Условия хроматографирования:
колонка длиной 0,125 м и внутренним диаметром 4 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм;
подвижная фаза. Подвижная фаза А: кислота фосфорная Р - метанол Р - вода Р (0,5:35:65,об/об/об); Подвижная фаза В: кислота фосфорная Р - метанол Р - вода Р (0,5:50:50,об/об/об);
скорость подвижной фазы: 0,8 мл/мин;
спектрофотометрический детектор, длина волны 288 нм;
объем вводимой пробы: 10 мкл.
Время удерживания: силибинин В - около 30 мин; при необходимости изменяют временную программу градиента.
разрешение: не менее 1,8 между пиками силибинина А и силибинина В;
хроматограмма должна соответствовать хроматограмме, прилагаемой к ФСО сухого экстракта расторопши стандартизованного. Определяют площади пиков, соответствующих силикристину, силидианину, силибинину А, силибинину В, изосилибинину А и изосилибинину В.
Содержание силимарина в пересчете на силибинин в процентах рассчитывают
по формуле
(A1+ A2+ A3+ A4+ A5+ A6)•m1•P•1000/( A7+ A8) •m2•(100-W)
где: A1, A2, A3, A4, A5, A6 - площади пиков соответствующих силикристину, силидианину, силибинину А, силибинину В, изосилибинину А и изосилибинину В соответственно на хроматограмме испытуемого раствора;
A7, A8 - площади пиков соответствующих
силибинину А и силибинину В соответственно на хроматограмме раствора
сравнения;- масса навески ФСО сухого экстракта расторопши стандартизованного,
взятого для приготовления раствора сравнения, г;- масса навески испытуемого
сырья, г;- суммарное содержание силибинина А и силибинина В в ФСО сухого
экстракта расторопши стандартизованного, %.- потеря в массе при высушивании
испытуемого сырья, %.[5]
7.2 Прямая спектрофотометрия. Определение суммы
флаволигнанов в пересчете на силибинин
Прямая спектрофотометрия - 288+-2 нм(максимум в поглощении).
Наилучший растворитель - 96% спирт (так как при более низких концентрациях в экстрактах появляется муть в связи с нерастворимостью флаволигнанов в воде), наилучшая степень измельченности: 0.50 - 0.75 мм (наилучшие результаты), оптимальное время экстракции - 60 минут (4.48% силимарин, оптическая плотность - 1.9888).
Методика:
. Измельчить до размеров прохождения сита диаметром 1 мм.
. 0.5000 - в колбу с притертой пробкой 100 мл, + 25.0 мл спирта этилового 96%.
. Присоединить к обратному холодильнику и нагревать на кипящей бане 60 минут.
. Охладить, профильтровать через бумажный фильтр в мерную колбу на 25,0 мл, довести спиртом до метки.
.1.0 мл полученного извлечения - в мерную колбу 50.0 мл, довести до метки 96% спиртом и измерить оптическую плотность при 289 нм (максимум при экстракции спиртом 96%).
Формула для расчёта: A • 1250/m • 444, в которой 444 - удельный показатель поглощения силимарина; A - оптическая плотность испытуемого раствора; m - масса навески испытуемого сырья, г.[16]
Многие патологические состояния - результат воздействия свободных радикалов, образующихся в организме в ходе метаболизма: монооксид азота, анион-радикал кислорода, пероксид водорода и др. Образование радикалов можно разделить на две группы по значимости: физиологически значимые (выполняют конкретную физиологическую функцию) и физиологически незначимые пути образования (патология).
Печень наиболее подвержена действиям свободных радикалов, так как является органом-защитником, фильтрующим через себя кровь, отходящую от кишечника.
Гидроксильные радикалы атакуют ненасыщенные жирные кислоты фосфолипидов мембран. Происходит перекисное окисление липидов - и как следствие повреждение гепатоцитов.
Печень обладает антиоксидантной активностью. Глутатионпероксидаза и каталаза обеспечивают разрушение перекиси водорода, супероксиддисмутаза обеспечивает интоксикацию супероксидного радикала и др. Но в патологических состояниях печени требуются помощь. Тогда, для поддержания антиоксидантной активности печени, принимают лекарственные средства силимарина, которое включает флаволигнаны: силиданин, силикристин и силибинин. [6]
Исследовали различные лекарственные средства и изучили их антиоксидантную активность: Легалон, Карсил, Лепротек, БАД «Расторопша экстракт», а также сравнили их антиоксидантную активность с активностью витамина Е (водорастворимый аналог - тролокс), оценили вклад в антиоксидантное действие всех флаволигнанов.[2]
Результаты исследования показали, что силимарин «Легалон» обладает наибольшей антиоксидантной активностью:- это полуэффективная ингибирующая концентрация антоксиданта. Чем меньше значение - тем эффективнее антиоксидант. Наилучшим антиоксидантом исследование объявило «Легалон», его величина в 1.24 раза меньше, чем у тролокса. На втором месте «Карсил». Силимарин из БАД «Расторопша» обладает наименьшей антиоксидантной активностью. Стоит отметить, что различия в антиоксидантной активности ЛС могут быть связаны с процентным соотношением флаволигнанов, входящих в состав лекарственного сырья. В ЛС «Легалон» содержание силиданина было максимальным (16.71%). Так как у БАД «Расторопша», содержание силибинина было максимальным (60,27%) и он занял последнее место по антиоксидантной активности, можно сделать вывод: силибинин обладает наименьшей антиоксидантной активностью по сравнению с другими флаволигнанами.[18]
Плоды Расторопши пятнистой используются для производства жирного масла и экстарктов. Эффективность и безопасность лекарственных средств в значительной степени зависит от соотношения флаволигнанов, входящих в их состав. Отличия в составе приводят к различной биоэквивалентности и фармакокинетике, которые определяют клинические эффекты при лечении гепатопатий различной этиологии. Крайне важно при выборе сырья для производства лекарств учитывать не только общее содержание биологически активных веществ, но и количественное соотношение отдельных флаволигнанов.
Лекарственные средства Расторопши оказывают гепатопротекторное действие поэтому большинство из них используется при токсических повреждениях печени различной этиологии, алкоголизме, отравлениях, циррозе печени, дистрофиях печени, а так же при нарушении обмена веществ. Они также оказывают желчегонное, противовспалительное, антиоксидантное действие и др.
В гомеопатии лекарственные средства расторопши пятнистой применяют при заболеваниях печени, желчевыводящих путей, селезенки, желчнокаменной болезни, геморрое, колитах, заболеваниях сердечно-сосудистой системы, органов дыхания, варикозной болезни нижних конечностей, отравлениях бледной поганкой, а так же при бронхитах и бронхиальной астме.
Так же широко используется жирное масло в состав которого входят жирное масло, эфирное масло, хромоны, смолы, слизь, биогенные амины, флаволигнаны. Используется в профилактических и лечебных целях в научной и народной медицине, а также в косметологии, парфюмерии и кулинарии. В медицине при диетичесоком питании и для лечения различных заболеваний печени, желчевыводящих путей, геморрое, заболеваниях ЖКТ, мочеполовой системы.
Перечень лекарственных средств, в состав которых входит лекарственное растительное сырье Расторопши пятнистой.
В аллопатии:
. Расторопши пятнистой плодов экстракт - Extractum fructuum Sylibi mariani (род. Extracti fructuum Sylibi mariani)
Показания к применению: токсические повреждения печени (алкоголизм, интоксикация галогенсодержащими углеводородами, соединениями тяжелых металлов, лекарственные поражения печени) и их профилактика. Хронический гепатит, цирроз печени (в составе комплексной терапии). Состояния после инфекционного и токсического гепатитов, дистрофия и жировая инфильтрация печени. Коррекция нарушений липидного обмена.
. Легалон® («Мадаус АГ», Германия), капсулы (0,36 г) содержит 140 мг силимарина.
Показания к применению: поражения печени, алкоголизм, интоксикация галогенсодержащими углеводородами, соединениями тяжелых металлов, хронические воспалительные заболевания печени, цирроз печени (поддерживающая терапия).
. Карсил®. Карсил® Форте (Sopharma, Болгария). Таблетки (0,45 г) содержит 35 мг силимарина.
Показания к применению: токсическое поражение печени; состояния после перенесенного острого гепатита; хронический гепатит невирусной этиологии; цирроз печени; профилактика печеночных поражений при продолжительном приеме лекарств, алкоголя, хронической интоксикации (в т.ч. профессиональной).
. Силимарол (Herbapol S.A., Польша).
Драже (0,35 г) содержится 70 мг силимарина.
. Силибор (Здоровье ФК, г. Харьков, Украина) таблетки, покрытые оболочкой по 0,04 г
. Силимар® (ЗАО «Фармцентр ВИЛАР», Россия) Таблетки 0,1 г
7. Силимар® экстракт сухой (Silimar extract siccum).
8. Силегон® (Silegon®) В 1 драже 70 мг силимарина и не менее 30 мг силибинина
. Фосфонциале® (Гепабене) (ЗАО «Канонфарма продакшн», Россия) Капсулы: липоил С100-200 мг, силимар-70 мг (силибина-50 мг).[13]
В гомеопатии:
. «Расторопша-форте» гранулы гомеопатические по 10,0 г.
Показания к применению: Острые и хронические заболевания печени, желчного пузыря, наследственная предрасположенность к ним. Комплексно лечат псориаз, венозный застой, варикоз, варикозные язвы, коксартроз, пневмонию.
Способ применения: По 7 гранул под язык 2 - 3 раза в день за 30 минут до еды. При острых состояниях: По 7 гранул через каждые 15 минут в течение не более 2 часов.
. «Расторопша пятнистая». Гранулы гомеопатические, разведение Д3
Показания к применению: заболевания печени, желчевыводящих путей, селезенки, желчнокаменной болезни, геморрое, колитах, заболеваниях сердечно-сосудистой системы, органов дыхания.
Противопоказания: гиперчувствительность.
. «Кардуус марианус» («Carduus marianus»).
Применяется при болезнях печени. Позволяет ликвидировать последствия грибных отравлений Бледной поганкой. При желчнокаменной болезни и желтухе. Назначается в случае левосторонней невралгии нижней челюсти и при неврозе. Излечивает варикозную болезнь (любых органов и систем), а также варикозную язву голени. Помогает при геморрое. На необходимость приема данного лекарственного средства указывает зуд в заднем проходе перед наступлением полночи, который усиливается в постели. Гомеопатическое средство используется при наличии у больного одновременно бронхиальной астмы, геморроя и болезней печени. Это сочетание типично для Carduus marianus.
Биологически-активные добавки (БАД):
. Гептолексин. Капсулы по 330 мг
Рекомендуется при токсических поражениях печени (алкоголизм, интоксикации различной этиологии, избыточный прием алкоголя, лекарственные поражения печени, (в т.ч. при химио- и/или лучевой терапии) и их профилактике; при тяжелых физических нагрузках; в геронтологической практике
. Живитель-НФП (силибинин+комплекс витаминов);
Капсулы 0,45. Таблетки 0,35
. Неовитэль - биоактивный комплекс с расторопшей. Капсулы 200мг (400 мг).[13]
Помимо гепатопротекторных и противоопухолевых свойств флаволигнанов, важной также является недавно открытая особенность подавления ангиогенеза. Но Биодоступность растительных флаволинанов невелика из-за их ограниченной растворимости. Поэтому был разработан нанопрепарат на основе силибина в составе липосомных или полимерных наночастиц, который обладает значительно более высокой гепатозащитной и противоопухолевой активностью по сравнению со свободным флаволигнаном, что связано с увеличением растворимости и биодоступности лекарственного средства и его избирательным накоплением в печени и опухолевой ткани. Данное лекарственное средство может применяться при терапии патологий печени и опухолей различного происхождения.[12]
Многие лекарственные средства синтетического происхождения для коррекции патологических состояний печени имеют ряд побочных эффектов.[6]
Широкое применение в клинической практике получило лекарственное средство на основе плодов Расторопши пятнистой - силимарин. Его используют в качестве основное или вспомогательное ЛС. Примечательным является то, что силимарин воздействуют на причину патологического процесса в печени, а не просто ликвидирует симптомы заболевания. Лекарственные средства силимарина относительно дешевы, хорошо переносимы и у них слабо выражены побочные эффекты. Согласно фармакологическим исследованиям после однократного приема внутрь силимарин легко всасывается, достигая максимальной концентрации в крови примерно через 30-40 минут. Большая концентрация его находится в цитоплазме гепатоцитов. Накапливается в печени. Его можно применять в сочетании с другими лекарственными средствами. Выделяется с желчью, в меньшей степени с мочой. В кишечнике расщепляется микрофлорой. Силимарин реадсорбируется и попадает в печень, проходя так называемый кишечно-печеночный путь. И после этого он снова проявляет активность. Токсичность при применении даже очень больших доз - 1500 мг в сутки - отсутствует. Иногда в клинических испытаниях наблюдались слабовыраженные аллергические реакции. Однако они встречалось настолько редко, что их посчитали весьма незначительным дополнением к основному действию и признали абсолютно безопасным само лекарственное средство. Силимарин принимают до 30-40% пациентов с заболеваниями печени. Его состав, а точнее процентное соотношение флаволигнанов напрямую зависит от географического места произрастания сырья, заготовки, хранения, методов очистки.[9]
Силимарин препятствует попаданию токсинов в клетки печени, так как обладает мембраностабилизирующим действием.[14]
Проанализировав содержание одной из научных статей, я выяснила, что в условиях экспериментального повреждения печени лекарственное средство силимарин вместе с фосфатидилхолином восстановливает трансмембранный потенциала и предотвращает гибель гепатоцитов. А также дегидросилибинин обладает значительно более мощным антиоксидантным действием. Он более липофилен, следовательно обладает большим сродством к мембранам гепатоцитов.
Противовоспалительное и противоаллергическое действие силимарина связано со способностью угнетать липоксигеназы (подавляется образование лейкотриенов, торможению миграции нейтрофильных гранулоцитов, подавление высвобождения гистамина из базофильных гранулоцитов). Антифибротический эффект силимарина - способность тормозить активацию звездчатых клеток печени, снижать их пролиферацию и трансформацию в фибробласты.[8]
Также силимарин стимулирует регенерацию клеток печени, путем усиления синтеза рибосомальной РНК и стимуляции образования зрелых рибосом.
Силимарин, по мнению специалистов, может быть использован как вспомогательное вещество для лечения алкогольной болезни печени.[10]
Существуют исследования применения силимарина при остром вирусном гепатите. Больные, принимающие по 140 мг 3 раза в сутки, быстрее справлялись с симптоматикой заболевания. То есть он потенциально терапевтически эффективен при лечении данного заболевания[9].
При хроническом гепатите силимарин применяется только у пациентов, не отвечающих на стандартную противовирусную терапию.[10]
У пациентов с вирусом гепатита С, принимающих силимарин, выявлена значимо более низкая частота возникновения цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы. Стоит отметить, что он не влияет на репликацию вируса, однако способен ингибировать звенья воспалительного и цитотоксического процессов.[10]
Сделан выбор эталонного стандартизированного силимарина - Легалон фирмы Madus.[7]
Стоит вопрос о применении силимарина, при лечении таких заболеваний, как болезнь Альцгеймера, болезни сердца и почек, талассемия, сахарный диабет, опухоли разной локализации.[14]
Влияние силимарина и его комбинаций с янтарной кислотой на биоэнергетику головного мозга при экспериментальном ингибировании бета-окисления жирных кислот.
Силимарин увеличивает дыхательную активность в митохондриях головного мозга, тормозит перекисное окисление липидов. Янтарная кислота препятствует нарушению метаболических путей цикла Кребса, проявляет антиоксидантные свойства, обеспечивает максимальную энергизацию дыхательной цепи, восстанавливает пиридиндинуклиотиды в митохондриях.
Предположили, что ЯК в сочетании с силимарином будут восстанавливать метаболические процессы и в мозге (из-за поступления с кровью токсических веществ, которые проходят черед печеночный барьер вследствие повреждения печени). Поставили эксперимент на 70 белых крысах-самцах. В течение семи дней бедные животные получали инъекции 4-пентеноевой кислоты в брюшную полость. С восьмого дня им на протяжении двух недель вводили в желудок силимарин и янтарную кислоту вместе с однопроцентной крахмальной слизью. Декапитировали под легким наркозом через 12 часов после последнего применения ЛС. Состояние митохондрий головного мозга исследовали полярографически с помощью закрытого электрода Кларка лабораторного изготовления по скорости потребления кислорода в различных метаболических состояниях по Чансу.