СОДЕРЖАНИЕ
Коротка ботанічна характеристика
Хімічний склад Грициків звичайних
Застосування Грицика звичайного у медицині
Застосування Грицика звичайного у народному господарстві
Заготівля сировини Грициків звичайних
Характеристика ліпофільних речовин грициків звичайних
Отримання ліпофільного екстракту
Вивчення хімічного складу ліпофільній фракції
Методи ідентифікації флавоноїдів
Кількісне та якісне визначення біологічно активних речовин ліпофільній фракції
Кількісне визначення флавоноїдів
Дослідження екстракційних препаратів Грицика звичайного
Вивчення екобіотічних особливостей Грицика звичайного
Визначення числових показниках ліпофільної фракції з рослинного матеріалу грициків звичайних
Для вибору оптимальних строків заготівлі трави грициків вивчена динаміка накопичення флавоноїдів в різних органах рослини, по фазах вегетації і залежно від способу сушіння сировини. Вміст флавоноїдів визначали за методикою розробленою для сировини. Результати дослідження представлені в таблиці 3.3.
Дослідження показали суттєві відмінності органів грициків за змістом суми флавоноїдів. Максимальна кількість флавоноїдів спостерігається в квітках: 2,98 ± 0,16% і незрілих плодах: 1,11 + 0,06%; найменшу кількість флавоноїдів в стеблах: 0,47 ± 0,02%.
Протягом вегетаційного періоду вміст флавоноїдів зростає досягаючи максимуму в фази цвітіння і початку плодоношення: 1,29 ± 0,03%, а потім знижується і становить: 1,08 ± 0,02%. Оптимальними термінами збору трави грициків є фази цвітіння і початку плодоношення.
Дослідження щодо впливу способу сушіння на вміст флавоноїдів у сировині показали, що повітряно-тіньова сушка при температурі 18 ° -20 ° С у порівнянні з штучної при температурі 50 ° -б0 ° С призводить до зниження кількості флавоноїдів сировину до 2%.
Якісний склад органів грициків і сировини за фазами вегетації аналізували по люмінесцептно-хроматографическим характеристикам методом кругової хроматографії на папері (таблиці 3.4).
На хроматограмах трави, зібраної в оптимальні терміни, виявляється 5 зон речовин фенольної природи розрізняються за забарвленням, розташуванню та інтенсивності флюоресценції. Зони 2, 3, 4 при обробці парами 25% амонію гідроксиду флюоресцируют жовто-зеленим і відповідають флавоноидам. Зона 4 з Rt = 0,64 ідентифікована з рутином.
Кругові хроматограми органів рослини і фаз вегетації відображають динаміку накопичення флавоноїдів, зміни якісного складу і узгоджуються з даними за кількісним вмісту флавоноїдів [32; 33].
Таблиця 3.4. Люмінесцентно-хроматографічна характеристика різних органів Грициків звичайних
|
орган |
№ зон |
|||||||||||||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
||||||||||||
|
R1 |
УФ |
NH3 |
R1 |
УФ |
NH3 |
R1 |
УФ |
NH3 |
R1 |
УФ |
NH3 |
R1 |
УФ |
NH3 |
||
|
стебло |
0,17 |
Коричнева |
Жовто-зелена |
0,45 |
Т. коричнева |
Т. жовто-зелена |
0,64 |
Т. жовта |
Жовто-зелена |
0,78 |
Синьо-блакитна |
блакитна |
||||
|
аркуш |
0,21 |
темна |
Жовто-зелена |
0,40 |
Т.коричнева коричнева |
Т.жовто-зелена |
0,62 |
Т. -жовта |
Жовто-зелена |
0,72 |
Синьо-блакитна |
Блакитнувато-зелена |
0,89 |
Синьо-фіолетова |
Синьо-блакитна |
|
|
квітка |
0,17 |
Синьо-фіолетова |
Синьо-блакитна |
0,35 |
Темна |
Жовто-зелена |
- |
0,62 |
Т. -жовта |
Жовто-зелена |
0,8 |
Синьо-блакитна |
блакитна |
|||
|
плід |
- |
- |
0,43 |
Т. коричнева |
Т. жовто-зелена |
0,62 |
Т. жовта |
Жовто-зелена |
0,72 |
Синьо-блакитна |
Блакитнувато-зелена |
Кількість зон флавоноїдів та інтенсивність їх флюоресценції максимальна у трави, квіток і листя, в фази: цвітіння і початку плодоношення, що підтверджує раціональні строки заготівлі сировини.
Враховуючи, що трава Грицика звичайного використовується у вигляді настою, зборів та рідкого екстракту, а також необхідність системного підходу та уніфікації методів аналізу лікарської рослинної сировини, проведені дослідження екстракційних препаратів по вмісту флавоноїдів із застосуванням методики розробленої для сировини і модифікованої нами для настою і рідкого екстракту і субстанції «сухий екстракт» [30].
Результати досліджень представлені в таблиці 3.5.
Таблиця 3.5. Зміст флавонідів в екстракційних формах
|
Сировина, екстракційна форма |
Зміст флавоноїдів, % |
Вихід флавоноїдів із сировини, % |
Залишкова кількість флавоноїдів у сировину, % |
|
|
Трава |
1,29±0,09 |
|||
|
Настій |
0,02±0,01 |
14,7±0,81 |
85,2±2,25 |
|
|
Рідкий екстракт |
0,32±0,03 |
25,56±0,32 |
74,44+1,13 |
|
|
Рідкий екстр.ПГФА |
0,84±0,01 |
65,53+0,70 |
34,47+0,81 |
|
|
Субстанція "сухий екст." |
0,83±0,01 |
64,61±0,36 |
35,40+0,72 |
Встановлено, що вміст флавоноїдів в настої і рідкому екстракті промислового виробництва низькі: 0,02 + 0,01% і 0,32 ± 0,03%. Велика частина флавоноїдів не виймається і залишається шроті: 85,2 ± 2,25% і 74,44 + 1,13%, відповідно.
Вивчено вплив факторів на кількісний вихід флавоноїдів із сировини в рідкий екстракт і підібрані оптимальні умови його отримання: ступінь измельченности сировини 3 мм, час контакту фаз 8 годин, кількість екстракторів в батареї 4. Результати обробляли з використанням методу математичного планування. Рідкий екстракт грициків отримували методом реперколяції. Для отримання субстанції "сухий екстракт" готували 70% -ве етанольне витяг в оптимальних умовах, згущували при температурі 50-60 ° С і висушували до отримання сухої субстанції.
Вміст флавоноїдів в препаратах визначали за методикою розробленою для сировини, для аналізу брали 1 мл або 1,0 г препарату відповідного 1,0 сировини і готували розведення 1:50. Вміст суми флавоноїдів в отриманих в оптимальних умовах препаратах - рідкому екстракті: 0,84 + 0,01%, в субстанції «сухий екстракт»: 0,83 ± 0,01% (таблиця 3.5). Метрологічні характеристики свідчать, що відносна помилка методу становить: для рідкого екстракту + 3,68%, для субстанції + 3,89%.
Заготівля трави грициків проводиться в природних популяціях. Розташування основних заростей грициків в зоні антропогенного впливу збільшує ймовірність заготівлі сировини з токсичними речовинами. У зв'язку з цим вивчені екобіотіческіе особливості виду по ресурсоведческім, фитоценотических, морфологічним і та фітохімічним ознаками [31].
Грицик звичайний зустрічається практично у всіх населених пунктах обстежених районів, займає невеликі площі: 0,1-0,5 га з різною щільністю запасу сировини (таблиця 7); кількість генеративних пагонів на 1м2 коливається від 1,81 ± 0,76 до 6,13 ± 0,96 екз. / м2; маса одного модельного екземпляра (повітряно-суха маса) від 2,13 ± 0,37 до 5,04 ± 0,47г. Входить до складу разнотравних і злаково-різнотравних фітоценозів, звичайна вздовж автомобільних і шосейних доріг.
Ступінь забрудненості трави грициків важкими металами визначали у зразках сировини заготовлених в місцепроживання придорожньої зони. Проби для аналізу відбирали на відстані від 5 до 35 м від узбіччя дороги, через кожні 5 метрів. Зразки сировини проаналізовані на вміст важких металів Сu, Pb, Cd, Zn (таблиця 3.6).
Таблиця 3.6
|
Важкі метали |
Відстань від узбіччя дороги, м |
|||||||
|
5 |
10 |
15 |
20 |
25 |
30 |
35 |
||
|
Сu |
0,018 |
0,011 |
0,008 |
0,008 |
0,006 |
0,003 |
0,003 |
|
|
РЬ |
0,003 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
|
|
Cd |
0,004 |
0,0002 |
0,0002 |
0,0002 |
0,0002 |
0,0002 |
- |
|
|
Zn |
0,014 |
0,006 |
0,0055 |
0,002 |
0,0009 |
0,0007 |
0,0003 |
Встановлено, що Грицики звичайні відноситься до видів, накопичують важкі метали, вміст яких залежить віддаленості заростей грициків від узбіччя дороги. Вміст важких металів значно перевищує гранично допустимі концентрації, таких, для харчових продуктів [15].
Заготівлю трави грициків рекомендуємо проводити на відстані не ближче 25 метрів від узбіччя дороги.
Вміст важких металів у траві грициків в залежності від відстані від дороги.
Висновки
Проведений макроскопічний аналіз зразків цілісного сировини, заготовленого в Пермській області та сировини від промислових партій, а також гербарних зразках рослин зібраних в різних регіонах, дозволив включити в розділ «Зовнішні ознаки» опис верхніх стеблових листків і відрізків прикореневого розеткових листя; розміри розеткових, середніх і верхніх стеблових листків; уточнити тип плоду. Характеристика подрібненої сировини дана в загальноприйнятою редакції.
Для підтвердження автентичності цілісного і встановлення автентичності подрібненої сировини вивчали анатомічну будову надземної частини Грицика звичайного. Уточнено тип околоустьічних клітин і дана характеристика простих волосків епідермісу листка. За результатами макро- і мікроскопічного аналізів уточнені морфолого-анатомічні ознаки сировини, відредаговані розділи «Зовнішні ознаки», «Мікроскопія».
Встановлено основні показники для цілісного і подрібненої сировини.
Обґрунтований і введений показник «коренів, в тому числі відокремлених при аналізі, частин рослини, уражених борошнистою росою і пожовклого листя», не більше 3%.
Отримані результати дозволяють зробити висновок, що для грициків характерна широка норма реакції на зміни умов проживання.
Оптимальні умови існування - на поклади. Тут рослини крупніше, відрізняються великою кількістю і проективним покриттям, високою насіннєвою продуктивністю, що забезпечує краще відновлення заростей.