34. Микробиологическая диагностика сальмонеллеза

Основной метод диагностики-бактериологический. Материал для исследования: испражнения, рвотные массы, кровь, промывные воды желудка, моча, осемененные продукты. Особенности диагностики:

1. использование сред обогащения(селенитовой, магниевой)

2. пробы следует брать из последней, более жидкой части испражнений

3. соблюдать соотношение 1:5(1-испражнений, 5-среды)

4. в связи с тем, что S.arizonae и S.diarizonae ферментируют лактозу, следует использовать в качестве дифференциально-диагностических не только среду Эндо, но и висмут-сульфит-агар, на которой колонии сальмонелл приобретут черный цвет(или зеленоватый)

5. для посева крови используют среду Рапопорт

6. использование для предварительной идентификации колоний О1-сальмонеллезного фага

7. для окончательной идентификации выделенных культур вначале используют поливалентные адсорбированные О- и Н-сыворотки, затем соответствующие моновалентные О- и Н-сыворотки

Для быстрого обнаружения сальмонелл могут быть использованы поливалентные иммунофлюоресцентные сыворотки.

35. Морфологические, тинкториальные и культуральные свойства возбудителя холеры.

Возбудитель – Vibrio cholerae, серогрупп О1 и О139, характеризуется токсическим поражением тонкого кишечника, нарушением водно-солевого баланса.

Морфологические и культуральные свойства

Грамотрицательные, слегка изогнутые палочки (вид запятой, но склонны к полиморфизму), спор и капсул (кроме штамма Бенгал) не образуют; штамм Бенгал образует капсулу в организме. Облигатные аэробы. Монотрихи, длина жгутика может в 2-3 раза превышать длину сомы, что обуславливает высокую подвижность.

Вибрион имеет один полярно расположенный жгутик. Под действием пенициллина образуются L-формы. Грамотрицательны, спор не образуют. Факультативный анаэроб. Не требователен к питательным средам. Температурный оптимум 37C.

На плотных средах вибрионы образуют мелкие круглые прозрачные S-колонии с ровными краями. На скошенном агаре образуется желтоватый налет. В непрозрачных R-колониях бактерии становятся устойчивыми к действию бактериофагов, антибиотиков и не агглютинируются О-сыворотками.

Хорошо растут на простых питательных средах с щелочной реакцией (pH 8,5 - 9,5). На 1% пептонной воде образует нежную пленку (аэроб). На щелочном агаре - чаще гладкие прозрачные колонии с голубоватым оттенком, реже (в процессе диссоциации) - шероховатые и складчатые колонии.

Вибрионы холеры хорошо окрашиваются анилиновыми красителями; обычно используют водный фуксин Пфайффера и карболовый фуксин Шля.

36. Биохимические свойства холерного вибриона, классификация Хейберга.

Ферментируют углеводы с образованием кислоты без газа. Оксидазоположительны, образуют индол, восстанавливают нитраты в нитриты, расщепляют желатин, часто дают положительную реакцию Фогеса – Проскауэра (т.е. образуют ацетилметилкарбинол), уреазы не имеют, не образуют H₂S

Б.Хейберг по способности ферментировать маннозу, сахарозу и арабинозу распределил все вибрионы (холерные и холероподобные) на ряд групп, количество которых ныне составляет 8

37. Антигенные свойства холерного вибриона, классификация, серовары, наг-серовары.

Холерный вибрион относится к О1 группе. Он имеет общий А-антиген и два типоспецифических антигена – В и С, по которым различают три серотипа V.cholerae:

1) серотип Огава (АВ);

2) серотип Инаба (АС);

3) серотип Гикошима (АВС).

Холерный вибрион в стадии диссоциации имеет OR-антиген. В свяяи с этим для его идентификации используют О R – сыворотку, О-сыворотку и типоспеифические сыворотки Инаба и Огава.

Вид V.cholerae подразделяют на 4 биотипа: V.cholerae, V. eltor, V proteus., V. Albénsis

Холероподобные заболевания человека могут вызываться и так называемыми НАГ-вибрионами. Основным отличием этих вибрионов от истинных возбудителей холеры является их неспособность склеиваться в кучки (агглютинироваться) в присутствии противохолерной сыворотки. 

38. Биовары холерного вибриона, их отличия.

Вид V.cholerae подразделяют на 4 биотипа: V.cholerae, V. eltor, V proteus., V. Albénsis

39. Особенности седьмой пандемии холеры.

Седьмая пандемия началась н Индонезии, быстро охватила Филлипины, Китай, страны Индокитая, а затем другие страны Азии, Африки, Европы. Особенности этой пандемии заключаются в том, что она:

• Во-первых, вызвана особым вариантом холерного вибриона - V. Cholerae eltor;

• Во-вторых, по продолжительности она превзошла все предшествующие

• В-третьих, она протекала в виде двух волн, первая из которыз продолжалась до 1990, а вторая началась в 1991.

40. Эпидемиология холеры.

Основным источником инфекции является только человек – больной холерой или вибрионоситель, а также загрязнённая ими вода. Никакие животные холерой не болеют. Способ заражения – фекально-оральный. Пути заражения: а) основной – через воду, используемую для питья, купания и хозяйственно-бытовых нужд; б) контактно-бытовой; в) через пищу. Продолжительность выделения холерного вибриона у здоровых носителей составляет от 7 до 42 дней и 7-10 дней у переболевших. Особенностью холеры является то, что после неё, как правило, не остаётся длительного носительства и не формируется стойких эпидемических очагов. При возникновении заболеваний холерой осуществляют комплекс противоэпидемических мероприятий, среди которых ведущим и решающим является активное своевременное выявление и изоляция больных в острой и атипической форме и здоровых вибрионосителей.

Холерные вибрионы хорошо выживают при низкой температуре – во льду сохраняют жизнеспособность до 1 месяца. В морской воде до 47 суток, в речной – от 3-5 дней до нескольких недель, в кипячёной минеральной воде – более 1 года, в почве – от 8 дней до 3 месяцев, на сырых овощах – 2-4 дня, в молоке и молочных продуктах – 5 дней. При температуре 80⁰ погибают через 5 минут, при 100⁰ – моментально. Высокочувствительны к кислотам, под влиянием дезинфектантов погибают через 5-15 минут. Чувствительны к высушиванию и действию прямых солнечных лучей. Высокочувствительны к хлору.

41. Факторы патогенности холерного вибриона.

Подвижность.

- Хемотаксис. С помощью этих свойств вибрион вступает во взаимодействие с эпителиоцитами.

- Факторы адгезии и колонизации, с помощью которых вибрион прилипает к микроворсинкам и колонизирует слизистую оболочку тонкого кишечника (муциназа, нейраминидаза).

- Холерный токсин – холероген.

- Новые токсины, способные вызывать диарею, но не имеют генетического и иммунологического родства с холерогеном.

- Дермонейротические и геморрагические факторы.

- Эндотоксин – ЛПС.(вызывают общую интоксикацию организма)

Главный фактор патогенности – экзотоксин холероген (СТХ АВ), который и обусловливает патогенез этой болезни. Молекула холерогена состоит из двух фрагментов – А и В. Фрагмент А состоит из двух пептидов – А₁ и А₂, он обладает специфическим свойством холерного токсина и наделяет его качествами суперантигена. Фрагмент В состоит из 5 одинаковых субъединиц. Он выполняет две функции: 1) распознаёт рецептор (моносиалоганглиозид) энтероцита и связывается с ним; 2) формирует внутримембранный гидрофобный канал для прохождения субъединицы А. Пептид А₂ служит для связывания фрагментов А и В. Собственно токсическую функцию выполняет пептид А₁ (АДФ-рибозилтрансфераза). Для обнаружения способности V.cholerae продуцировать холероген можно использовать различные методы: 1) биологическая проба на кроликах; 2) непосредственное обнаружение холерогена с помощью ПЦР, ИФМ или реакции пассивного иммунного гемолиза.

42. Холероген, структура, механизм действия.

Главный фактор патогенности – экзотоксин холероген (СТХ АВ), который и обусловливает патогенез этой болезни. Молекула холерогена состоит из двух фрагментов – А и В. Фрагмент А состоит из двух пептидов – А₁ и А₂, он обладает специфическим свойством холерного токсина и наделяет его качествами суперантигена. Фрагмент В состоит из 5 одинаковых субъединиц. Он выполняет две функции: 1) распознаёт рецептор (моносиалоганглиозид) энтероцита и связывается с ним; 2) формирует внутримембранный гидрофобный канал для прохождения субъединицы А. Пептид А₂ служит для связывания фрагментов А и В. Собственно токсическую функцию выполняет пептид А₁ (АДФ-рибозилтрансфераза). Для обнаружения способности V.cholerae продуцировать холероген можно использовать различные методы: 1) биологическая проба на кроликах; 2) непосредственное обнаружение холерогена с помощью ПЦР, ИФМ или реакции пассивного иммунного гемолиза.

43. Патогенез холеры, клинические формы заболевания

Существует две формы холеры: типичная (легкая, средняя, тяжелая форма, зависящая от степени дегидратации) и атипичная (стертая, молниеносная, сухая форма). При холере, вызванной вибрионами El-Tor и O139 Bengal, преобладают, большей частью, средней тяжести, легкие и стертые формы болезни.

Типичная холера начинается остро, внезапно - у больных ночью или утром возникают повторные позывы на дефекацию без болей в животе, сопровождающиеся чувством переполнения в животе. Стул быстро теряет каловый характер, становится обильным, приобретает водянистый вид, иногда окрашен желчью и содержит плавающие хлопья. В последующем стул становится цвета рисового отвара с запахом рыбы или сырого картофеля.

Легкая форма болезни характеризуется относительно нечастой дефекацией - от 3 до 10 раз в сутки, сопровождается умеренно выраженной жаждой и мышечной слабостью. У больного при этом нормальная температура тела, небольшая сухость языка, незначительная тахикардия. Физико-химические свойства крови без изменений. При своевременном лечении диарея прекращается через 1-2 дня, после чего наступает клиническое выздоровление больного.

Для средней формы болезни характерно от 15 до 20 дефекаций в сутки, при этом может возникать обильная рвота. Становятся более выраженными клинические признаки дегидратации: жажда, не купируемая приемом воды, резкая мышечная слабость, тонические судороги мышц, уменьшение мочеотделения. У больного наблюдается сухость слизистых оболочек и кожи, снижение звучности голоса, подчеркивание черт лица, тахикардия в сочетании с умеренной гипотонией. Передняя брюшная стенка западает, кожная складка на животе расправляется не больше 1 секунды. Повышается незначительно относительная плотность крови - до 1,029 (норма 1,026), увеличиваются показатели гематокрита - 0,51..0,54 (норма 0,4..0,5), повышается плотность мочи. При своевременном лечении выздоровление таких больных наблюдается на 2-3 день.

При тяжелой форме холеры у больного наблюдается многократный обильный водянистый стул и неукротимая рвота "фонтаном", что приводит за короткое время к потере 7-9% массы тела. Состояние больного резко ухудшается - наблюдается выраженная мышечная и психическая слабость, некупируемая жажда, продолжительные тонические судороги мышц. У больного наблюдается сухость слизистых оболочек и кожи, затруднено смыкание губ и век, западают глазные яблоки, кожная складка на животе расправляется более 1 секунды, на пальцах кисти кожа собирается в складки. Температура тела нормальная или пониженная, гипотония, выраженная олигоурия. Плотность крови повышается до 1,030..1,035, показатели гематокрита - 0,55..0,65, наблюдается повышение гемоглобина, числа эритроцитов и лейкоцитов. Наблюдается гипокалиемия, гипонатриемия, метаболический ацидоз, увеличение в крови лактата и азотистых метаболитов. Плотность мочи повышена. ЭКГ регистрирует признаки миокардиодистрофии.

Если такой больной не получает своевременной адекватной помощи, то холера прогрессирует и развивается IV степень дегидратации - дефицит жидкости составляет более 10% массы тела, развивается декомпенсированный дегидратационный шок.

Наиболее подвержены тяжелой форме холеры дети возрастом до 4 лет.

При особо тяжелых (молниеносных) случаях заболевания дегидратационный шок может развиться в течение первых 12 часов. При этом у больных на ряду с вышеуказанными признаками наблюдаются диффузный кожный цианоз, температура кожи снижается до 34 градусов, пульс нитевидный, частый, АД не определяется, дыхание частое поверхностное, мочеотделение отсутствует, выделение испражнений и рвотных масс прекращается, что служит неблагоприятным прогнозом. У таких больных плотность крови составляет 1,038..1,050, гематокрит - 0,6..0,7, высокое содержание в крови лактата и азотистых метаболитов. В этой стадии болезни при оказании адекватной помощи выживает только каждый пятый.

К атипичной форме относится сухая холера, которая протекает с быстро нарастающими признаками гиповолемического шока (артериальная гипотония, анурия, цианоз, судороги, энцефалопатия), приводящими к гибели больных еще до появления водянистой диареи и рвоты.

Стертая и субклиническая форма холеры распознается в процессе специфического обследования лиц в очагах инфекции или по эпидемиологическим показаниям.