Материал: семиотика++для+студов+20г

Метод цитогенетического исследования

(кариотипирование)

Взятие венозной крови 1-2 мл (лимфоциты периферической крови)

Культивирование клеток 48 – 72 часа

Применение в качестве митогена (стимулятора клеточного деления) выделенного из семян фасоли мукополисахарида фитогемагглютинина (ФГА)

Использование колхицина (колцемида) - ингибитора образования

митотического веретена, останавливает деление клеток на стадии метафазы

Гипотонический шок - раствор солей калия или натрия, вследствие разницы осмотического давления вызывают их набухание и разрыв межхромосомных связей

Фиксация клеток с использованием ледяной уксусной кислоты и этанола (метанола) в соотношении 3:1 (фиксатор Карнуа), способствует сохранению структуры хромосом

Окрашивание

Собственно микроскопия с компьютерной обработкой

FISH – флуоресцентная гибридизация in situ

FISH - метод флуоресцентного окрашивания отдельных участков или целых хромосом, основанный на способности хромосомной ДНК образовывать устойчивые гибридные молекулы с ДНК(РНК)- зондами на препаратах фиксированных клеток

Метод позволяет определить местоположение последовательности ДНК или РНК в клетке, клеточном ядре или на хромосомах

FISH – возможности метода

FISH позволяет выявлять:

-Анеуплоидии

-Делеции

-Инсерции

-Транслокации

-Амплификации

генов

-Микроделеции

mFISH

Сравнительная геномная гибридизация (CGH)

Comparative Genomic Hybridization

На микрочипах (array)

Используется для картирования и клонирования генов вовлеченных в канцерогенез

Определение районов хромосом, которые делетируются или амплифицируются в определенном типе опухоли

Районы делеции – супрессоры опухолевого

роста

Районы амплификации – содержат онкогены

Компьютерный анализ хромосом