Перечень практических работ для сдачи практических навыков

1) Подсчет эритроцитов и лейкоцитов (Учебное пособие «Физиология крови», стр.22)

Эритроциты:

Ход работы. Положить стекло камеры Горяева под объектив микроскопа и рассмотреть сетку камеры под большим и малым увеличением. Накрыть камеру покровным стеклом. Налить 4 мл 3 % раствора натрия хлорида в рабочую пробирку для. Протереть 96 % спиртом кожу дистальной фаланги IV пальца левой руки, проколоть ее, снять первую каплю крови сухой ватой, а потом погрузить конец микропипетки в новую каплю и набрать кровь до метки. Если набрано больше крови, то с помощью сухого ватного тампона, притрагиваясь к носику, снять излишек крови. Погрузить кончик микропипетки в 3 % раствор натрия хлорида, который налит в рабочую пробирку. Таким образом кровь будет; разбавлена в 200 раз.

Осторожно встряхивая, перемешать раствор крови в пробирке, каплю раствора поместить в камеру. Для этого кончик микропипетки поставить возле покровного стекла и легонько нажать на грушу. Раствор зайдет под покровное стекло в камеру и заполнит ее. Подождать 1-2 мин, чтобы эритроциты осели на дно камеры. При малом увеличении микроскопа найти сетку камеры. Перевести микроскоп на большое увеличение и начать подсчет эритроцитов в 5 больших квадратах, которые разделенные на маленькие. Лучше всего считать эритроциты в больших квадратах, которые помещаются по диагонали поля зрения. Во время подсчета эритроцитов надо помнить правило Егорова: в маленьких квадратах считать те клетки, которые помещаются как внутри квадрата сетки, так и на его верхней и левой гранях. Это нужно для того, чтобы дважды не считать эритроциты, которые находятся на сторонах сопредельных квадратиков.

Количество эритроцитов в 1 мкл крови рассчитывают по формуле:

X = а*4000*200/80

Где X — количество эритроцитов в I мкл; а — количество эритроцитов в 80 маленьких квадратах; 80 - количество подсчитанных маленьких квадратов (5*16=80); 200 — степень разведения крови; 4000 -множитель, который приводит результат объема в 1 мкл крови, поскольку объем маленького квадратика составляет 1/4000 мм (сторона 1/20, а внутри 1/10 мм).

Практически количество эритроцитов определяют в 80 маленьких квадратах, полученный показатель умножают на 10000. Для определения количества эритроцитов полученную цифру умножают на 106.

В протоколе отобразить процесс расчета в системе СИ количества эритроцитов в 1 л крови.

Лейкоциты:

Работа №1: Подсчет лейкоцитов.

Ход работы: подготовить камеру Горяева для подсчета лейкоцитов (так как и для подсчета эритроцитов). В отдельную пробирку налить 0,4 мл 5% раствора уксусной кислоты, окрашенной метиленовым синим. Уксусная кислота нужна во время подсчета лейкоцитов для того, чтобы обусловить гемолиз эритроцитов, а метиленовый синий - для контрастирования ядер лейкоцитов, т.е., для удобства подсчета. Протереть кожу дистальной фаланги IV пальца раствором спирта или йода, проколоть кожу, набрать кровь с помощью резиновой груши в микропипетку до метки, если попало больше крови, надо снять ее сухой ватой, вылить ее в пробирку, тщательно перемешайте кровь в ней. Первые 2 капли раствора вылить на вату, а потом заполнить камеру так же, как и для подсчета эритроцитов.

Считать лейкоциты нужно на маленьком увеличении микроскопа в 25 больших квадратах сетки, которые не разделенные на маленькие. Для большей точности подсчет следует проводить по плоскости всей камеры руководствуются правилом Егорова.

Рекомендации относительно оформления результатов работы.

Число лейкоцитов (а) в 25 больших квадратах (каждый из них на своей плоскости вместил бы 16 маленьких — 25*16=400 квадратиков) подставить в формулу. В таком случае количество лейкоцитов в 1 мкл крови будет составлять: Л = а*4000*20/400

Практически количество лейкоцитов, определенных в маленьких квадратиках, умножают на 50, а для переведения в единицы СИ - Г (гига) в 1 л - полученную цифру умножают на 10б.

2) Определение количества гемоглобина в крови по способу Сали (Учебное пособие «Физиология крови», стр.23)

Ход работы: с помощью пипетки налить в среднюю пробирку гемометра Сали 0,1 % раствор хлористоводородной кислоты до нижней метки. Протереть спиртом и проколоть кожу мякоти пальца. С помощью микропипетки и резиновой груши набрать 20 мкл крови. Обтереть кончик капилляра и, погрузив его в 0,1% раствор хлористоводородной кислоты на дно пробирки гемометра, осторожно, чтобы не образовалась пена, выдуть кровь и дважды сполоснуть капилляр раствором. Оставить гемометр на 4-5 минут. За это время кислота, разрушив оболочку эритроцитов, превратит гемоглобин в хлорид гематина, который имеет характерный коричневый цвет. В среднюю пробирку прибавлять по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока цвет раствора в ней не станет таким, как в стандартных пробирках. Это и будет величина, которая арактеризует количество гемоглобина в крови в абсолютных или тносительных единицах (в зависимости от типа шкалы гемометра).

3) Расчет цветового показателя крови (Учебное пособие «Физиология крови», стр.24)

Величина этого показателя воссоздает относительное содержание гемоглобина в эритроцитах. При нормальном насыщении эритроцитов гемоглобином цветовой показатель находится в границах 0,86-1,05. Увеличение или уменьшение его свидетельствует о нарушении насыщения эритроцитов гемоглобином. Для расчета цветового показателя крови пользуются формулой:

ЦП = (количество Нв (г/л) * 3)/первые три цифры числа эритроцитов (в 1 мкл)

4) Лейкоцитарная формула (Учебное пособие «Физиология крови», стр.59-60)

5) Определение времени продолжительности кровотечения и скорости свертывания (Учебное пособие «Физиология крови», стр.49)

Время

Ход работы. Стерильным скарификатором делается прокол пальца и сразу же начинают отсчет времени. Выступающую каплю крови каждые 30 сек осторожно впитывают фильтровальной бумагой, не прикасаясь к раневой поверхности. Момент, когда на фильтровальной бумаге больше не появляется кровяное пятно, отмечают как окончание кровотечения.

В норме при определении времени кровотечения этим способом кровотечение останавливается через 2-3 мин.

Определение скорости свертывания крови по Сухареву.

Ход работы: Кровь для анализа берут из пальца руки человека. Набирают в капилляр столбик крови высотой 25 - 30 мм. Отмечают по секундомеру время. Наклоном капилляра переводят кровь на середину трубки. Держа капилляр двумя пальцами, покачивают его на 30 - 45^ в обе стороны. Свободное смещение крови показывает, что свертывание еще не наступило.

Начало свертывания характеризуется замедлением движением крови при наклоне капилляра: на его внутренней стенке появляются небольшие сгустки.

Полное свертывание крови соответствует моменту полной остановки движения крови. В выводах осветить какие процессы гемостаза отражают данный метод.

6) Определение группы крови (Учебное пособие «Физиология крови», стр.57)

Ход работы: на специальные тарелки наносят (не смешивая!) по капле стандартной сыворотки 1, 2 и 3 групп, содержащей соответственно

агглютинины 1 - альфа и бета; 2 - бета и 3 - альфа. Углом предметного стекла переносят небольшое количество крови, полученной из пальца, в каплю сыворотки 1 группы, затем вторым чистым углом предметного стекла такое же количество крови переносят в сыворотку 2 группы. Третью каплю переносят в сыворотку 3 группы третьим углом предметного стекла. Каждый раз тщательно размешивают кровь в капле сыворотки, пока смесь не станет равномерно розового цвета. Реакция агглютинации наступает через 1 — 5 мин. При наличии агглютинации капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков. Группа крови устанавливается в зависимости от наличия или отсутствия агглютинации. Зарисуйте схематично результаты опыта, а в выводах определите, каким реципиентам может быть перелита исследуемая кровь и какие современные требования к гемотрансфузии крови в зависимости от Фуппы крови донора и реципиента.

7) Характеристика клинического анализа крови при различных состояниях организма (Учебное пособие «Физиология крови», стр. 17-19, 27-29, 37, 42,59-60, 85)

Новорожденные(дети)

Гемоглобин 145-180 г/л

Эритроциты 5.5*10^12/л до 3ех месяцев после спад

Лейкоциты 12-32*10^9/л

СОЭ 2.5-2.8 мм/час

ЦП 1.2 %

Женщины

Гемоглобин 120-140г/л

Эритроциты 3.7-4.7*10^12/л

Лейкоциты 4.0-9.0*10^9

СОЭ 5-15

ЦП 0,8-1

Беременные

Гемоглобин 110-120 (понижен резко гемоглобин)

Эритроциты 3.5-4.2(повышен)

Лейкоциты 7.4-10.0

СОЭ 35-40

ЦП 0.8-1.2

Мужчины

Гемоглобин 125-165

Эритроциты 4.0-5.0

Лейкоциты 4.0-9.0

СОЭ 2-10

ЦП 0.8-1.0

Воспалительные процессы

Гемоглобин 140-150 (повышен)

Эритроциты 4.0-5.0

Лейкоциты 10.0-14.0 (повышены) много молодых лейкоцитов при ВП

СОЭ 20-25 (повышено)

ЦП 0.8-1.0 Гельминтозы

Гемоглобин 120-150

Эритроциты 3.8-5.2

Лейкоциты 5.0-11.0 (повышение за счет эозинофилов)

СОЭ (5-15) Повышено либо в норме

ЦП 0.8-1.15

8) Аскультауция сердца и фонокардиография (Учебное пособие по «Физиологии сердечно-сосудистой системы», стр. 12-13)

аускультация - выслушивание с помощью фонендоскопа. Обычно можно выслушать 2 тона: I и II. I тон глухой, низкий и продолжительный - 0,12-0,16 сек. Он совпадает с систолой желудочков и называется систолическим. Лучше всего выслушивается на верхушке сердца, т.е. в 5 межреберье па 1-1,5 см от среднеключичной линии. II тон более высокий, короткий и громкий. Длительность 0,07-0,1 сек, он совпадает диастолой желудочков - диастолический. выслушивается в точке Боткина в 3 межреберье слева от грудины или от основания мечевидного отростка.

III и IV-патология . Эти тоны лучше слышны на верхушке сердца.

Появление дополнительных тонов у взрослых чаще связано с патологическими изменениями. Например, III тон может выслушиваться при дефектах межжелудочковой перегородки.

Выслушивание сердца обычно начинается со второго межреберья слева от грудины, где громкость всех тонов наибольшая. После этого прослушивается второе межреберье справа от грудины, там находится проекция атриовентрикулярного клапана.

Фонокардиография - метод графической регистрации тонов и шумов сердца, она является методом дополнительной аускультации и основывается на ее результатах.

Фонокардиограф состоит из микрофона, усилителя, системы частотных фильтров, устраняющих посторонние звуки, и записывающего устройства.

Регистрация ФКГ начинается после 5 мин. покоя пациента в положении лежа; обычно ее записывают при задержке дыхания на вдохе. Частотные каналы выбирают по системе Масса-Вебера. Включают полосы 250, 140, 70, 35 Гц. Микрофон помещают в соответствующую точку аускультации. Наибольшее практическое значение имеет частотный канал 140 Гц. Он пропускает те звуковые частоты, которые анализируются и при прослушивании.

Высокочастотный канал 250 Гц служит для выявления высокочастотных шумов, а низкочастотный - для записи III и IV тонов.

Нормальная ФКГ включает колебания I, II, а часто III и IV тонов.

I той обычно включает 3 группы колебаний:

• начинается низкочастотными колебаниями небольшой амплитуды;

• центральный сегмент представлен частыми колебаниями с высокой амплитудой;

в конце идут низкоамапитудные колебания.

Первая группа колебаний обусловлена вибрацией стенки желудочков. Центральный сегмент связан с колебаниями створок митральных и трикуспидальных клапанов при их закрытии. Конечный участок отражает колебания стенок крупных сосудов при открытии аортального и пульмонального клапанов.

Анализ фоиокардиограммы позволяет диагностировать ряд заболеваний сердца. Например, расщепление колебаний I тона свидетельствует о неодновременном закрытии атриовентрикулярных клапанов, что наблюдается при стенозе атриовентрикулярных отверстий.

9) Электрокардиография. Метод функциональных нагрузок (Учебное пособие по физиологии сердечно-сосудистой системы, стр.40-41, 51-52)

Ход работы. Для сравнения результатов исследования в динамике используют одну из общепринятых функциональных проб, которую выбирают в зависимо­сти от состояния испытуемого.

Наибольшее распространение имеют следующие пробы: 1) 20 приседаний; 2) быстрый 15 или 20-секундный бег на месте.

Для проведения указанных функциональных проб необходимо в состоянии по­коя при обычном дыхании зарегистрировать ЭКГ в стандартных отведениях и в отведениях V2, V4, V6- затем записывают ЭКГ непосредственно после дозиро­ванной нагрузки, на 3-й и 6-й минутах после восстановительного периода. Рекомендации к оформлению работы. Электрокардиограммы, зарегистрирован­ные до и после функциональной пробы, вклейте в протокол опыта, обозначьте их зубцы и интервалы. Измерьте зубцы и интервалы ЭКГ и сделайте их сравни­тельный анализ. По полученным данным сделайте вывод об изменениях в ЭКГ и о динамике их восстановления.

10) Экг. Определение электрической оси сердца (Учебное пособие по физиологии сердечно-сосудистой системы, стр.43)

Нормальная электрокардиограмма состоит из основной линии (изолиния) и отклонений от неё, называемых зубцами и обозначаемых латинскими буквами Р, Q, R, S, Т, U. Отрезки ЭКГ между соседними зубцами — сегменты. Расстояния между различными зубцами — интервалы. ЭКГ отражает последовательный охват возбуждением отделов миокарда.

Амплитуду зубцов определяют по вертикали — 10 мм соответствуют 1 мВ (для удобства амплитуду зубцов измеряют в миллиметрах). Длительность зубцов и интервалов определяют по горизонтали плёнки ЭКГ. При скорости записи 25 мм/сек (стандартная скорость) 1 мм соответствует 0,04 сек. При скорости запи си 50 мм/сек (применяют реже) 1 мм соответствует 0,02 сек.

Определение электрической оси сердца (аксонометрия). По зубцам ЭКГ определяется амплитуда и направление результирующего вектора сердца. Для этого величину зубцов R двух стандартных отведений (например, I и III) откладывают на соответствующих сторонах треугольника Эйнтовена. Таким образом получаются проекции искомого вектора. Из концов проекций проводят перпендикуляры к осям треугольника до их пересечения. Соединяют точку пересечения полученных перпендикуляров с геометрическим центром треугольника. Получаем искомый вектор R. Длина вектора соответствует ЭДС сердца для момента R, а угол между вектором и горизонтальной линией (проведенной через центр треугольника - точку О) - есть угол а.

* Нормограмма (нормальное положение ЭОС) характеризуется углом а от +

До +70°. Формула: R1I >Я1 >Ш. 0

‘ вертикальное положение характеризуется углом а от +70 до + • ормула.

MI 3R1II >RI, R1 >57. QOo

* Правограмма. Отклонение ЭОС вправо (правограмма) угол а олее Формула: ЯШ >RJI >RI, SI >RI.

• Горизонтальное положение характеризуется углом а от +30° до 0°

RIШ >R1II,Sill >RIII, Ra VF >Sa VF. ' P УЖ

• Левограмма. Отклонение ЭОС влево (левограмма) — угол а менее 0° (до - 90°). Формула: RI >RII >RIII, Sill >RIII, RaVF <SaVF.