Материал: семиотика++для+студов+20г
ДНК-диагностика
ПРЯМАЯ КОСВЕННАЯ
Определение мутации, |
Определение хромосомы, |
являющейся |
несущей поврежденный ген |
непосредственной |
при семейном анализе |
причиной заболевания |
|
ПРЯМАЯ ДНК-ДИАГНОСТИКА
+100%-ная точность
+возможна при сомнительном диагнозе
+возможна при полилокусном заболевании
+возможна беспробандная диагностика
-необходимо знание структуры гена
-информативна не для всех семей
Принцип косвенной- θ ДНК-диагностики
|
|
D5S435 |
|
S c |
D5S629 |
5q13 |
|
|
M |
|
|
|
|
|
|
N t |
D5S557 |
|
|
МАР1В
JK53
Локализация генов SMNt и SMNc и некоторых сцепленных с ними полиморфных ДНК-маркеров
- |
θ |
|
КОСВЕННАЯ ДНК-ДИАГНОСТИКА
+не требуется знание гена и спектра мутаций в нем
+информативна практически для всех семей
-абсолютная уверенность в клиническом диагнозе
-точность 95-99%
-обязательно наличие одного локуса заболевания
-обязательно проведение семейного анализа 
Блот-гибридизация по Саузерну
1. После окончания э/ф гель помещают в раствор
щелочи, в котором 2-цепочечные фрагменты ДНК становятся одноцепочечными
2.Перенос ДНК с геля на нитроцеллюлозный или нейлоновый фильтр в буферном растворе фиксируют на фильтре
3.Для визуализации проводят гибридизацию со специфическим по нуклеотидной последовательности меченым радионуклидом или флюоресцентной меткой олигонуклеотидным синтетическим зондом
4.Радиоактивно меченные участки выявляют путем экспонирования фильтра с рентгеновской пленкой Нерадиоактивные метки визуализируют с помощью флюоресценции или с помощью
Эт им мет одом выявляют уникальные фрагмент ы ДНК, размер кот орых
сост авляет приблизит ельно одну миллионную част ь генома
Мет од используют для выявления крупных перест роек в ДНК и некот орых т очечных
антител |
мут аций |