6. Многие микроорганизмы чувствительны к попаданию в материал антимикробных препаратов, поэтому необходимо исключить контакт с металлами и ватой, особенно искусственной, содержащей свободные жирные кислоты.
7. Материал, полученный от пациента, всегда должен расцениваться как потенциально опасный.
8. Материал необходимо доставить в возможно более короткий срок в лабораторию и начать исследование. При отсутствии возможности быстро доставить его в лабораторию, материал помещают в холодильник при t=4°C или добавляют консервант.
9. Материал, доставляемый в лабораторию для исследования, должен иметь направление, в котором указаны название лечебного учреждения, фамилия, имя, отчество, возраст, адрес больного, дата заболевания, вид клинического материала, день и час его взятия, предполагаемый клинический диагноз, цель и метод исследования.
10. Для сохранности материала в процессе доставки следует оберегать его от действия факторов окружающей среды, таких как: свет, тепло, холод, механические повреждения и др
11. После окончания бактериологических и вирусологических исследований остатки материала считаются опасными и подлежат уничтожению .
Задание 3
Инструктаж: перечислить посуду, инструменты и химические реагенты для сбора биологического материала.
1.Вакутейнер – одноразовая стерильная пробирка для сбора крови.
2.Тубсер (тупфер) - стерильная одноразовая пробирка с агаризованной или жидкой транспортировочной средой и зондом–тампоном, вмонтированным в пробку и стерильно упакованным вместе с пробиркой.
3.Транспортировочные питательные среды, специальные плотные с активированным углем (Эймса) и без него, позволяют обеспечить сохранение жизнеспособности микроорганизмов в пробе биоматериала в течение 48 – 72 часов.
4.Допускается использование стерильных стеклянных пробирок, укупоренных газопроницаемой пробкой с вмонтированным зондом-тампоном, приготовленных в лаборатории;
5.Стерильные предметные стекла.
6.Чашки Петри с питательной средой для посевов биологического материала или без среды для сбора волос при грибковых поражениях.
6. Одноразовые стерильные емкости с завинчивающейся крышкой (допускаются стеклянные с газопроницаемой пробкой) - для сбора проб мочи, мокроты, фекалий, бронхо-альвеолярного лаважа, биопсийного (кусочки ткани) материала;
7. Специальные стерильные носоглоточные и урогенитальные зонды-тампоны с осью из алюминия (диаметр оси - 0,9 мм) и маленьким тампоном из хлопка или вискозы на кончике (диаметр тампона - 2,5 мм), вмонтированным в пробку, укупоривающую стерильную одноразовую стеклянную пробирку - для проб из носоглотки на В. pertusis и из уретры у мужчин.
Задание 4Инструктаж: описать оформление сопроводительной документации для биологического материала.1. Характер (вид)материала.
2. ФИО пациента
3.Возраст пациента
4.Название лечебного учреждения
5.Номер мед.карты стационарного больного
6.Предполагаемый диагноз
7.Результаты предыдущих микробиологических исследований
8.Предшествующая антибактериальная терапия
9.Дата и время взятия материала
10.Цель исследования
12.ФИО врача, направляющего материал для исследования.
Практическая работа 5. Методы стерилизации и дезинфекцииЗадание 1Дезинфекция -
это комплекс мероприятий, направленных на уничтожение микроорганизмов, способных вызвать инфекционные заболевания.Стерилизация - полное уничтожение микроорганизмов (включая бактерии, грибы,вирусы и прионы) и их спор на различных изделиях, поверхностях и препаратах.
Внутрибольничная инфекция –
это любое клинически распознаваемое инфекционное заболевание, которое поражает больного в результате его поступления в больницу или обращения в неё за лечебной помощью, или сотрудников больницы вследствие их работы в данном лечебном учреждении вне зависимости от появления симптомов заболевания во время или после пребывания в больницеАнтисептика -
система мероприятий, направленных на уничтожение микроорганизмов в ране, патологическом очаге, органах и тканях, а также в организме больного в целом, использующая механические и физические методы воздействия, активные химические вещества и биологические факторы.Задание 2Инструктаж: решите задачу
Сколько необходимо 10% раствора хлорной извести и воды для приготовления 5 литров 3% раствора хлорной извести.
Ответ: 1,5 литра хлорной извести и 3,5 литров воды.
Задание 3Инструктаж: используя лекционный материал и учебную литературу, запишите методы стерилизации и дайте краткую характеристику каждому из них:
-
Термическая: паровая и воздушная (сухожаровая)
-
Химическая: газовая или химическими растворами (стерилянтами)
-
Плазменная (плазмой перекиси водорода)
-
Радиационная стерилизация — применяется в промышленном варианте
-
Метод мембранных фильтров — применяется для получения небольшого количества стерильных растворов, качество которых может резко ухудшиться при действии других методов стерилизации (бактериофаг, селективные питательные среды, антибиотики)
Задание 4
Инструктаж: перечислите способы проведения контроля качества предстерилизационной обработки инструментов от моющего раствора и крови.
Контроль качества предстерилизационной очистки проводится постановкой следующих проб:
1.амидопириновой – определяет качество обработки инструментов от крови
2.азопирамовой – на остатки крови, на хлорсодержащие окислители, ржавчину, лекарственные средства
Задание 5
Инструктаж: перечислите виды антисептиков по химическому составу.
1.Хлорсодержащие
2.Йодсодержащие
3.На основе четвертичных аммониевых солей
4.Кислотосодержащие
5.На основе перекиси водорода
6.Спиртосодержащие
Практическая работа 6. Определение чувствительности к антибиотикам
Задание 1
1. Антибиотики- это химические вещества, вырабатываемые грибами, актиномицетами и бактериями, обладающие способностью избирательно подавлять рост и размножение микроорганизмов, простейших, грибов, некоторых вирусов и задерживать рост злокачественных опухолей.
История открытия и изучения.
В 1963 году специалист по этноботанике Энрике Облитас Поблете дал описание применению плесени индейскими знахарями в XV—XVI веках.
В начале 1870-х годов исследованием плесени одновременно занимались медики Алексей Герасимович Полотебнов и Вячеслав Авксентьевич Манассеин, который, изучив грибок Penicillium glaucum, .
В 1896 году итальянский врач и микробиолог Бартомелео Гозио выделил из Penicillium микофеноловую кислоту, которая была активна против возбудителя сибирской язвы.
Пенициллин был обнаружен в 1897 году французским военным врачом Эрнестом Дюшеном.
В 1904 году русский учёный М. Г. Тартаковский сообщил, что вещество, выделяемое зелёной плесенью, подавляет развитие возбудителя куриной холеры.
В 1913 году американские учёные Карл Альсберг и Отис Фишер Блек получили из Penicillium puberulum токсичную субстанцию, обладающую противомикробными свойствами (в 1936 году, когда установили её химическую структуру, выяснилось, что это была пеницилловая кислота).
В 1928 году Александр Флеминг выделил первый антибиотик. Он проводил рядовой эксперимент в ходе исследования болезнетворных бактерий. Вырастив колонии стафилококков, он обнаружил, что некоторые из них заражены обыкновенной плесенью Penicillium, которая растёт на лежалом хлебе, делая его зелёным. Вокруг каждой колонии плесени была область, в которой бактерии отсутствовали. Флеминг сделал вывод, что плесень вырабатывает вещество, убивающее бактерии, которое он назвал «пенициллином».Дело в том, что обнаруженное вещество оказалось очень нестойким, оно разрушалось даже при кратковременном хранении, особенно в кислой среде.
Только в 1938 году двум учёным из Оксфордского университета, Говарду Флори и Эрнсту Чейну, удалось решить проблему устойчивости, получив соль пенициллиновой кислоты. В 1945 году Флемингу, Флори и Чейну за их работу была присуждена Нобелевская премия.
В СССР первый советский антибактериальный препарат под названием «Крустозин» был получен советским микробиологом Зинаидой Ермольевой в 1942 году.
В 2017 году было объявлено о синтезе модифицированного ариломицина , на основе которого возможно создать принципиально новый класс антибиотиков, эффективно воздействующих на грамотрицательные бактерии
Механизм и спектр действия антибиотиков. -
Нарушение синтеза белка: ингибирование активации и переноса аминокислот, функций рибосом (стрептомицин, тетрациклин, пуромицин).
-
Подавление синтеза нуклеиновых кислот: связывание с ДНК и препятствование продвижению РНК-полимеразы (актидин), сшивание цепей ДНК, что вызывает невозможность её расплетания (рубомицин), ингибирование ферментов.
-
Нарушение синтеза клеточной стенки посредством ингибирования синтеза пептидогликана (пенициллин, цефалоспорин, монобактамы), образования димеров и их переноса к растущим цепям пептидогликана (ванкомицин, флавомицин) или синтеза хитина (никкомицин, туникамицин). Антибиотики, действующие по подобному механизму, обладают бактерицидным действием, не убивают покоящиеся клетки и клетки, лишённые клеточной стенки (L-формы бактерий).
-
Нарушение функционирования мембран: нарушение целостности мембраны, образование ионных каналов, связывание ионов в комплексы, растворимые в липидах, и их транспортировка. Подобным образом действуют нистатин, грамицидины, полимиксины.
-
Нарушение синтеза пуринов и пиримидинов (азасерин, саркомицин).
-
Ингибирование работы дыхательных ферментов (антимицины, олигомицины, ауровертин).
2. Особенности получения антибиотиков.Процесс получения антибиотика включает в себя следующие основные стадии:
1. получение соответствующего штамма -- продуцента антибиотика, пригодного для промышленного производства;
2. биосинтез антибиотика;
3. выделение и очистка антибиотика;
4. концентрирование, стабилизация антибиотика и получение готового продукта.
Задание 2Инструкция: постройте схемы классификации антибиотиков по источнику получения и по механизму антимикробного действия.
По источнику получения:
Природные
|
Полусинтетические
|
Синтетические
|
Продуцируемые микроорганизмами( пенициллин )
|
Получаемые при модификации природных структур (ампициллин)
|
Хинолоны
|
По механизму действия:
Бактерицидные (гибель инфекционного агента)
|
Бактериостатические (прекращение или приостановление размножения возбудителя)
|
Пенициллины
Цефалоспорины
Аминогликозоиды
Полимиксины
|
Макролиды
Тетрациклины
Линкомицин
Хлорамфеникол
|
Задание 3Инструкция: перечислите и опишите методы определения чувствительности бактерий к антибактериальным препаратам.
1. Диффузионные методы
-диски с антибиотиками
-Е-тесты
2. Методы разведения
-разведение в жидкой питательной среде
-разведение в агаре
3.Ускоренные методы
Задание 4 Инструктаж: решите ситуационные задачи
Задача 1
В лабораторию поступили испражнения от больного с подозрением на дизентерию.
Задания:
Перечислите микроорганизмы, которые могут явиться причиной данной инфекции.Возбудитель инфекции – бактерия шигелла. Способны вызвать дизентерию у человека :Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella boydii и Shigella sonnei.Назовите метод лабораторной диагностики, который необходимо применить.Клинический материал: испражнения, ректальный мазок.
Методы:
1.Бактериологический(культуральный метод)-основной.
2.Серологический (латексагглютинация, ИФА, РСК, РНГА, развернутая реакция агглютинации- "дизентирийный Видаль).
Задача 2В бактериологическую лабораторию поступил материал (кусочки некротизированной ткани, отделяемое раны) от больного с диагнозом «газовая гангрена».
Задания:
Назовите микробы, которые вызывают это заболевание.Заболевание вызывается преимущественно бактериями рода клостридий, которые обитают в почве и уличной пылиОсновные возбудители:
-
Clostridium perfringens (90 % случаев)
-
Clostridium septicum
-
Clostridium histolyticum
-
Clostridium novyi
-
Clostridium fallax
-
Clostridium bifermentans
-
Clostridium sordellii
Назовите особенности культивирования микробов.