При переносе посадочного материала в почву используют следующие материалы и оборудование: пробирки с растениями, горшки с почвой; почву желательно прогреть или проавтоклавировать до посадки растений
Сделать пробиркой углубление в увлажненной почве в горшке. Пробирочное растение вынуть из пробирки, поместить в горшки с почвой, не отмывая агаровой среды. Уплотнить почву вокруг растения. Первые 3-5 дней желательно прикрывать растения стеклянным колпаком. Через 10 дней растения пересаживают на постоянное место в теплице [7].
Клональное микроразмножение архидей
Первые работы в области клонального микроразмножения были проведены в конце 50-х годов XX столетия и связаны с именем Жоржа Мореля, которому удалось получить первые растения-регенеранты орхидей. Культивируя в стерильных условиях верхушку побега орхидеи, размером всего 0,5 мм, он наблюдал формирование сферических структур, напоминающих видоизмененные почки. Эти структуры можно было делить, подращивать на искусственной питательной среде, опять делить и получать из них целые растения. Французские фирмы, занимающиеся разведением орхидей, использовали этот метод, и очень скоро орхидеи из мериклонов появились на цветочном рынке в огромном количестве, превратив орхидею из дорогого и редкого цветка в широко распространенное растение.
Для массового получения оздоровленных растений необходимо, чтобы быстрое клональное микроразмножение новых и уже существующих сортов стало крупномасштабным процессом. Среди растений этот способ впервые применили для размножения орхидных. Теперь так размножают многие декоративные растения. Микроклональное размножение позволяет получить из одной чешуи луковицы до 105 новых растений за 6 месяцев. Большая часть гербер, которые продаются в цветочных магазинах, получена путем клонирования. Одно растение герберы за год при клональном микроразмножении дает до одного миллиона новых генотипически и фенотипически сходных растений. При обычных способах размножения можно получить только 50-100 растений.
В настоящее время большое внимание уделяется культуре орхидей. Коллекция насчитывает, как было изложено выше, 108 таксонов собственной репродукции, в т.ч. 55 видов, из которых 23 в списке охраняемых, и 53 гибрида. Для орхидных, естественное размножение которых требует особых условий, введение в культуру и микроклональное размножение является единственным способом получения достаточного количества посадочного материала сортов и гибридных форм этой культуры в промышленном цветоводстве.
В рамках ГП «Реконструкция объектов ЦБС НАН Беларуси» была проведена работа по созданию in vitro коллекции орхидных в ЦБС НАН Беларуси
В настоящее время in vitro коллекция орхидных Отдела биохимии и биотехнологии растений ЦБС НАНБ насчитывает 35 образцов. Из них 28 относятся к представителям тропических и субтропических видов орхидей и семь к орхидным зоны умеренного климата (в том числе Cypripedium calceolus, занесенный в Красную Книгу Республики Беларусь). Для создания коллекции использовался растительный материал из фондовой оранжереи ЦБС НАН Беларуси и частных коллекций (Ракицкий С.Е., Бурчик Н.А.). 17 образцов стерильных культур получены из ФИБХ им. М.М. Шимякина и Ю.А. Овчинникова РАН (РФ), ГБС им. Н.В.Цицина (РФ) и НБС им. Н.Н.Гришко (Украина). К настоящему времени получено и выращивается в условиях оранжереи около 500 растений тропических орхидных.
Введение в культуру видовых растений, а так же гибридов первого поколения осуществлялся посевом семян в асептических условиях. Такой способ является одним из наиболее популярных и широко используемых методов размножения и введения в культуру орхидных. При этом можно использовать как сухие семена, полученные из созревших коробочек, так и недозревшие зеленые коробочки. Были получены стерильные культуры Cymbidium lowianum, Bletilla striata, Laelia purpurata, Stanhopea tigrina, Cypripedium calceolus, Dactylorhiza fuchsii, Dactylorhiza maculata. Стимулирующее действие на всхожесть семян Stanhopea tigrina и Bletilla striata оказало их культивирование до момента образования протокормов в темноте. При перенесении таких протокормов в условия освещения у них начинался синтез хлорофилла и активный рост первичного побега. При подобном способе проращивания семян снижалось количество некротизированных протокормов по сравнению с протокормами, выращенными на свету. Подросшие сеянцы пикировали на свежие среды и после формирования достаточного количества корней переходили к адаптации растений в условиях оранжереи.
Для введения в культуру сортов и гибридов использовались вегетативные органы, содержащие меристематические ткани: апикальные и латеральные почки молодых побегов, покоящиеся почки цветоносов. Основной средой культивирования полученных in vitro растений была среда MS с добавлением различных регуляторов роста. При культивировании орхидных умеренного климата так же использовалась среда BM.
Адаптация размноженных in vitro растений проводилась в 2 этапа. В качестве субстрата для первого этапа адаптации был использован измельченный сфагновый мох, предварительно обработанный кипятком. Растения высаживались в посадочные плошки на расстоянии 1-2 см друг от друга с небольшим заглублением в субстрат не более 0,5 см. Высаженные в субстрат растения переносили в изолированную теплицу с высокой влажностью и необходимой температурой воздуха. Период нахождения в таких условиях составил для всех сортов Phalaenopsis hybridum, Epidendrum radicans, Macodes petola - 3 месяца, Dendrobium sp, Dendrobium phalaenopsis “Red Lip” и Oncidium sp - 4 месяца, Oncidium lanceanum - 6 месяцев.
Появление у растений новых туберидиев и корней позволило перейти ко второму этапу адаптации - пересадке растений на смешанный субстрат.
Смешанный субстрат готовили из следующих компонентов: сосновая кора, мох сфагнум, не полностью разложившаяся часть верхового торфа, древесный уголь в соотношении 1:1:1:0,1, соответственно.
В течение 10 дней после пересадки растения находились в изолированной теплице в режиме, аналогичном первому этапу, а затем были помещены в теплицу с условиями наиболее приближенными к естественным: Phalaenopsis hybridum, Macodes petola находились в оранжерее с минимальными колебаниями температуры, которая составляла 18-20 °C, а Dendrobium sp., Dendrobium phalaenopsis «Red Lip» и Oncidium sp. в оранжерее с дневной температурой 18-20 °C и ночной 10-12 °C.
клональный микроразмножение декоративный почвенный
Заключение
Значение клонального микроразмножения:
. Размножают редкие сорта и гибриды растений, а также растения, которые не размножаются в искусственных условиях.
. В селекции клональное микроразмножение применяют для сохранения в культуре новых перспективных сортов, особенно полученных in vitro. Создание нужного для селекционера количества копий уникальных генотипов не требует больших масштабов. Периодически пересаживая микрочеренки, микроклубни или другие органы растений на свежую питательную среду, можно достаточно долго сохранять в культуре in vitro растения с необходимым генотипом.
. Клональное микроразмножение используется также для быстрого получения больших количеств безвирусного материала с дальнейшей посадкой в грунт.
. Клональное микроразмножение помогает в сохранении редких и исчезающих видов растений. Однако эта технология размножения редких растений и их возвращение в природные экосистемы ещё нуждается в разработке.
. Клональное микроразмножение применяют также
для ускорения размножения в селекции древесных растений. В Италии, в результате
черенкования пазушных побегов in
vitro, за год выращивают
более миллиона подвоев персиковых деревьев. Таким же образом клонируют
гвинейскую масляничную пальму, многие породы хвойных деревьев (ель, сосна,
лиственница, секвойя). С помощью клонального размножения отдельных экземпляров
взрослых растений удается создавать декоративные древесные растения необычной
формы и расцветки, например в виде шара, «плакучие», золотистого цвета и т. д.
[1]
Список литературы
1. Бутенко Р. Г. Биология культивируемых клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе, Монография. - Москва, ФБК-Пресс, 1999 159 с.
. Катаева Н. В., Бутенко Р. Г. Клональное микроразмножение растений. - М., 1983.
. Культура клеток растений. / под ред. Р. Г. Бутенко. М., 1986.