Материал: Острые лейкозы (рекомендации) 2010 года

Протокол лечения Ph негативных острых лимфобластных лейкозов взрослых «ALL 2009»

Диагностика ОЛЛ

Морфологическая диагностика ОЛЛ

Диагноз острого лимфобластного лейкоза устанавливается при обна ружении в пунктате костного мозга 25% и более бластных клеток, мор фологически и цитохимически характеризуемых как лимфобласты.

Следует подчеркнуть, что классификация FAB ОЛЛ сейчас не имеет практической ценности, поскольку для определения терапевтической тактики при ОЛЛ необходимы иммунофенотип бластных клеток, их ци тогенетическая характеристика. Тем не менее L3 морфология бластных клеток (вакуолизация, базофилия цитоплазмы, выраженный атипизм) позволяет предположить В зрелый фенотип ОЛЛ.

Цитохимическая характеристика бластных клеток при ОЛЛ

Цитохимическая характеристика бластных клеток представлена в табл. 4.

Таблица 4. Цитохимическая характеристика бластных клеток при ОЛЛ

Иммунофенотипические варианты ОЛЛ

Иммунофенотипические варианты ОЛЛ представлены в табл. 5. Больные с иммунофенотипическим вариантом В зрелого ОЛЛ тера

пии по протоколу «ALL 2009» не подлежат.

Цитогенетическая и молекулярная характеристика ОЛЛ

Транслокация t(9;22)/BCR ABL определяется в среднем у 25% взрос лых больных.

При обнаружении t(9;22)/BCR ABL больной включается в исследова ние по протоколу «Ph+ALL 2012».

Если возможности провести цитогенетическое или молекулярное ис следование нет, то при наличии результатов иммунофенотипирования бластных клеток больной может быть включен в исследование.

301

Острые лейкозы

Таблица 5. Иммунофенотипические варианты ОЛЛ

Иммунологические маркеры

Сокращения: cyt — цитоплазматический маркер; s — поверхностный маркер.

* Синонимы раннего пре В ОЛЛ: про В ОЛЛ, пре пре В ОЛЛ.

Мониторинг минимальной остаточной болезни

Мониторинг минимальной остаточной болезни (МОБ) осуществля ется только в тех клиниках, где есть возможность для всех больных про водить первоначальную диагностику и последующий мониторинг реа ранжировки генов IgH и TCR с помощью ПЦР с последующим направ лением образцов костного мозга или выделенной из него ДНК в лабора торию ГНЦ МЗСР.

Независимо от возможностей мониторинга МОБ больной вклю чается в исследование и ему проводится терапия по программе «ALL 2009».

Поражение ЦНС

Исходное поражение ЦНС имеется при следующих показателях:

обнаружение в СМЖ при цитологическом исследовании цитоза бо лее 15/3, то есть более 5 клеток в 1 мкл (СМЖ с примесью крови и на личием бластных клеток не считается признаком первичной нейро лейкемии);

выраженные клинические неврологические и менингеальные сим птомы, обусловленные ОЛЛ;

образования в головном мозге по данным КТ или МРТ;

наличие паралича черепно мозговых нервов.

Эти больные на протяжении всей терапии должны получать дексаме тазон как базисный глюкокортикоидный гормон.

Облучение ЦНС предусмотрено при локальном опухолевом пораже нии, а также при невозможности интратекального введения препаратов.

302

Протокол лечения Ph негативных острых лимфобластных лейкозов взрослых «ALL 2009»

Поражение средостения

У всех больных с опухолевой массой в переднем средостении необхо димо мониторировать размеры образования в ходе лечения с помощью КТ и/или УЗИ. При наличии большой опухолевой массы в переднем средостении в дебюте заболевания и остаточной опухолевой массы перед поддерживающей терапией необходимо проведение лучевой терапии в суммарной дозе 36 Гр. Если больному предусмотрено проведение ауто логичной ТКМ, то облучение выполняется только после транспланта ции. Если больному предусмотрено проведение аллогенной ТКМ, то об лучение не проводится.

Алгоритмы сбора образцов костного мозга

При установлении диагноза ОЛЛ с помощью морфоцитохимического исследования образец костного мозга должен быть направлен на:

1.Иммунофенотипирование (1 пробирка: 1 мл костного мозга) — обяза'

тельно.

2.Молекулярный анализ на BCR/ABL (1 пробирка: 2 мл костного моз га + 1 мл цитрата натрия) — обязательно.

3.Цитогенетическое исследование (2 пробирки по 1,5 мл костного моз га) — желательно.

4.Молекулярный анализ на МОБ (1 пробирка: 2 мл костного мозга + 1 мл цитрата натрия) — желательно.

Контрольные точки исследования

1.Морфологическое исследование пунктата костного мозга: в момент диагностики, на 8 й день лечения, на 36 й и 70 й дни индукции, после курсов консолидации II, III и V, затем один раз в 3 месяца или при по дозрении на рецидив.

Вслучае обнаружения от 5 до 15% бластных клеток при морфологиче ском исследовании костного мозга на 70 й день индукции необходимо повторное исследование пунктата в течение недели на фоне восстано

вившегося кроветворения (количество нейтрофилов в периферической крови — 1,5 × 109/л, тромбоцитов — 100 × 109/л).

2.Иммунофенотипирование: в момент диагностики, в момент рецидива. При определении аберрантной экспрессии антигенов на опухолевых клетках может выполняться иммунофенотипический мониторинг МОБ.

3.Молекулярный анализ на химерный транскрипт BCR/ABL: в момент диагностики, в момент рецидива.

4.Стандартная цитогенетика: в момент диагностики, при наличии ано малий — на 70 й день, перед первым курсом поддерживающей тера пии, при снятии с лечения. Молекулярно генетическое исследование методом FISH (при обнаружении аномалий, к которым существуют зонды) можно выполнять чаще — на 36 й день, на 70 й день, перед первым курсом поддерживающей терапии, 1 раз в 6 месяцев во время поддерживающей терапии, при снятии с лечения.

303

Острые лейкозы

5.Молекулярный анализ на реаранжировку генов IgH и TCR для мони торинга МОБ: в момент диагностики, на 70 й день индукции, на 133 й день лечения (после курса консолидации III), на 23 й неделе ле чения (после курса консолидации V).

Выделение ДНК

Материалом для первичного анализа клональных перестроек вариа бельного региона генов IgH и TCR, а также для мониторинга МОБ слу жит геномная ДНК, выделенная из образцов костного мозга.

I. Взятие материала.

В транспортную пробирку взять костный мозг больного в объеме 2,0 мл с 1,0 мл раствора цитрата натрия. Для предотвращения свертыва ния перемешать.

Доставить образец костного мозга необходимо не позднее чем через 24 часа от момента получения пунктата костного мозга. Температура при транспортировке образца должна быть +4°С (не замораживать!).

II.Выделение ДНК:

1)для выделения ядросодержащих клеток костный мозг смешать в со

отношении 1:10 с 0,8% раствором хлорида аммония (NH4Cl) с целью селективного лизиса эритроцитов;

2)выдержать 20 минут во льду;

3)осадить нелизированные ядросодержащие клетки центрифугирова

нием со скоростью 1500 об/мин в течение 20 мин при температуре +4°С;

4)супернатант вылить, а осадок ресуспендировать в 0,5 мл раствора STE (NaCl — трис — ЭДТА) и перенести в пробирку Эппендорф объ емом 1,5 мл;

5)к ресуспендированному осадку добавить 5 мкл раствора протеина

зы К (20 мг/мл) и 50 мкл раствора додецилсульфата натрия (10%), пе ремешать и инкубировать в течение 12 часов при температуре 37°С или 3—4 часа при 55°С;

6)добавить в пробу 0,5 мл фенола, насыщенного буфером трис — HCl с pH 8,0; полученную смесь интенсивно суспендировать в течение 5 мин;

7)затем разделить фазы с помощью центрифугирования со скоростью 12 000 об/мин в течение 10 мин при комнатной температуре;

8)верхнюю водную фазу отобрать в отдельный Эппендорф объемом 1,5 мл;

9)добавить 0,5 мл смеси хлороформ/изоамиловый спирт (24:1); полу ченную смесь суспендировать в течение 5 мин;

10)затем разделить фазы с помощью центрифугирования со скоростью 12 000 об/мин в течение 10 мин при комнатной температуре;

11)верхнюю водную фазу отобрать в отдельный Эппендорф объемом 1,5 мл;

12)для осаждения ДНК добавить 3М ацетат натрия (1/10 объема) и 96% этанол (2,5 объема); выдерживать 2 часа при температуре –20°С;

304

Протокол лечения Ph негативных острых лимфобластных лейкозов взрослых «ALL 2009»

13)для получения осадка ДНК пробирку центрифугировать со скоро стью 12 000 об/мин в течение 10 мин при комнатной температуре;

14)полученный осадок промыть 80% этанолом (осадок + 0,5 мл 80% эта нола) и центрифугировать 2 мин со скоростью 12 000 об/мин;

15)спирт слить;

16)с целью длительного хранения ДНК к осадку добавить 0,6 мл 80% эта

нола; хранить при температуре –20°С.

Температура при транспортировке ДНК костного мозга может состав лять от –20°С до +4°С.

5. Группы риска

Группа стандартного риска

1.Исходное число лейкоцитов ниже 30 × 109/л для ОЛЛ из В предшест венников.

2.Исходное число лейкоцитов ниже 100 × 109/л для ОЛЛ из Т предшест венников.

3.Иммунофенотипический вариант: общий В ОЛЛ, пре В ОЛЛ, тими ческий Т ОЛЛ.

4.Активность ЛДГ ниже 2 норм.

5.Отсутствие транслокации t(4;11).

6.Процент бластных клеток в костном мозге на 8 й день лечения (после предфазы с глюкокортикоидами) менее 25%.

7.Ремиссия на 36 й день лечения (на момент завершения первой фазы индукции).

Группа высокого риска

1.Исходное число лейкоцитов выше 30 × 109/л для ОЛЛ из В предшест венников.

2.Исходное число лейкоцитов выше 100 × 109/л для ОЛЛ из Т предше ственников.

3.Иммунофенотипический вариант: ранний пре В ОЛЛ, ранний Т ОЛЛ и зрелый Т ОЛЛ.

4.Активность ЛДГ выше 2 норм.

5.Наличие транслокации t(4;11).

6.Процент бластных клеток в костном мозге на 8 й день лечения (после предфазы с глюкокортикоидами) 25% и более.

7.Отсутствие ремиссии на 36 й день лечения (на момент завершения первой фазы индукции).

Каждого критерия в отдельности достаточно для того, чтобы данный

больной был отнесен к группе высокого риска.

Приведенные критерии используются не для модификации терапев тической тактики в ходе терапии (она унифицирована в данном исследо вании), а для решения вопроса о необходимости выполнения ТКМ в первой ремиссии.

305