Материал: Литусов Н.В. Частная вирусология

91

аэрозоля. Чем мельче величина капель, тем глубже проникает вирус. В реснитчатых и бокаловидных клетках слизистой оболочки верхних дыхательных путей происходит первичная репродукция вируса. Инфицированные эпителиальные клетки вырабатывают интерферон, который обладает противовирусным действием. В результате этого развивается воспаление, сопровождающееся отеком тканей и десквамацией эпителиальных клеток. Через поврежденный эпителий вирус гриппа проникает в кровоток и вызывает вирусемию. При вирусемии повреждается эндотелий капилляров, повышается проницаемость сосудов и серозных оболочек, в

результате чего развиваются геморрагии, нарушается микроциркуляция крови.

Повреждение эпителия можетПатогенезприводить к развитгриппаю бактериальных осложнений. Схематически патогенез гриппа представлен на рисунке 94.

Рисунок 94 – Патогенез гриппа.

Клиника гриппа. Инкубационный период при гриппе составляет 1-2 дня. Клинические симптомы заболевания сохраняются в течение 3-7 дней. Реконвалесценция продолжается в течение 7-10 дней. При гриппе типа А начало болезни острое, у больного обычно наблюдается катар верхних дыхательных путей (“саднящий” сухой кашель, ринит), интоксикация (высокая температура с ознобом, суставные и мышечные боли, головная боль).

Часто при гриппе развивается геморрагический синдром, проявляющийся кровоизлияниями в кожу, серозные и слизистые оболочки и внутренние органы. При этом может развиваться геморрагическая пневмония и отек легких, приводящие к летальному исходу. У детей возможен абдоминальный синдром (боли в животе, тошнота, рвота, диарея). Основные симптомы гриппа представлены на рисунке 95.

92

Рисунок 95 – Симптомы гриппа.

Грипп В обычно протекает легче, чем грипп А и сопровождается такими симптомами как конъюнктивит, боль в глазах, фотофобия. Грипп, вызванный вирусами типа С, протекает также легко.

Иммунитет. После заболевания развивается иммунитет, обусловленный как гуморальными, так и клеточными факторами. Вируснейтрализующие антитела появляются через 7-8 дней после заболевания, их уровень достигает максимального значения через 2-3 недели. Однако иммунитет при гриппе обладает высокой специфичностью. Антитела при гриппе являются не только типоили подтипоспецифическими, но и штаммоспецифическими. Титр антител сохраняется на высоком уровне в течение месяца, а затем постепенно снижается.

Факторами клеточного звена иммунитета при гриппе являются NК-клетки и цитотоксические Т-лимфоциты, действующие на инфицированные вирусом клетки макроорганизма.

Лабораторная диагностика. Исследуемым материалом для выявления вируса гриппа служит носоглоточная слизь, которую отбирают с помощью тампонов со слизистой оболочки носа, зева, задней стенки глотки в первые 2-3 дня болезни. Иногда исследуют мазки-отпечатки со слизистой оболочки носа. Для определения противовирусных антител используют парные сыворотки крови.

Отобранный со слизистых оболочек материал транспортируют в лабораторию в питательных средах с белковым стабилизатором (раствор Хенкса, среда 199, среда Игла с альбумином или желатином). До исследования допускается хранение материала при температуре +4ОС не более 48 часов.

Цель лабораторной диагностики гриппа:

-лабораторное подтверждение клинического диагноза “грипп”;

-определение этиологии эпидемии или пандемии;

-прогнозирование последующих эпидемий;

-выявление иммунного состояния населения в межэпидемический период;

-определение напряженности поствакцинального иммунитета;

-определение распространенности вируса среди млекопитающих и птиц. Для диагностики гриппа используют следующие методы:

-экспресс-методы обнаружения вируса;

93

-вирусологический метод (выделение вирусов гриппа и их идентификация);

-методы серологической диагностики.

Вкачестве экспресс-методов диагностики гриппа используют РИФ, ИФА и

ПЦР.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) или метод флюоресцирующих антител (МФА) позволяет обнаружить антигены вируса гриппа через 2-3 часа после отбора исследуемого материала. Для этого готовят препараты на стекле и обрабатывают их гипериммунными люминесцентными сыворотками. Исследование проводят с использованием люминесцентного микроскопа. Пораженные вирусом клетки обладают специфическим свечением.

Иммуноферментный анализ (ИФА) позволяет обнаружить в исследуемом материале родоспецифический антиген вирусов гриппа А или В (рибонуклеопротеин) с помощью тест-систем, содержащих моноклональные антитела к рибонуклеопротеину (РНП) соответствующих типов вирусов. Моноклональные антитела сорбируют в лунках планшетов, после чего к ним последовательно добавляют исследуемый материал, конъюгат (антитела к РНП, меченые пероксидазой) и субстрат (смесь перекиси водорода с ортофенилендиамином). Положительный результат проявляется желтой окраской содержимого лунок. Интенсивность окраски измеряется с помощью спектрофотометров (ридеров).

С помощью ИФА можно выявлять не только вирусный антиген, но и противовирусные антитела в сыворотке крови. С этой целью в лунках планшетов сорбируют вирусный антиген (рибонуклеопротеин). В лунки последовательно добавляют исследуемый материал, конъюгат (антитела к антителам, меченые ферментом) и субстрат. Положительный результат проявляется специфическим окрашиванием содержимого лунок.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет выявлять в исследуемом материале генетический материал (РНК) вирусов гриппа.

Вирусологический метод предусматривает использование куриных эмбрионов или клеточных культур. При использовании 9-11-дневных куриных эмбрионов заражение проводят в амниотическую или аллантоисную полости. Из клеточных культур используют первичную культуру клеток почек обезьян, клетки почек собак и др.

Индикацию вирусов в амниотической или аллантоисной жидкости куриных эмбрионов проводят с помощью реакции гемагглютинации с эритроцитами морской свинки или человека. Индикацию вирусов в культуре клеток осуществляют по цитопатическому действию (ЦПД), образованию “бляшек”, “цветной пробе”, реакции гемагглютинации (РГА) и гемадсорбции.

Идентификацию вирусов проводят по антигенной структуре. Чаще всего тип вирусов гриппа определяют в РСК, а подтип вируса - в РТГА.

Серологическая диагностика гриппа основывается на выявлении возрастания титра противовирусных антител в сыворотке крови в динамике заболевания. Для этого используют микрометод РТГА в микропланшетах. При постановке реакции используют разведения сыворотки крови, коммерческие диагностикумы вирусов гриппа и взвесь эритроцитов. Диагноз считается положительным в случае четырехкратного увеличения титра антител в парных

94

сыворотках, полученных с интервалом в 10-14 дней. Кроме РТГА для серологической диагностики в настоящее время все чаще используют ИФА.

Лечение. В большинстве случаев лечение гриппа проводится с помощью симптоматических средств (жаропонижающих, сосудосуживающих, антигистаминных), витаминов, детоксикационных препаратов, индукторов эндогенного интерферона и иммуномодуляторов (арбидола).

К специфическим противовирусным средствам относятся препараты адамантанового ряда (амантадин, ремантадин) и ингибиторы нейраминидазы (озельтамивир или тамифлю и занамивир или реленза).

Препараты адамантанового ряда блокируют М-белки, “забивают” ионные каналы и ингибируют процесс высвобождения вирусных РНК в составе эндосомы.

Ингибиторы нейраминидазы угнетают рецепторы гемагглютинина на поверхности клеток, а также связываются с консервативными участками нейраминидазы и блокируют выход вирусных частиц из инфицированных клеток.

При тяжелых формах гриппа применяют противогриппозный донорский иммуноглобулин и нормальный человеческий иммуноглобулин для внутривенного введения. В случае присоединения бактериальной инфекции назначают антибиотики.

Профилактика гриппа. Для неспецифической профилактики гриппа проводят противоэпидемические мероприятия, ограничивающие распространение вирусов гриппа (изоляция больных, карантин в детских коллективах и лечебных учреждениях, дезинфекция белья и посуды, ношение марлевой повязки и т. п.). С целью повышения общей сопротивляемости организма во время эпидемий

интраназально применяют препараты оксолина, альфа-интерферона.

Живые вакцины

Для специфической профилактики гриппа используют вакцины. Вакцинацию проводят• Инфлювирперед началом. Вакцинаэпидемгриппознаяческого сезона (октябрь - ноябрь).

Используют вакциныаллантоисная, приготовленныеживаянасухаяоснове, штаммов, прогностически “актуальных” в данныйинтраназальнаяэпидсезон. Вдлянастоядетейщее3-14времялет в России разрешены к

применению как живые, так и инактивированные вакцины.

• Ультрагривак. Вакцина гриппозная

Живыми ослабленными вакцинами являются аллантоисные вакцины для

аллантоисная живая сухая,

интраназального применения Инфлювир (рисунок 96) и Ультрагривак.

интраназальная для взрослых

Рисунок 96 – Живая противогриппозная вакцина Инфлювир. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Следует отметить, что живые ослабленные вакцины в настоящее время практически не используются.

Инактивированные вакцины против гриппа могут быть цельновирионными, расщепленными (сплит-вакцинами) и субъединичными.

Цельновирионные гриппозные вакцины готовят путем обработки формалином или ультрафиолетом вирусной суспензии, полученной в аллантоисной

• Грипповак

Рисунок 97 – ПротивогГриппозныеиппозная вакцина сплитГрипповак-.вакциныЗ имствовано из Интернетресурсов.

• Ваксигрип

Расщепленные вакцины (сплит-вакцины) содержат поверхностные и

(Франция)

внутренние вирусные антигены. Такие вакцины лишены липидов внешней оболочки. К сплит-вакцинам• Бегривакотносятся Ваксигрипп, Бегривак, Флюарикс (рисунок

98). (Германия)

Гриппозные сплит-вакцины

Субъединичные вакцины содержат только протективные антигены вируса

Гриппол (Россия)

гриппа - гемагглютинин и нейраминидазу. К числу субъединичных вакцин

Гриппол-плюс (Россия)

относятся Гриппол, Гриппол-плюс, Инфлювак, Агриппал, Инфлексал (рисунок 99).

Гриппозные субъединичныеИнфлювак (Франция)

вакциныАгриппол (Италия)

1.Таксономическое положение вирусов гриппа.

2.Структура вируса гриппа типа А.

3.Цикл репродукции вируса гриппа типа А.

4.Эпидемиология и патогенез гриппа.