Материал: Ответы к итоговой МБ №4 ООИ (КубГМУ Live)

63. Как определяют гиалуронидазную активность?

Гиалуронидазную активность определяют, прибавляя к 0,5 мл бульонной культуры стафилококка 0,5 мл препарата гиалуроновой кислоты с пупочного канатика. Смесь инкубируют 30 мин при 37 ° С и 10 мин при 4 ° С. В пробирку добавляют 4 капли 15% уксусной кислоты, встряхивают и через 5 мин делают учет результатов. Отсутствие сгустка свидетельствует о наличии гиалуронидазы, наличие сгустка - о ее отсутствии.

Для изготовления гиалуроновой кислоты свежую пуповину новорожденных измельчают, заливают двойным количеством дистиллированной воды. Смесь выдерживают 24 ч в холодильнике, затем нагревают и кипятят до свертывания кусочков пуповины. Полученный гиалуронат фильтруют через ватно-марлевый фильтр и проверяют на образование сгустка.

64. Мембраноповреждающие токсины , разновидности , механизмы действия.

Мембраноповреждающие токсины могут повреждать эритроциты (гемолизины), лейкоциты, макрофаги, тромбоциты и др. Выделяют несколько типов, отличающихся по антигенной структуре, спектру лизируемых клеток, скорости действия. мембраноповреждающие токсины — а, р, 8 и у. Ранее их описывали как гемолизины, некротоксины, лейкоцидины, летальные токсины, т. е. по характеру их действия: гемолиз эритроцитов, некроз при внутрикожном введении кролику, разрушение лейкоцитов, смерть кролика при внутривенном введении. Однако оказалось, что такой эффект вызывает один и тот же фактор — мембрано-повреждающий токсин. Он обладает цитолитическим действием в отношении различных типов клеток, которое проявляется следующим образом. Молекулы этого токсина сначала связываются с неизвестными пока рецепторами мембраны клетки-мишени или неспецифически абсорбируются липидами, содержащимися в мембране, а затем формируют из 7 молекул грибовидный гептамер, состоящий из 3 доменов. Домены, формирующие «шляпку» и «край», расположены на внешней поверхности мембран, а домен «ножки» служит трансмембранным каналом-порой. Через нее и происходит вход и выход небольших молекул и ионов, что ведет к набуханию и гибели клеток, имеющих ядро, и осмотическому лизису эритроцитов.

Обнаружено несколько типов мембраноповреждающих (порообразующих) токсинов: а-, р-, 5- и у-гемолизины (а-, р-, 8- и у-токсины). Они различаются по ряду свойств. Гемолизин а чаще обнаруживается у стафилококков, выделенных от человека, он лизирует эритроциты человека, кроликов и баранов. Летальный эффект у кроликов вызывает при внутривенном введении через 3—5 мин. Гемолизин р обнаруживают чаще у стафилококков животного происхождения, он лизирует человеческие и бараньи эритроциты (лучше при более низкой температуре). Гемолизин 5 лизирует эритроциты человека и многих видов животных. Летальное действие на кролика при внутривенном

31

введении вызывает через 16—24—48 ч. Очень часто у стафилококков обнаруживаются а- и 8-токсины одновременно;

65. Свойства стафилококковых энтеротоксинов.

Они характеризуются антигенной специфичностью, термостабильностью, устойчивостью к действию формалина и пищеварительных ферментов. Устойчивы при диапозоне pH от 4.5 до 10.0. Энтеротоксины низкомолекулярные белки с м.м. от 26 до 34 кД со свойствами суперантиенов 66.(нашла с интернета )

Плазмокоагулазу выявляют путем внесения выделенной культуры в пробирку с цитратной плазмы кролика. Ее можно приготовить в любой лаборатории. У кролика из сердца берут 8 мл крови, вносят в пробирку с 2 мл 5% лимонно-кислого натрия и ставят в холодильник. После полной осадки форменных элементов плазму отсасывают в стерильную пробирку. Она может храниться в холодильнике 8-10 дней. Перед использованием ее разводят 1:5 (1 мл плазмы и 4 мл изотонического раствора хлорида натрия) и разливают в аглютинацийни стерильные пробирки по 0,5 мл. Полную петлю культуры стафилококков эмульгируют в плазме и помещают в термостат на 3 часа, затем оставляют при комнатной температуре на 18-20 часов. Предварительный учет свертывания плазмы проводят через 3 ч, окончательный - на второй день. Очень удобно пользоваться стандартной сухой цитратной плазмы кролика. Перед употреблением в ампулу добавляют 1 мл изотонического раствора хлорида натрия и после полного растворения ее разводят 1:5. Плазма человека малопригодна для постановки реакции плазмокоагуляции, поскольку в ней могут быть консерванты, лекарственные вещества, антитела, которые могут подавлять образование плазмокоагулаза.

Если выделена культура вызывает гемолиз, коагулирует плазму и дает положительную лецитовителазну реакцию, уже на третий день можно выдать результат на наличие

S. aureus. Если культура обладает только плазмокоагулаза или только вителазну активность, для окончательного установления вида стафилококка необходимо определить дополнительные критерии патогенности: ферментацию маннита в анаэробных условиях, ДНК-азную активность, продукцию лизоцима, фосфатазы, а также определить чувствительность к новобиоцин.

67. Методы определения чувствительности к антибиотикам.

Чаще всего для определения чувствительности бактерий к антибиотикам используются два метода: метод дискови метод серийных разведений.

1. Метод дисков. Бумажные диски, пропитанные определенными антибиотиками, помещают на газон исследуемой бактериальной культуры в чашке Петри. Посевы инкубируют в течение 16-24 часов, после чего учитывают результаты опыта по образованию зон задерки роста бактерий.

32

По диаметру зон задержки роста ориентировачно судят о степени чувствительности бакторий к антибиотикам. Зона задержки до 15 мм указывает на слабую, до 25 мм – на среднюю и свыше 25мм – на высокую чувствительность. Более точные результаты получают при использовании метода серийных разведений.

2. Метод серийных разведений. Этот метод позволяет определить минимальную задерживающую концентрацию антибиотика для данного микроорганизма (МЗК) как на жидких, так и на плотных питательных средах.

МПБ разливают по 2мл в серрию пробирок. Готовят основной раствор антибиотика, ддля чего берут навеску антибиотика и растворяют в дистиллированной воде из расчета 1мг на мл растворителя.

Левомицетин предварительно растворяют в 96* этиловом спирте из расчета 0,25мл спирта на 1мг антибиотика; после полного растворения добавляют такое количество дистиллированной воды, чтобы раствор содежрал в 1мл 1 мгантибиотика.

Тетрациклин и окситетрациклин растворяют в сантинормальном растворе соляной кислоты из расчета 1мл на 1 мг антибиотика Этиломицин сначало растворяют в чистом этиловом спирте из расчета 1 мл на 10мг

эритромицина. После приготовления добавляют такое количество дистилированной воды, чтобы получить раствор, содержащий в 1мл1мг пнтибиотика Эритромицин сначало растворяют в чистом этилом спирте из расчета 1 мл 1 мг антибиотика

Исходный материал антибиотика в количестве 2млвносят в первую пробирку с МПБ,перемещают и получают определенную его концентрацию.

Из первой пробирки 2мл разведенного антибиотика переносят во вторуу пробирку и после перешивания переносят 2мл в третью проьирку и т.д. до предпоследней, откуда 2мл выливают. Последняя пробирка является контролем, в ней нет антибиотика и она свидетельствует о пригодности среды для роста культуры.

После разведения антибиотика во все пробирки вносят по 0,1мл испытуемной бульонной культуры.Для этого используют 3-4 –часовые или 18-часовые культуры, разведенные МПБ в 50 раз. Пробирки помещают в термостат на 12-18 часов, но предварительно результаты можно учитывать через 6-8 часов.

По истечении необходимого срока инкубации определяют максимальное разведение антибиотика, которое еще подавляет рост культуры. Концентрация антибиотика в последней пробирке с видимой задержкой роста и представляет собой минимальную задерживающую концентрацию антибиотика (МЗК).

Штамм считается чувствительным к антибиотикам, если МЗК препарата для данного штамма соответствует концентрации этого препарата, создаваемой в организме.

33

68. Классификация стрептококков по росту на кровяном агаре.

Существует ряд классификаций стрептококков. Наиболее проста классификация, основанная на особенностях роста этих микроорганизмов на агаре с кровью барана (по отношению к эритроцитам).

Бета — гемолитические стрептококки - при росте на кровяном агаре образуют вокруг колонии четкую зону гемолиза, альфа — гемолитические — вокруг колонии зеленоватое окрашивание и частичный

гемолиз (позеленени обусловленно превращение окси- в метгемоглобин), Альфа1 — гемолитические стрептококки по сравнению с ветта-гемолитическими стрептококками образуют менее выраженную и мутноватую зону гемолиза;

Альфа и альфа1-стрептококки называют S.viridans (зеленящими).

гамма- негемолитические —не вызывают гемолиза на плотной питательной среде.

69. Культуральные свойства стрептококков.

Стрептококки плохо растут на простых питательных средах. Обычно используют среды с кровью или сывороткой крови. Чаще применяют сахарный бульон и кровяной агар, содержащий 5% дефибринированной крови.Среда не должна содержать восстанавливающихся сахаров, так как они угнетают гемолиз. На бульоне рост придонно

— пристеночный в виде крошковатого осадка, бульон чаще прозрачен. Оптимум температуры +37о С, рН — 7,2-7,6. На плотных средах стрептококки серогруппы А образуют колонии трех типов:

-мукоидные — крупные, блестящие, напоминают капельку воды, но не имеют вязкую консистенцию, характерны для свежевыделенных вирулентных штаммов, имеющих капсулу;

-шероховатые — более крупные, чем мукоидные, плоские, с неровной поверхностью и фестончатыми краями — характерны для вирулентных штаммов, имеющих М- антигены;

-гладкие — мене крупные колонии с ровными краями, образуют невирулентные штаммы.

70. Выделение чистой культуры пиогенных стрептококков.

Посев материала на питательные среды и выделение чистой культуры: для первичной изоляции стрептококков из клинического материала пользуются преимущественно кровяным агаром, что позволяет дифференцировать изоляты по гемолитической активности, реже – сывороточным, сахарным агарами и другими универсальными средами. При исследовании проб, сильно контаминированных микроорганизмами, применяют селективные среды, а при подозрении на инфекцию стрептококка группы В

34

материал перед посевом на кровяной агар инокулируют в специальную обогатительную среду (она может служить транспортной). Бактериоскопия мазков культур: подтверждает принадлежность изолятов к роду Streptococcus и в ряде случаев служит основой для их первичной видовой идентификации.

71. Какие заболевания вызывает стрептококки.

Болезни, вызываемые стрептококками, распределены по 11 классам, основные группы этих заболеваний таковы:

1-различные нагноительные процессыабсцессы, флегмоны, отиты, перитониты, плевриты, остеомиелиты и др, 2-рожистые воспаленираневая инфекция(воспаление лимфотических сосудов кожи и подкожной клетчатки)

3-гнойные осложнения ран(особенно в военное время)- абсцкссы, флегмоны, сепсис и др. 4-ангины- острые и хронические 5-сепсисы:острый сепсис(острый эндокардит); хронический сепсис(хронический

эндокардит); послеродовые(пуэрпиральный сепсис) 6- равматизм

7- пневмонии, менингиты, ползучая язва роговицы(пневмококк) 8-скарлатина

9-кариес зубов - возбудителем его чаще всего является S.mutans.

Важную роль в патологии человека играют и стрептококки серогруппы D и B.Стрептококки серогрупы D (энтерококки) презнаны возбудителями раневых инфекций, различных хирургических заболеваний, гнойных осдложнений у беременных, родильных и гинекологических больниц, инфецируют почки, мочевой пузырь, вызывают сепсис, эндокардит, пневмонии, пищевые токсикоинфекции. Стрептококки серогруппы В часто вызывают заболевания новорожденных – инфекции дыхателых путей, менингит, септицемию.

72. Серологическая классификация стрептококков.

Большое практическое значение получила серологическая классификация. Стрептококки имеют сложное антигенное строение: у них имеется общий для всего рода антиген и различные другие антигены. Среди них особое значение для классификации имеют группоспецифические полисахаридные антигены, локализованные в клеточной стенке. По этим антигена по предложению Р. Лансфельд стрептококк разделены на серологические группы, обозначаемые буквами A, B, C, D, F, G и тд. Сейчас известно 20 серологических групп стрептококков (от A до V). Патогенные для человека стрептококки относятся к группе А, В, D, реже – к С, F и G. Групповые полисахаридные антигены определяются с помощью соответствующих антисывороток в реакции преципитации.

35