала, особенно

27

открытых полостей. Предположить стафилококковую этиологию заболевания позволяют выделение стафило кокка в чистой культуре, повторность выделе ния одного и того же фаговара, динамика спе цифических иммунологических показателей. Материал для исследования — гной, кровь, моча, мокрота, мазки со слизистой носа и зева, рвотные массы, испражнения и др., — выбирается в зависимости от клинической картины болезни.

Лабораторная диагностика включает бак териологический и серологический методы. Бактериоскопия мазков из исследуемого ма териала не проводится, так как в них ста филококки могут располагаться поодиночке, парами, тетрадами, иным образом, а поэтому их невозможно морфологически отличить от других грамположительных кокков. Исследуемый материал сеют на плотную элективную среду желточно-солевой агар, кровь предварительно засевают в сахарный бульон, а при появлении роста в бульоне де лают высев на желточно-солевой агар. У куль туры, выросшей на желточно-солевом агаре, определяют наличие пигмента, лецитовителлазы, морфологию клеток, наличие каталазы, ферментацию 1 % глюкозы в полужидкой сре де Гисса под вазелиновым маслом, наличие плазмокоагулазы и ДНКазы. У штаммов S. aureus, выделенных при пи щевой стафилококковой интоксикации, оп ределяют наличие энтеротоксинов в биоло гических и иммунологических тестах. Для выявления продукции энтеротоксина ставят биопробу на новорожденных котятах либо определяют токсигенность выделенных куль тур реакцией преципитации в геле. Культуры стафилококка, выделенные от людей в эпидемических очагах стафилокок ковой инфекции, фаготипируют с помощью 22 фагов международного набора для прове дения эпидемического маркирования с целью выявления источника инфекции. Чувствительность стафилококков к анти биотикам определяют методом диффузии в агаре с помощью стандартных дисков или методом серийных разведений. Предварительные результаты по идентифика ции стафилококков можно получить через 1-2 суток. Схема бактериологического исследова ния на стафилококки представлена в табл. 16.3, Серологический метод диагностики стафило кокковой инфекции применяют главным обра зом в случаях хронической инфекции, особенно если больной получал массивную предшеству ющую антибиотикотерапию и вьщелить возбу дителя не удается. Наиболее часто с этой целью определяют титр анти-а- токсина в сыворотке крови больных реакцией торможения темо.тиза по Выгодчикову. В ряде случаев определяют титр АТ к риботейхоевой кислоте — одному из компонентов клеточной стенки или проводя] реакцию аутоагглютинации. Титрование анти тел осуществляют в динамике.

58. Выделение чистой культуры стафилококков.

Бактериологический метод - выделение чистой культуры возбудителей и их идентификация.

Стафилококки относятся к числу весьма распространенных микроорганизмов. Они обнаруживаются и у здорового человека. Поэтому для диагностики заболевания,

28

установления его стафилококковой природы очень важно доказать патогенность выделенных бактерий. Решение диагностической задачи при этом тесно связано с выяснением вопросов эпидемиологии, лечения и профилактики данной инфекции. На этом основании бактериологический метод складывается из нескольких этапов и направлений.

Диагностика заболевания - выделение чистой культуры стафилококка и установление его вирулентности.

Выявление источников инфекции и возможных путей ее распространения - фаготипирование стафилококков, выделенных из разных, но связанных между собою источников.

Выбор наиболее эффективного способа лечения - определение чувствительности культур к антибиотикам и лечебному бактериофагу, в частности поливалентному пиофагу, моновалентному стафилофагу.

59. Для чего и как проводят фаготипирование?

В различных местностях циркулируют разные фаготипы стафилококков. Поэтому определение их у стафилококковых культур имеет большое значение для выяснения возможного источника инфекции и путей ее распространения.

Среди плазмокоагулирующих стафилококков по номенклатуре Международного Комитета по фаготипированию различают 22 типа фагов (таб.1):

Определение лизируемости стафилококков названными бактериофагами выполняется следующим образом.

ПОДГОТОВКА КУЛЬТУР К ФАГОТИПИРОВАНИЮ Определение плазмокоагулирующей способности культур (бактериофагами цитируется только коагулазоположительные штаммы).

Подготовка культуры: носер в МПБ с pH -7, 2-7, 4, выращивание при +37 °C 18-24 часа. На следующий день - пересев в свежий МПБ с тем же pH, подращивание культуры в термостате в течение 3 часов.

ФАГОТИПИРОВАНИЕ Чашки со свежеприготовленным 1,25% МПА подсушить в термостате в течение 1-1,5 часов.

Разделить дно чашки карандашом по стеклу на 23-24 квадрата, в каждом из которых подписать типы испытуемых бактериофагов.

Засеять чашку 0,2 мл 3-4 часовой культуры выделенного стафилококка и равномерно распределить шпателем по поверхности среды.

Подсушить посев в термостате при +37 °C в течение 30-45 минут.

В каждый квадрат петлей нанести каплю соответствующего бактериофага в десятикратном разведении (1:10), произведенном в бульоне Хоттингерa.

Каплю фага подсушить, чашки поставить в термостат на 18-20 часов в перевернутом виде.

29

Учет результатов и определение фаготипа стафилококка производится по наличию стерильного пятна на месте лизиса культуры.

Положительным считается результат, степень лизиса при котором определяют не менее как на 2 плюса. В этом случае зона лизиса составляет около 50% площади в месте нанесения бактериофага.

Во многих случаях культуры стафилококков лизируются не одним, а несколькими фагами, образуя своеобразую фагомозаику из стерильных пятен. Стафилококки, обнаруживающие одну и ту же мозаику или отличающиеся на 1 фаг, считаются идентичными.

60. Какие экзотоксины продуцируют стафилококки?

Среди токсинов наибольшее значение имеют: эксфолиатины А и В, обуславливающие развитие синдрома «ошпаренной кожи»; токсин синдрома токсического шока (TSST-1), ответственный за развитие специфического симптомокомплекса; δ-токсин (лейкоцидин), ингибируюший всасывание воды и активирующий образование цАМФ (что имеет значение при стафилококковых диареях), а так же оказывающий цитотоксическое действие на полиморфно-ядерные лейкоциты; энтеротоксины A -F , ответственные за развитие пищевых интоксикаций (энтеротоксины В и С также приводят к развитию синдрома токсического шока в случаях, не связанных с менструациями).

61. Ферменты защиты и агрессии стафилококков.

Разнообразные ферменты, играющие роль факторов «агрессии и защиты»: плазмокоагулаза (главный фактор патогенности), гиалуронидаза, фибринолизин, ДНКаза, лизоцимоподобный фермент, лецитиназа, фосфатаза, протеиназа и т. д.

62. Факторы патогенности стафилококков, влияющие на фагоцитоз.

Факторы, угнетающие фагоцитоз – их наличие может проявляться в угнетении хемотаксиса, защите клеток от поглощения фагоцитами, в обеспечении стафилококкам возможности размножаться в фагоцитах и блокировке «окислительного взрыва». Фагоцитоз угнетают :

-капсула -белок А -пептидогликан

-тейхоевые кислоты -токсины.

Кроме того, стафилококки индуцируют синтез некоторыми клетками организма (например спленоцитами) супрессоров фагоцитарной активности.

30