Методы ускоренной и экспресс-диаг дают возможность дать предварит ответ через 4 ч от начала исслед, окончательный - через 18-20 ч.
Бактериологич исслед. Кровь при подозрении на чуму засевают на МПБ во флаконах; содержимое бубона, отделяемое язвы, мокроту и др материал — на МПА с цельной или гемолизированной кровью кролика или лошади в чашках Петри с антифаговой сывороткой для нейтрализации чумного фага, р-ром генцианового фиолетового и сульфита натрия для подавления роста посторонней микрофлоры, находящейся в исслед материале. Применяют также селективную среду с а/б — агар CIN. Посевы инкубируют при 25—28 °С. Через 16—20 ч на чашках под малым увеличением микроскопа обнаруживают рост колоний в виде скоплений осколков битого стекла, кот к 48 ч приобретают вид R-формы с компактным приподнятым центром и ажурной полупрозрачной периферией («кружевные платочки»). На поверхности МПБ через 24 ч образуется рыхлая пленка, от кот спускаются тяжи, напоминающие сталактиты.
Правила работы с чумным материалом: При работе с материалом в кот могут содержаться возбуд чумы, необход тщательно соблюдать все меры предосторожности, направленные на предотвращение возможного рассеивания инфекции. Все процедуры выполняются в противочумном костюме. Следует заранее проверить целость посуды, пронумеровать пробирки и банки спец карандашом для стекла. Эти номера указываются в сопроводительных доках в лаб. Банки и пробирки с содержимым д б плотно закрыты пробками и залиты парафином, а затем завернуты в ткань, пропитанную 5—8% лизолом или др дез р-ром. После этого они помещаются в метал коробки или пеналы, кот пломбируются. На них д б указано: «Верх. Осторожно. Острозаразный материал». Прилагаемое направление пишут простым карандашом, чтобы текст его не размылся и не обесцветился при дезинфекции. В направлении указываются вид материала, дата и место его взятия, фио и возраст больного, клинико-эпидем сведения и предполагаемый диагноз, цель исслед. Доставка материала в лаб должна производиться на спец транспорте с нарочным с соблюдением строгого противоэпид режима, уст соответствующими инструкциями. В лаб возбуд чумы м б обнаружены путем исслед мазков в световом или люминесцентном микроскопе. Этот метод позволяет дать предварительное заключение уже через несколько ч. При выращивании возбуд чумы на пит средах учитывают характер роста на бульоне и вид колоний на плотных средах, биохим активность микробов, их способность агглютинироваться противочумной сывороткой и растворяться (лизироваться) чумным бактериофагом. Выделение культуры чумной палочки явл бесспорным доказательством чумы. Окончательный ответ выдается через 48 ч от начала исслед. В 1ых случаях исслед на чуму производится биологич проба на морских свинках и белых мышах. Если во введенном материале содержались возбуд чумы, животные должны обязательно погибнуть не позднее 3—9 дней после их заражения при явлениях, характерных для чумы грызунов.
При необход для бактериологич исслед м б направлены кусочки органов трупов лиц, погибших от заб, подозрительных на чуму, грызуны и их трупы, собранные с грызунов блохи. Плотные полотняные мешки с грызунами (для сохр блох) помещаются в метал ведра с крышками и доставляются в лаб на специально выделенном транспорте.
Методы, основанные на обнаружении антител к чумным микробам, м б использованы только для ретроспективного подтверждения диагноза у лиц, уже перенесших заболевание.
Лечение. Испол а/б: стрептомицин, тетрациклин, левомицетин, рифампицин. Кроме этого испол противочумный χ-глобулин, бактериофаг. При осложнениях применяют пенициллин, сульфаниламиды.
Проф. Общая проф - ранняя диагн чумы, уничтожение грызунов - дератизация, уничтожение, блох - дезинсекция, карантин, охрана границ от заноса чумы и т.д. Специфич проф проводится живой вакциной EV, которой иммунизируют работников противочумных станций, при опасности заражения чумой (при появлении больного чумой или в отношении лиц, проживающих в природных очагах чумы). Иммунитет держится 1 год.
Механизмы передачи инф: Контактный (пути – половой, непрямой контактный и трансфузионный);
Вертикальный (путь – трансплацентарный). Входные ворота: слиз оболочки пол органов, рот полости, кожа с нарушением целостности и т.д. Инкубац период – 3-4 нед (21-24 д, max 90 д). Возбуд размножается во входных воротах и регионарных лимфатических узлах.
Патогенез и клинические особенности.
I. Первич сифилис: в месте внедрения образуется твердый шанкр (от франц. chancre – язва) – безболезненная язва с плотным основанием, отмечается регионарный лимфаденит. Первич период длится 6-7 нед и делится на 2 фазы: 1 фаза (1ые 3 нед) – первичные серонегативный сифилис; 2 фаза (с 4 нед) – первич серопозитивный сифилис.
II. Вторич сифилис (фаза генерализованной спирохетемии): наступает через 6 нед после появл тверд шанкра и продолжается 3-6 л, по лимфотич сосудам попадают в кровь и поражают внутр органы и нс. Характерный симптом – розовато-красные папулезно-розеолезные и пустолезные высыпания (сифилиды) на коже (вторич свежий сифилис). Больной в этот период особенно заразен – Тreponema pallidum находится в высыпаниях, слюне, сперме и т.д. На высоте иммун ответа бол-во спирохет погибает, что обуславливает периодическое исчезновение высыпаний (латентный период), а часть спирохет образует цисты, сохраняющ в стенке кровеносных сосудов, лимфатич узлах и внутр органах. При снижении напряженности иммунитета возвращаются в вегетативные формы и высыпания появляются вновь (вторичный рецидивирующий сифилис). III. Третичный период (висцеральный сифилис): развивается через 3-4 г при отсутст лечения, во внутр органах появляются специфич гранулемы – гуммы (от лат. gummi – камедь), склонные к распаду и рубцеванию. Поражается костно-хрящевая ткань (н, перегородка носа), стенки крупных сосудов. Развивается ГЗТ. Продолжит периода – 8-20 л. Больной малозаразен для окружающих, и серологич р-ции м б отрицат. IV. Четвертичный период (нейросифилис): через 8-15 л развивается специфич поражение ЦНС (прогрессирующий паралич, спинная сухотка, сифилис мозга). В этот период в спинномозговой жидкости обнаруживают высокие титры специфич антител. Инфицир плода от больной матери в 25% случаев приводит к выкидышам и в 75% – развивается врожденный сифилис. Различают: ранний врожденный сифилис – клинич симптомы появл сразу после рождения (папулезно-розеолезные высыпания, сифилитич пузырчатка, остеохондриты, поражения внутр органов и н с (менингиты, энцефалиты); поздний врожденный сифилис (в возрасте 5 лет и старше) – характеризуется триадой Хетчинсона: поражение глаз (кератит), «бочкообразные зубы», глухота, искривление большеберцовых костей в виде «саблевидных голеней».Иммунитет. Постинфекционный иммунитет – клеточ и гуморал, нестерильный, непродолжит (возможны повтор заб), развивается ГЗТ.
Микроскопич исслед. Проводят при первич сифилисе во вр появл тв шанкра. Материал для исслед: отделяемое шанкра, содержимое регионарных лимфатич узлов, из кот готовят препарат «раздавленная» капля и исслед в темном поле. При полож результате видны тонкие извитые нити длиной 6—14 мкм, имеющие 10—12 равномерных мелких завитков правильной, формы. Для бледной трепонемы характерны маятникообразные и поступательно-сгибательные движения. При развитии поражений на слиз оболочке рта при вторич сифилисе, а также при локализации тв шанкра в полости рта приходится дифференцировать бледную трепонему от сапрофитных трепонем, являющ представит нормальной микрофлоры. В этом случае решающее диагностич значение имеет обнаружение типичных трепонем в пунктате регионарных лимфатич узлов.
Серодиагностика. Реакцию Вассермана ставят одновременно с 2 антигенами: 1) специфич, содержащим антиген возбуд— разрушенные ультразвуком трепонемы; 2) неспецифич — кардиолипиновым. Исслед сыворотку разводят в соотношении 1:5 и ставят РСК по общепринятой методике. При полож р-ции наблюдается задержка гемолиза, при отрицат—происходит гемолиз эритроцитов; интенсивность реакции оценивается соответственно от ( + + + + ) До ( —). 1ый период сифилиса явл серонегативным и характ отриц р-цией Вассермана. У 50 % больных р-ция становится положит не ранее чем через 2—3 нед после появл тв шанкра. Во 2ом и 3ем периодах сифилиса частота полож р-ций достигает 75— 90 %. После проведенного курса лечения р-ция Вассермана становится отриц. Параллельно р-ции Вассермана ставится р-ция микропреципитации с неспецифич кардиолипиновым антигеном и исслед инактивированной сывороткой крови или плазмой. В лунку на пластине из плексигласа (или на обычное стекло) наносят 3 капли сыворотки и добавляют 1 каплю кардиолипинового антигена. Смесь тщательно перемешивают и учитывают результаты. Полож р-ция е сывороткой крови больного сифилисом характ образованием и выпадением хлопьев разной величины; при отриц результате наблюдается равномерная легкая опалесценция.
РИФ — реакция непрямой иммунофлюоресценции — явл специфич при диагностике сифилиса. В кач-ве антигена испол взвесь тканевых трепонем. Испол р-ция РИФ_200. Сыворотку больного инактивируют так же, как для р-ции Вассермана, и разводят в соотношении 1:200. На предметные стекла наносят капли антигена, высушивают и фиксируют 5 мин в ацетоне. Затем на препарат наносят сыворотку больного, через 30 мин промывают и высушивают. След этапом явл обработка препарата флюоресцирующей сывороткой против глобулинов чела. Изучают препарат с помощью люминесцентного микроскопа, отмечая степень свечения трепонем.
РИТ—реакция иммобилизации трепонем — также явл специфич. Живую культуру трепонем получают при культивировании в яичке кролика. Яичко измельчают в спец среде, в кот трепонемы сохр подвижность. Ставят р-цию след обр: взвесь ткан (подвижных) трепонем соед в пробирке с исслед сывороткой и добавляют свежий комплемент. В 1 контрольную пробирку вместо исслед сыворотки добавляют сыворотку здорового чела, в др — вместо свежего комплемента добавляют инактивированный — неактивный. После выдерживания при 35 °С в анаэробных условиях (анаэростат) из всех пробирок готовят препарат «раздавленная» капля и в темном поле определяют количество подвижных и неподвижных трепонем.
Микробиолог диаг. Испол бактериоскоп и серологич методы (в зависимости от стадии заб), а также ПЦР. Бактериоскопич исслед проводят при первич сифилисе и в период высыпаний при вторич сифилисе. Материал для исслед служат отделяемое тверд шанкра, пунктаты лимф узлов, материал из кожн высыпаний.
Серологич исслед проводится комплексом серологич р-ций, среди кот различают отборочные неспецифич тесты с кардиолипиновым антигеном, применяемые для обследования населения на сифилис, и испол трепонемальный антиген диагностические тесты, кот подтверждают диагноз. Серологич диаг применяется для подтверждения клинич диагноза сифилиса, постановки диагноза скрытого сифилиса и контроля за эффективностью лечения.
К отборочным тестам относится р-ция микропреципитации или ее аналоги: VDRL (Veneral Disease Research Laboratory), RPR (Rapid Plasma Reagin), флокуляционные тесты и РПГА с кардиолипиновым антигеном.
Отборочные тесты с кардиолипиновым антигеном в колич-ном варианте постановки испол также для контроля эффективности лечения.
Диагност тесты явл высокочувствит и высокоспецифич - ИФА, РПГА, РИФ (непрямая), иммуноблоттинг.
В этих р-циях в кач-ве антигена испол УЗ-экстракт трепонем, выращенных в яичке кролика.
Из молекулярно-биологических методов чаще всего испол ПЦР.
В иммунном ответе орг приним участие как клет, так и гуморал механизмы (синтез специфич антител). Появл противосифилитических антител происх в соответствии с общими закономерностями иммунного ответа: вначале вырабатываются IgM, по мере развития болезни начинает преобладать синтез IgG; IgA в сыворотке крови присутствуют в сравнительно небольших кол-вах. Специфич IgM к белковым антигенам появл на 2—4-й нед после заражения и исчезают у нелеченных больных примерно через 3—4 мес, при лечении раннего сифилиса — через 2 — 3 мес. Иммуноглобулины класса G возникают обычно на 4-й нед после заражения. Антитела этого класса могут сохр длит вр даже после клинич излечения больного.
Современные методы специфич серологич диагност сифилиса основаны на выявл антител разных классов.
Серологич тесты на сифилис, рекомендуемые для исслед сыворотки крови: трепонемные тесты (ТТ): -р-ция пассивн гемагглютинации (РПГА); -иммуноферментный анализ (ИФА) на антитела класса IgM, IgG; - р-ция иммунофлюоресценции (РИФ) в 2х модификациях: РИФ200 и РИФабс.
К нетрепонемным относятся: -РСКк — р-ция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном (р-ция Вассермана). -РМП (МРП) — р-ция микропреципитации крови с кардиолипиновым антигеном. -RPR (Rapid Plasma Reagins) — неспецифич антифосфолипидный (реагиновый) тест др.
Леч сифилиса происходит антибиотиками пенициллинового ряда.
Лечение. Применяются а/б пенициллинового ряда и висмутсодержащие препараты.
Профилакт. Специфич проф не разработ. Неспециф проф объединяет пропаганду зож и санитарно-просвет работу среди молодежи. Проводится обязат серологич контроль доноров, беременных и бол, поступ во все стационары, а также в гр риска (проститут, гомосекс, нарки) с целью своеврем выявл и эффектив леч бол сиф.
Лептоспироз – острое природно-очаговое инфекц заб, характеризующееся интоксикацией, волнообразной лихорадкой, поражением кровеносных капилляров почек, печени, ЦНС, сопровождающееся желтухой и гемморагич синдромом.
Таксономия. Порядок – Spirochaetales Сем – Leptospiraceae Род – Leptospira (от греч. leptos – тонкий, spira – спираль) Виды – L. interrogans (патогенные для чела и животных) L. biflexa (сапрофитные) .
Морфология. Тонкие извитые нити, размеры 6-20х0,1 мкм; с 20-40 мелкими первич завитками, первич завитки тесно сжаты, при обычном увеличении не различимы (видны в электронном микроскопе), это придает им в мазке вид «четок» или «нитей жемчуга»; имеют вторич завитки на концах, придающие им S- или С-образную форму в зависимости от направления загнутых концов; спор, капсул не имеют; с обоих концов отходят по два периплазматических жгутика, очень подвижны. Цист не образуют.
Тинкториальные св-ва. Плохо окрашиваются анилиновыми красителями, грам-, по РомановскомуГимзе окрашиваются в розовый цвет, при импрегнации серебром по Морозову – коричневые или черные, изучаются с помощью темнопольной микроскопии.
Культуральные св-ва. Аэробы или микроаэрофилы, оптимальная т культивирования 28-300С, рН 7,2-7,4, длит – 3-7 дней. Не прихотливы к пит средам (в природе живут в воде), но требуют повышенной влажности сред (гидрофилы). Для культивирования испол жид, полужид и плот среды с добавлением кроличьей сыворотки (н, водно-сывороточная среда Уленгута, фосфатно-сывороточная среда). На плот и полужид пит средах растут в нескольких мм от поверхности в виде бесцветных плоских дисков. При росте в жид пит средах визуального изменения не вызывает (о результатах роста судят по данным микроскопии в темном поле). Биохим св-ва: малоактивны (каталазо-, оксидазо+). Антигенная структура. Сложная, по хим составу выделяют полисахаридные, липидные, белковые антигены (антигенную структуру изучают в РМАЛ). Известны более 200 сероваров, объединенных в 25 серогрупп (более 100 сероваров патогенны для чела). В Кировской обл встр серовары: L.рomona, L.grippotyphosa, L.iсterohaemorrhagia. Факторы патогенности. Изучены недостаточно.
Токсины. Обнаружены эндотоксино-и экзотоксиноподобные в-ва: Эндотоксин – вызывает общую интоксикацию, кровоизлияние за счет повыш проницаемости сосудов. Токсическое в-во белковой природы – обладает цитотоксическим д-вием. Гемолизин обусловливает гемоглобинурию, желтуху, анемию. Ферменты патогенности: фибринолизин, плазмокоагулаза. Структурные и хим компоненты кл: адгезины, высокая подвижность за счет жгутиков. Резистентность. Относительно устойчивые. В воде открытых водоемов сохр до 1 мес (на длит сохр в воде решающее значение оказывают рН среды, со сниж рН продолжит выживания уменьшается), в замороженном состоянии переживают мес, а при быстром замораживании (-700С) – годы. Чувствительны: к нагреванию (при 56-600С погибают через 30 минут, 1000C – мгновенно), к высушиванию, никим рН, к дез. Р-рам (быстро погибают под воздействием хлорсодержащих р-ров), к УФО, к антибиотикам (пенициллин, тетрациклин, левомицетин).
Эпидемиология. Зооноз. Ист инфекции и основной резервуар лептоспир в природе – различные виды мелких млекопитающих, особенно грызуны (хронич носители лептоспир, выделяют с мочой). Механизм передачи инфекции: Урино-оральный (пути – водный – при употреблении для питья, контактный – при купании, уходе за больными животными, забое, разделке туш и алиментарный – чаще мясо и молоко). Носит профессиональный характер. Сезонность – весенне-летняя (покосные вспышки).
Входные ворота: поврежденная кожа (достаточно экскориации), неповрежденные слизистые (ЖКТ, глаз, мочепол органов). Патогенез и клинич особенности. В патогенезе (по К.Н.Токаревичу, 1982 г.) различают 5 фаз: I фаза (7-20 дней) – инкубационная, внедрение возбуд в орг, благодаря активному движению быстрое проникновение в лимфоузлы и кровь – первич бессимптомная бактериемия и диссеминация возбуд. II фаза (1 нед заб) – вторич бактериемия, проникновение в органы и тк (в основном паренхиматозные – печень, почки, легкие, оболочки мозга и т.д.), где возникают воспалительные и дегенеративные изменения. Клинически – резкое повышении т (38- 400С), лихорадка, сильная голов боль, мышеч боль (особенно в икроножных мышцах). III фаза (2 нед заб) – токсическая (максимальное развитие токсемии). Поражение продуктами метаболизма лептоспир капилляров – капилляротоксикоз. Развиваютя: Геморрагического синдрома (гемморагии на коже, слизистых, внутр органах). Желтуха (обусловлена гемолизом и некротическими изменениями печеночной паренхимы). Нарушение мочеобразования и мочевыделения (повреждается эпителий почечных канальцев, коркового и подкоркового в-ва). Менингит (накопление лептосир в СМЖ). IV фаза (3-4 неделя) – формирование нестерильного иммунитета, нарастание антител в крови, но возбудитель может длительно сохраняться в почках. V фаза (4-5 неделя) – освобождение организма от возбудителя.
Эпидемич возвратный (вшивый) тиф – это острая трансмиссивная инф, проявляющ рецидивирующими приступами лихорадки и общей интоксикацией.
Таксономия. Порядок – Spirochaetales Семейство – Spirochaetaceae Род – Borrelia Вид – Borrelia recurrentis Морфология. Спиралевидные бактерии размерами 0,3-0,6х3-18 мкм; имеют 3-10 неравномерных крупных первичных завитков; концы заострены; очень подвижны за счет 7-30 периплазматических жгутиков на каждом конце кл, кот обвиваются вокруг тела; спор и капсул не образуют. сгибательные вращательные и поступат движения за счет 7-30 фибрилл, на каждом конце кл, кот обвиваются вокруг тела. и частично перекрываются в середине орг с фибриллами, начинающимися от другого конца. Спор и капсул не образуют.
Тинкториальные св-ва. Грам-, хорошо окрашиваются анилиновыми красителями, особенно после протравки фенолом, по Романовскому-Гимзе – в синефиолетовый цвет.
Культуральные св-ва. Строгие анаэробы, оптимальная т 28-350С, рН 7,2-7,4. Требовательны к пит средам – испол среды с добавлением крови, сыворотки, асцитической жидкости, свернутого яичного желтка и ф-ров роста (длинноцепочечные жирные к-ты, аминок-ты и вит). Но при культивировании в пит средах боррелии утрачивают патогенность. Поэтому испол культивирование в курином эмбрионе и в орг восприимчивых животных (сирийских хомячках). Биохимические св-ва: малоактивны.
Антигенная структура. Слабо изучена, во время заб строение антигенов изменяется за счет внутригеномных рекомбинаций. Выделяют: Поверхностный белковый антиген (белки наружной мембраны) – встречается у всех боррелий. Вариантоспецифические антигены – характерны только для Borrelia recurrentis. Ф-ры патогенности. 1. Эндотоксин. 2. Адгезины (белки наружной мембраны). 3. Высокая подвижность. Резистентность. Во внешней среде малоустойчивы. Чувствительны к нагреванию (при 500С погибают в течение 20-30 мин), УФО, а/б (пенициллинового ряда, тетрациклин, левомицетин). В почве и воде при низкой т могут сохр до 2 месяцев.
Эпидемиология. Антропоноз. Ист инфекции – больной человек. Переносчики – платяная, реже головная вошь.
Механизм передачи инф: Трансмиссивный (пути – через поврежденную при укусе кожу или контаминационный – при втирании гемолимфы раздавленной вши в ранку от укуса). Инкубац период – 3-10 д.
Патогенез и клинич особенности. Через кожу боррелии попадают в лимфатич сис-му, захватываются мононуклеарными фагоцитами, размножаются, затем поступают в кровь, где частично погибают с высвобождением эндотоксина, кот обуславливает общую интоксикацию, озноб, лихорадку (первич лихорадоч период длит 7-10 дней), а также действует на кл эндотелия сосудов (геморрагические инфаркты в печени, селезенке, возможен менингит). Через неск д вырабатываются антитела (лизины), боррелии гибнут, и лихорадка прекращается (период нормализации т длит 4-10 д). Часть боррелий сохр и дает новое поколение, нечувствительное к образовавшимся лизинам. При их выходе в кровеносное русло начинается вторичный лихорадочный период. Но одновременно образуются лизины, растворяющие боррелии второй генерации. Такие приступы, вызванные новыми генерациями боррелий, могут повторяться до 7-10 (и даже 20) раз.
Иммунитет. Постинфекционный иммунитет – гуморальный, нестойкий, непродолжительный.
Специфическая профилактика и лечение не разработаны.
Лаб диаг: · основ метод – микроскопич (исслед кровь в период лихорадки; костн мозг – в период ремиссии), окраска по методу Романовского-Гимза. · биологич метод – заражают белых мышей или молодых крыс, через 2-4 дня проводят исслед (морские свинки не чувствительны к B.recurrentis); · серологич метод: р-ция лизиса, РСК, р-ция иммобилизации боррелий сывороткой больного, р-ция нагрузки боррелий тромбоцитами.
Препараты для леч: специфич- нет; неспецифич- а/б пенициллинового, тетрациклинового ряда, левомицетины.